本文選題：人臍靜脈 + 細(xì)胞分離　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：體外建立血管內(nèi)皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?方法：取健康胎兒臍帶，采用體外酶消化法分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞中凝血因子Ⅷ的表達(dá)，免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞中鈣黏蛋白表達(dá)。 結(jié)果：(1)原代培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)為圓形、短梭形或扁平形，傳代后細(xì)胞形態(tài)與原代類似，細(xì)胞呈鋪路石樣旺盛生長(zhǎng)。(2)原代培養(yǎng)和傳代后細(xì)胞均表達(dá)凝血因子Ⅷ，但傳代后細(xì)胞凝血因子Ⅷ陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于原代培養(yǎng)（F值為7.481，P＜0.05）。（3）原代培養(yǎng)和傳代后細(xì)胞均表達(dá)鈣黏蛋白。 結(jié)論：證實(shí)體外分離培養(yǎng)的細(xì)胞為HUVEC 目的：觀察TNF-α在血管內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的作用,以探討纖維化疾病發(fā)生的新機(jī)制。 方法：取第3~5代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HUVEC，分別接種于12孔板、6孔板和6cm板中，12孔板和6孔板按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組：對(duì)照組，培養(yǎng)液不加其他刺激因素，5、10、25、50、100ng/mL TNF-α組，分別在培養(yǎng)液中加相應(yīng)終濃度TNF-α；6cm板按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組：對(duì)照組，培養(yǎng)液不加其他刺激因素，5、25、50ng/mL TNF-α組，分別在培養(yǎng)液中加相應(yīng)終濃度TNF-α。每組3個(gè)樣本。72h后倒置相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)；免疫熒光法檢測(cè)12孔板中各組細(xì)胞凝血因子Ⅷ和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)6孔板中各組細(xì)胞鈣黏蛋白、α-SMA和Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)；免疫印跡法檢測(cè)6cm板中各組細(xì)胞鈣黏蛋白、α-SMA表達(dá)。 結(jié)果：（1）對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)為圓形、短梭形或扁平型，細(xì)胞間連接緊密，5、10、25、50、100ng/mLTNF-α組隨著TNF-α濃度的增加，細(xì)胞形態(tài)逐漸由圓形、短梭形和扁平型向長(zhǎng)梭形轉(zhuǎn)變，細(xì)胞間連接減少、間隙變大。（2）TNF-α組細(xì)胞中凝血因子Ⅷ、α-SMA雙陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比值均顯著高于對(duì)照組（F值為45.009，P0.01）。（3）5、10、25、50、100ng/mL TNF-α組細(xì)胞中鈣黏蛋白mRNA表達(dá)水平逐漸降低，后4組細(xì)胞中鈣黏蛋白mRNA水平顯著低于對(duì)照組(F值為11.593，P0.05或P㩳0.01)；而α-SMA和Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)水平逐漸增高，后3組細(xì)胞中α-SMA和Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（F值分別為7.839、2.898，P0.05或P0.01）。(4)5、25、50ng/mLTNF-α組細(xì)胞中鈣黏蛋白的表達(dá)量逐漸降低，后2組水平顯著低于對(duì)照組（F值為66.551，P㩳0.05或P㩳0.01）；而α-SMA表達(dá)量逐漸增加，各組 水平均顯著高于對(duì)照組（F值為12.335，P㩳0.05或P㩳0.01） 結(jié)論: TNF-α呈明顯的濃度依賴性地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提示這可能是慢性炎癥疾病、瘢痕形成中和纖維化組織內(nèi)肌成纖維細(xì)胞的又一重要來源，促炎癥細(xì)胞因子是促進(jìn)這一轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵誘因。 目的:觀察IL-6在血管內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的作用,探討纖維化疾病發(fā)生的新機(jī)制。 方法：取第3~5代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HUVEC分別接種于12孔板、6孔板和6cm板中，12孔板和6孔板按隨機(jī)數(shù)字表法均分為6組：對(duì)照組，培養(yǎng)液中不加其它刺激因素，5、10、25、50、100ng/mLIL-6組，分別在培養(yǎng)液中加相應(yīng)終濃度IL-6；6cm板按隨機(jī)數(shù)字表法均分為4組：對(duì)照組，培養(yǎng)液中不加其它刺激因素，5、25、50ng/mLIL-6組，分別在培養(yǎng)液中加相應(yīng)終濃度IL-6。每組3個(gè)樣本。培養(yǎng)72h后倒置相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞的形態(tài)；免疫熒光法檢測(cè)12孔板中各組細(xì)胞凝血因子Ⅷ和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)6板中各組細(xì)胞鈣黏蛋白、α-SMA和Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)；免疫印跡法檢測(cè)6cm板中各組細(xì)胞黏蛋白、α-SMA表達(dá)。對(duì)數(shù)據(jù)行單因素方差分析及兩兩比較LSD檢驗(yàn)。 結(jié)果：（1）對(duì)照組細(xì)胞呈圓形、短梭形或扁平型，細(xì)胞間連接緊密；5、10、25、50、100ng/mLIL-6組細(xì)胞隨著IL-6濃度的增加，細(xì)胞形態(tài)逐漸由圓形、短梭形或扁平型向長(zhǎng)梭形轉(zhuǎn)變，細(xì)胞間連接減少、間隙增寬，細(xì)胞胞體變大、呈旋渦樣生長(zhǎng)。（2）對(duì)照組中凝血因子Ⅷ、α-SMA雙陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比值顯著低于各IL-6組（F值為79.72, P0.05或P0.01）。（3）5、10、25、50、100ng/mL IL-6組鈣黏蛋白mRNA表達(dá)水平逐漸降低，后4組鈣黏蛋白mRNA水平顯著低于對(duì)照組(F值為24.637，，P0.05或P0.01)；α-SMA和Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)水平逐漸增高，后4組α-SMAmRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（F值為23.955，P0.05或P0.01），100ng/mL IL-6組Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（F值為2.250，P0.05）。(4) IL-6組鈣黏蛋白的表達(dá)水平逐漸降低，各組表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（F值為69.822， P㩳0.01）；而α-SMA表達(dá)量逐漸增加，后2組α-SMA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（F值為5.766， P㩳0.01） 結(jié)論： IL-6呈濃度依賴性地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提示這可能是慢性炎癥疾病和瘢痕形成中纖維化組織內(nèi)肌成纖維細(xì)胞的又一重要來源，表明促炎癥細(xì)胞因子具有促纖維化效應(yīng)。
[Abstract]:Objective : To establish an experimental model of vascular endothelial cells in vitro

Methods : Human umbilical vein endothelial cells ( HUVEC ) were isolated from healthy fetal umbilical cord and cultured human umbilical vein endothelial cells ( HUVEC ) under reversed phase contrast microscope . The expression of coagulation factor 鈪

本文編號(hào)：1965208