細胞抑癌因子ARF與腺病毒E1A蛋白關(guān)系的研究
本文選題:ARF + 腺病毒E1A; 參考:《華東師范大學(xué)》2011年碩士論文
【摘要】:ARF是哺乳動物細胞內(nèi)的一個重要抑癌因子(小鼠細胞中是P19ARF,人類細胞中是P14ARF)。一般生理條件下,ARF表達量保持著較低水平,但是當(dāng)細胞受到一些致癌因素的刺激時,它會響應(yīng)信號而表達量上升。ARF一般通過p53-依賴或p53-非依賴的途徑實施其抑癌功效。E1A基因是腺病毒致病的關(guān)鍵基因,它主要是通過結(jié)合細胞內(nèi)Rb蛋白和P300/CBP,然后啟動自身病毒基因的轉(zhuǎn)錄及引發(fā)宿主細胞周期失控,最終可導(dǎo)致相關(guān)細胞的癌化。 在本課題研究中,通過外源性的和內(nèi)源性的免疫共沉淀首次發(fā)現(xiàn)了ARF與腺病毒E1A蛋白之間的相互作用,兩者之間的結(jié)合并不依賴于p53的存在。在功能方面,發(fā)現(xiàn)P14ARF可以抑制E1A對于病毒基因組的轉(zhuǎn)錄激活與引起的細胞DNA復(fù)制。在探索其內(nèi)在機制時,發(fā)現(xiàn)高表達P14ARF可以改變E1A原先的細胞核漿定位,E1A進入細胞核仁后加速了其被泛素化途徑降解。而通過Knockdown方去下調(diào)內(nèi)源性p14ARF,我們發(fā)現(xiàn)E1A的轉(zhuǎn)錄激活能力顯著升高。分別構(gòu)建了P14ARF和E1A的一系列蛋白片段,成功檢測到兩者相結(jié)合的區(qū)段。另外,還發(fā)現(xiàn)了E1A可以競爭性地阻斷ARF-mdm2的結(jié)合。這些機制的發(fā)現(xiàn),加上之前已有的文獻報道E1A可以激活P14ARF的轉(zhuǎn)錄,本研究提出了一條存在于P14ARF與E1A之間的負反饋調(diào)控通路,這很有可能是宿主細胞針對腺病毒感染的一種防御機制。而對于病毒來說,這條通路的存在,使得病毒可以調(diào)控其感染途徑與程度,以避免細胞引發(fā)對其有害的過度反應(yīng)。
[Abstract]:ARF is an important tumor suppressor in mammalian cells (P19 ARF in mouse cells and P14 ARFN in human cells. The expression of ARF remains low under normal physiological conditions, but when the cells are stimulated by some carcinogenic factors, It responds to the signal and increases the expression of .ARF generally through a p53-dependent or p53-independent pathway to carry out its tumor suppressor effect. E1A gene is a key gene of adenovirus pathogenesis. It is mainly by binding the intracellular RB protein and P300% CBP, and then initiating the transcription of its own virus gene and causing the host cell cycle to lose control, which can eventually lead to the carcinogenesis of the associated cells. In this study, the interaction between ARF and adenovirus E1A protein was first discovered by exogenous and endogenous immunoprecipitation, and the binding between the two proteins was not dependent on the existence of p53. In terms of function, P14ARF can inhibit the transcriptional activation and DNA replication induced by E1A. In order to explore its intrinsic mechanism, it was found that overexpression of P14ARF could change the localization of E1A into nucleolus and accelerate its degradation by Ubiquitin pathway. By down-regulating endogenous p14 ARF by Knockdown, we found that the transcriptional activation ability of E1A was significantly increased. A series of protein fragments of P14ARF and E1A were constructed, and the combined regions were successfully detected. In addition, it was found that E 1A could competitively block the binding of ARF-mdm2. The discovery of these mechanisms, together with previous reports that E1A activates transcription of P14ARF, suggests a negative feedback regulatory pathway between P14ARF and E1A. This may be a defense mechanism against adenovirus infection in host cells. For viruses, the presence of this pathway allows the virus to regulate its infection pathway and degree to prevent cells from triggering harmful overreactions.
【學(xué)位授予單位】:華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2011
【分類號】:R346
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,本文編號:1958695
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