本文選題：地西他濱 + 5-aza-2’-deoxycytidine��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：探討不同劑量甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑地西他濱(decitabine, Aza)通過(guò)調(diào)節(jié)Foxp3基因表達(dá)在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中對(duì)CD4+CD25+Treg細(xì)胞變化的影響,尋找體內(nèi)外Aza影響CD4+CD25+Treg變化的合適劑量。 方法：(1)體外實(shí)驗(yàn)部分,利用密度梯度離心法分離純化C57BL/6(H-2b)小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞,聯(lián)合使用抗小鼠CD3單克隆抗體、抗小鼠CD28單克隆抗體、IL-2、TGF-β及不同劑量的Aza,進(jìn)行淋巴細(xì)胞培養(yǎng),觀察不同劑量的Aza對(duì)培養(yǎng)體系的影響,以流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)體系CD4+CD25+Foxp3+Treg比例,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)培養(yǎng)體系Foxp3mRNA表達(dá)水平。(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分,按不同分組經(jīng)C57BL/6(H-2b)小鼠陰莖背靜脈注射不同劑量的Aza,觀察不同劑量的Aza對(duì)小鼠機(jī)體的影響,以流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg比例,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)脾臟Foxp3mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：(1)體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),①聯(lián)合使用抗小鼠CD3單克隆抗體、抗小鼠CD28單克隆抗體、IL-2. TGF-β及Aza能夠使小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系中初始CD4+CD25-T細(xì)胞分化為CD4+CD25+Treg細(xì)胞。同時(shí)Foxp3mRNA表達(dá)水平上升。②不同劑量Aza誘導(dǎo)初始CD4+CD25-T細(xì)胞分化為CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的數(shù)量不同。Foxp3mRNA表達(dá)水平也不同。③濃度為5uM Aza組淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系中CD4+CD25+Foxp3+Treg比例和Foxp3mRNA表達(dá)水平與其他濃度組相比升高最明顯,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,①Aza使經(jīng)陰莖背靜脈注射給藥后第7天小鼠外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量增加,脾臟中Foxp3mRNA表達(dá)水平上升。②不同劑量Aza對(duì)小鼠外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量和脾臟中Foxp3mRNA表達(dá)水平影響不同。③按4ug/g.體重/day劑量給予Aza組對(duì)小鼠外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg比例和脾臟Foxp3mRNA表達(dá)水平的影響與其他實(shí)驗(yàn)組相比升高最明顯,且均有顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)中,無(wú)論是體內(nèi)還是體外,甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine, Aza)即地西他濱(Decitabine)均可誘導(dǎo)初始CD4+CD25T細(xì)胞分化為CD4+CD25+Treg且Foxp3mRNA表達(dá)水平上調(diào),但是不同劑量Aza對(duì)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的影響效果不同。在體內(nèi),小鼠按4ug/g/d劑量給予Aza,在體外,濃度為5uM的Aza誘導(dǎo)CD4+CD25+Treg細(xì)胞的增殖和分化最明顯。
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of decitabine (Aza) on the changes of CD4+CD25+Treg cells in vitro and in vivo by regulating the expression of Foxp3 gene in different doses of methyltransferase inhibitor, and to find the appropriate dosage of Aza in vitro and in vivo to affect the change of CD4+CD25+Treg.
Methods: (1) in vitro, the splenic mononuclear cells of C57BL/6 (H-2b) mice were separated and purified by density gradient centrifugation. The monoclonal antibodies against mouse CD3, anti mouse CD28 monoclonal antibody, IL-2, TGF- beta and Aza in different doses were used for lymphocyte culture, and the effects of Aza on the culture system of different doses were observed by flow cytometry. CD4+CD25+Foxp3+Treg ratio of cell technology detection culture system and real-time fluorescence quantitative PCR were used to detect the expression level of Foxp3mRNA. (2) in the experimental part of the body, different doses of Aza were injected into the dorsal vein of the penis in C57BL/6 (H-2b) mice by different groups, and the effects of different doses of Aza on the mice body were observed, and the peripheral blood C was detected by flow cytometry. D4+CD25+Foxp3+Treg ratio and real-time fluorescence quantitative PCR were used to detect the expression level of Foxp3mRNA in spleen.
Results: (1) in the experiment in vitro, the combined use of anti mouse CD3 monoclonal antibody, anti mouse CD28 monoclonal antibody, IL-2. TGF- beta and Aza can make the initial CD4+CD25-T cells in the mouse spleen lymphocyte culture system differentiate into CD4+CD25+Treg cells. Meanwhile, the level of Foxp3mRNA expression rises. 2. Aza induced initial CD4+CD25-T in different doses of Aza. The number of.Foxp3mRNA cells differentiated into CD4+CD25+Foxp3+Treg cells was also different. (3) the CD4+CD25+Foxp3+Treg ratio and Foxp3mRNA expression level in the lymphocyte culture system of 5uM Aza group were most significantly higher than those of other concentration groups, and the difference was statistically significant (P0.05). (2) in vivo experimental results showed that (1) Aza made Seventh days after the injection of the penis dorsal vein, the number of CD4+CD25+Treg cells in the peripheral blood of mice increased and the expression level of Foxp3mRNA in the spleen increased. (2) different doses of Aza had different effects on the number of CD4+CD25+Treg cells in peripheral blood and the expression level of Foxp3mRNA in the spleen of mice. (3) CD4+CD25+F in Aza group was given to the peripheral blood of mice in Aza group according to the 4ug/g. weight /day dose. The ratio of oxp3+Treg and spleen Foxp3mRNA expression increased most significantly compared with other experimental groups, and there was a significant difference (P0.05).
Conclusion: in this experiment, both in vivo and in vitro, the methyltransferase inhibitor 5- nitrogen -2 '- deoxycytidine (5-aza-2'-deoxycytidine, Aza), namely, Decitabine, can induce the initial CD4+CD25T cells to differentiate into CD4+CD25+Treg and the level of Foxp3mRNA expression, but Aza to CD4+CD25+Foxp3+Treg cells at different doses. In vivo, mice were given Aza according to the dose of 4ug/g/d, and the proliferation and differentiation of CD4+CD25+Treg cells were most obvious in vitro, with the concentration of 5uM Aza.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392.4

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本文編號(hào)：1951545