本文選題：鮑曼不動(dòng)桿菌 + 多位點(diǎn)序列分型��； 參考：《浙江大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：碳青霉烯類(lèi)(Carbapenem)抗生素是治療由鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii)引發(fā)感染最重要的B-內(nèi)酰胺類(lèi)(β-lactam)抗生素之一。而碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌在我國(guó)各地的廣泛流行,給臨床治療與抗生素的選擇帶來(lái)極大的困難。為了制定科學(xué)、有效的防控措施,通常采用各種分子分型方法,對(duì)其進(jìn)行分子流行病學(xué)研究并明確流行趨勢(shì),為進(jìn)一步探究鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制提供基礎(chǔ)。 本研究于2009年1月至2010年12月期間在全國(guó)23個(gè)省市的64家醫(yī)院收集2197株非重復(fù)的鮑曼不動(dòng)桿菌,并選擇12種常見(jiàn)抗菌藥物開(kāi)展體外藥物敏感性試驗(yàn)。根據(jù)藥敏結(jié)果,對(duì)篩選出的808株碳青霉烯耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌應(yīng)用多位點(diǎn)序列分型(Multilocus sequence typing, MLST)方法進(jìn)行分子流行病學(xué)研究；借助. Linux服務(wù)器、DNA序列拼接與比對(duì)工具編寫(xiě)Perl腳本,實(shí)現(xiàn)對(duì)各等位基因測(cè)序數(shù)據(jù)的批量處理,并鑒定出等位基因型(Allele type)與序列型(Sequence type,ST)；應(yīng)用eBURST軟件與Bionumerics軟件對(duì)MLST數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類(lèi)分析,預(yù)測(cè)各菌株間的進(jìn)化關(guān)系。 體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,所有鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)12種臨床常用抗生素的平均耐藥率為50%～60%,而米諾環(huán)素僅有11.56%。MLST結(jié)果顯示,碳青霉烯耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的遺傳背景相對(duì)單一,共分為40個(gè)ST型(包括17個(gè)已被PubMLST數(shù)據(jù)庫(kù)收錄及23個(gè)新發(fā)現(xiàn)的ST型),其中ST92及其單位點(diǎn)變異型(Single locus variant, SLV) ST138、ST75與ST381為最主要流行的ST型。應(yīng)用eBURST軟件與Bionumerics軟件分析MLST數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)當(dāng)前中國(guó)最廣泛流行的鮑曼不動(dòng)桿菌克隆復(fù)合體(Clonal complex, CC)為CC92,該克隆復(fù)合體包括ST92、 ST138、ST75等ST型。本研究中的體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果也表明,屬于CC92的菌株較其他ST型菌株具有更高的耐藥率。 上述研究結(jié)果表明,CC92是鮑曼不動(dòng)桿菌流行最廣的克隆復(fù)合體,它在我國(guó)分布廣泛且傳播迅速,常伴隨多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的播散與流行。因此,CC92在我國(guó)的大范圍流行是導(dǎo)致鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)多種抗菌藥物耐藥率迅速上升的重要原因。 具有碳青霉烯類(lèi)抗生素水解能力的D類(lèi)β-內(nèi)酰胺酶Carbapenem-hydrolyzing class D β-lactamases, CHDLs)是不動(dòng)桿菌(Acinetobacter spp.)最常見(jiàn)的碳青霉烯酶,常介導(dǎo)其對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥。本研究主要應(yīng)用分子生物學(xué)手段,探討5種常見(jiàn)編碼CHDLs的OXA耐藥基因在不動(dòng)桿菌中的分布與耐藥表型、傳播機(jī)制之間的關(guān)系。 本研究對(duì)收集于2009年1月至2010年12月期間全國(guó)23個(gè)省市64家醫(yī)院分離的2880株不動(dòng)桿菌開(kāi)展體外藥物敏感性試驗(yàn),測(cè)定其對(duì)12種抗菌藥物的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration, MIC);并應(yīng)用PCR擴(kuò)增與測(cè)序技術(shù),對(duì)篩選出攜帶blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-25-like與blaOXA-143-like基因的不動(dòng)桿菌進(jìn)行菌種鑒定；應(yīng)用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(Pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)與Southern雜交確定OXA基因的定位；應(yīng)用質(zhì)粒抽提與電轉(zhuǎn)化確定攜帶OXA基因質(zhì)粒的可傳播性。 體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素的耐藥率約為50%。多重PCR結(jié)果顯示,攜帶blaOXA-51-like基因與blaOXA-23-like基因的不動(dòng)桿菌分別占76.3%與45.7%。而44.9%的不動(dòng)桿菌同時(shí)攜帶blaOXA-51-like基因與blaOXA-23-like基因,高達(dá)95%攜帶blaOXA-23-like基因的不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥。此外,篩查發(fā)現(xiàn)攜帶blaOXA-24-like基因、blaOXA-58-like基因與blaOXA-143-like基因的不動(dòng)桿菌分別為11株、32株與1株。Southern雜交結(jié)果顯示,攜帶blaOXA-24-like基因與blaOXA-58-like基因由質(zhì)粒編碼,其質(zhì)�？赏ㄟ^(guò)電轉(zhuǎn)化的方法導(dǎo)入受體菌,并使受體菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素的MIC值升高。而blaOXA-143-like基因無(wú)法通過(guò)上述方法檢測(cè)到,提示該基因可能位于染色體上。
[Abstract]:Carbapenem antibiotics are one of the most important antibiotic - resistant B - lactam antibiotics .

In this study , 2197 non - repetitive acinetobacter baumandii were collected from 64 hospitals in 23 provinces from January 2009 to December 2010 .
with the help of . Linux server , DNA sequence splicing and comparison with Perl script , realize batch processing of sequencing data of each allele , and identify Allele type and sequence type ( ST ) ;
The EBURST software and Bionumerics software were used to cluster the MLST data to predict the evolutionary relationship among the strains .

The results of drug susceptibility test in vitro showed that the average drug resistance rate of all kinds of clinically common antibiotics was 50 % 锝，

本文編號(hào)：1963368