本文選題：轉(zhuǎn)基因微生物 + 食用安全�。� 參考：《江南大學》2011年博士論文

【摘要】：微生物在食品中的應(yīng)用可以追溯到幾千年之前。如今,微生物在食品相關(guān)生產(chǎn)加工過程中扮演的角色越來越重要。轉(zhuǎn)基因技術(shù)在微生物中的應(yīng)用使轉(zhuǎn)基因微生物新品種應(yīng)運而生。不同的轉(zhuǎn)基因微生物可以優(yōu)化提升微生物原有的優(yōu)良品質(zhì),能夠滿足人們某一方面的特殊需求,這無疑擴大了微生物的應(yīng)用范圍,降低了生產(chǎn)成本。然而,轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品畢竟是一種人工的新產(chǎn)品,人們對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的食用安全從轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品誕生之日起就存在疑慮。目前,針對轉(zhuǎn)基因微生物系統(tǒng)、完善、實用的食用安全評價體系還沒有出臺,使得轉(zhuǎn)基因微生物的市場化受到限制。因此,開展轉(zhuǎn)基因微生物的食用安全性研究,建立系統(tǒng)完善的評價體系成為當前急需解決的任務(wù)。這對于促進轉(zhuǎn)基因微生物規(guī)范發(fā)展,進一步擴大微生物的實際應(yīng)用范圍具有重要意義。 本課題以轉(zhuǎn)nisI基因植物乳桿菌Lactobacillus plantarum 590(Lp590)為研究對象,以非轉(zhuǎn)基因的親本植物乳桿菌Lp為對照,根據(jù)微生物自身特點,結(jié)合已有的對轉(zhuǎn)基因植物的評價模型,而又不拘泥于已有的其他轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全評價模式,從體外耐受性質(zhì)、亞慢性毒性喂養(yǎng)、腸道相關(guān)免疫、基因水平轉(zhuǎn)移等對機體有重要影響的作用過程及影響因素進行了研究。本論文通過全方位、較系統(tǒng)的研究,旨在探索完善、系統(tǒng)、實用的轉(zhuǎn)基因微生物的食用安全評價模型,為轉(zhuǎn)基因微生物大規(guī)模的開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。 對轉(zhuǎn)基因植物乳桿菌Lp590體外耐受性質(zhì)進行了研究。與Lp菌株相比,對乳酸鏈球菌素(nisin)的耐受性試驗結(jié)果表明:Lp590確實能夠耐受較高濃度的nisin,并且Lp590與Lp的生長特性相似。對實際生產(chǎn)中可能遇到的極端環(huán)境如,低溫(4℃)和較高濃度乙醇時Lp590表現(xiàn)出與Lp相似的耐受性質(zhì),而且對于高溫(52℃)、較高濃度過氧化氫和氯化鈉三種環(huán)境的耐受性Lp590還要優(yōu)于Lp。體外模擬胃腸道消化的結(jié)果表明,Lp590與Lp相似,都能耐受胃腸道環(huán)境。以上結(jié)果表明,基因改造沒有對Lp590體外性質(zhì)產(chǎn)生負面影響,Lp590有多種適合工業(yè)生產(chǎn)的優(yōu)良特性。這些結(jié)論的獲得也為之后通過動物喂養(yǎng)實驗評價轉(zhuǎn)基因植物乳桿菌Lp590的食用安全提供了可能。 對SD大鼠進行了亞慢性毒性喂養(yǎng)試驗。結(jié)果表明,與灌喂Lp相比,灌喂Lp590 28天后大鼠生長狀態(tài)良好;體重、進食正常;血液、尿液各項指標正常;常規(guī)病理切片無特異性毒性變化;Lp590與親本Lp相似,對空腸粘膜結(jié)構(gòu)有顯著改善。一系列結(jié)果都表明,Lp590與菌Lp對機體有相似的影響,沒有發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因成分對大鼠機體產(chǎn)生不利于健康的影響。 對糞便這一對腸道健康有重要影響的代謝指標進行了較全面的研究。平板計數(shù)和定量PCR兩種方法對糞便主要菌群的研究表明,灌喂Lp590與Lp相似,都能促進腸道有益菌的增加抑制有害菌的增長,起到整腸作用。灌喂Lp590與Lp后,糞便主要酶活、糞便主要短鏈脂肪酸(SCFA)、糞便pH值及糞便水分含量的變化相似。從研究結(jié)果來看,沒有發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因成分改變Lp590對機體的益生作用。 用免疫組化、定量PCR和ELISA等方法對反映腸道滲透性、腸道粘膜免疫及機體整體免疫和抗氧化能力的相關(guān)研究表明,灌喂Lp590和Lp后,腸道滲透性降低;腸道粘膜免疫增加;機體抗氧化能力增強。Lp590表現(xiàn)出與Lp相似的對機體的有益作用,沒有發(fā)現(xiàn)因外源基因轉(zhuǎn)入而對機體產(chǎn)生副作用。 設(shè)計特異的引物,對血液、肌肉、肝臟、脾臟及腎臟組織器官進行了PCR檢測。結(jié)果沒有在上述相關(guān)組織器官中發(fā)現(xiàn)外源基因成分。 通過一系列試驗,結(jié)果沒有發(fā)現(xiàn)Lp590因為外源基因轉(zhuǎn)入對機體產(chǎn)生不利影響,而且Lp590與Lp都對機體健康有改善作用。本研究首次對轉(zhuǎn)基因微生物進行了針對腸道健康的食用安全評價。 本課題首次提出了腸道健康是反映微生物對機體健康影響的主要標志。在具體評價過程中,課題抓住微生物的特點,從體外耐受到對腸道健康的重點評價思路,圍繞重點,多角度分析,突出了對轉(zhuǎn)基因微生物食用安全評價重點,建立了關(guān)于腸道健康的系統(tǒng)、完善、實用的轉(zhuǎn)基因微生物食用安全評價體系,為轉(zhuǎn)基因微生物的規(guī)范提供科學的標準方法。這必將為轉(zhuǎn)基因微生物大規(guī)模的科學的開發(fā)利用和商業(yè)化奠定基礎(chǔ),并對進一步擴大微生物的實際應(yīng)用范圍具有重要指導意義。
[Abstract]:The application of micro - organisms in food can be traced back to thousands of years . Nowadays , the role of microbe in food - related production is more and more important .

In this paper , we studied the effect and influencing factors of transgenic plants in vitro tolerance , subchronic toxicity feeding , intestinal related immunity , gene level transfer and so on .

Lp590 has a similar tolerance to Lp , and Lp590 has a similar tolerance to Lp . The results show that Lp590 has no negative effect on the in vitro properties of Lp590 , and Lp590 has many excellent properties suitable for industrial production .

The results showed that Lp590 had a similar effect on the structure of jejunum . Lp590 had a similar effect on the structure of jejunum mucosa .

The results showed that Lp590 and Lp were similar to Lp , which could promote the growth of intestinal beneficial bacteria and inhibit the growth of harmful bacteria .

By means of immunohistochemistry , quantitative PCR and ELISA , the effects of Lp590 and Lp on intestinal permeability , intestinal mucosal immunity and body immunity and anti - oxidation ability showed that the intestinal permeability decreased after Lp590 and Lp were fed . The immunity of intestinal mucosal immunity increased , and the anti - oxidation ability of organism increased . Lp590 showed a similar beneficial effect on organism and found no side effect on organism due to the transfer of exogenous gene .

Specific primers were designed to detect the organs of blood , muscle , liver , spleen and kidney .

Through a series of experiments , it was found that Lp590 has no adverse effect on organism because of exogenous gene transfer , and Lp590 and Lp have an improved effect on organism health .

This paper first puts forward the main marker of the influence of microorganism on organism ' s health . In the process of specific evaluation , the subject grasps the characteristics of microorganism , from outside tolerance to the key evaluation method for the health of the intestinal tract . The key point and the multi - angle analysis indicate that the safety evaluation system of the transgenic microbe edible safety is emphasized , and the scientific standard method is provided for the regulation of the transgenic microbe . This will surely lay the foundation for the large - scale development and utilization of the transgenic microbe and the commercialization . It will be of great significance to further expand the practical application range of the microorganism .
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：TS201.3;R371

【參考文獻】

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本文編號：1947513