本文選題：肺炎鏈球菌蛋白疫苗 + 肺炎鏈球菌內(nèi)肽酶O��； 參考：《中國當代兒科雜志》2017年05期

【摘要】：目的原核表達肺炎鏈球菌內(nèi)肽酶O(PepO)及肺炎鏈球菌表面黏附素A(PsaA),評價其作為疫苗候選蛋白的免疫保護效果。方法設計pepO,psaA目的基因片段的特異性引物,經(jīng)PCR擴增,構建重組質(zhì)粒pET28a(+)-pepO,pET28a(+)-psaA,重組質(zhì)粒轉化大腸埃希菌BL21(DE3)誘導表達,經(jīng)純化后獲得高純度目的蛋白PepO及PsaA。經(jīng)黏膜免疫BALB/c小鼠制備其特異性抗血清,ELISA檢測抗體效價,Western blot分析驗證目的蛋白抗血清的特異性。將BALB/c小鼠隨機分為陰性對照組、PepO組、PsaA組及PepO+PsaA聯(lián)合免疫組,每組18只。構建不同血清型肺炎鏈球菌感染模型,評估目的蛋白單用及聯(lián)合使用的免疫保護效果。結果成功制備并獲得目的蛋白PepO及PsaA,經(jīng)Western blot驗證目的蛋白抗血清特異性好。PepO組和聯(lián)合免疫組小鼠唾液中IgA及血清中IgG效價比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),但均高于PsaA組(P0.05)。PepO組、PsaA組及聯(lián)合免疫組對鼻腔感染肺炎鏈球菌D39及CMCC31436小鼠的保護率高于陰性對照組(P0.05),且PepO組及聯(lián)合免疫組對鼻腔感染肺炎鏈球菌D39小鼠的保護率高于PsaA組(P0.05)�？苟ㄖ矊嶒灲Y果顯示,與對照組比較,PepO組、PsaA組及聯(lián)合免疫組均能有效降低肺炎鏈球菌CMCC31693及CMCC31207在小鼠鼻咽部和肺部的定植(P0.05),且聯(lián)合免疫組對降低肺炎鏈球菌CMCC31207在小鼠肺部的定植效果更好(P0.05)。結論 PepO+PsaA聯(lián)合疫苗經(jīng)黏膜途徑免疫小鼠后,較單用對小鼠有更好的保護作用,能有效抵抗肺炎鏈球菌在鼻咽部、肺部的定植,是一組較有開發(fā)潛力的蛋白疫苗。
[Abstract]:Objective to express prokaryotic expression of Streptococcus pneumoniae endopeptidase Op Pepo and Streptococcus pneumoniae surface adhesin A PsaAn, and to evaluate its protective effect as a vaccine candidate protein. Methods the specific primers were designed and amplified by PCR to construct the recombinant plasmid pET28a, which was transformed into Escherichia coli BL21DE3. After purification, high purity PepO and psaA were obtained. BALB/c mice were immunized with their specific antiserum. The titer of antibody was detected by Elisa. Western blot analysis was used to verify the specificity of the target protein antiserum. BALB/c mice were randomly divided into PsaA group (negative control group) and PepO PsaA combined immunization group (18 mice in each group). Different serotypes of Streptococcus pneumoniae infection models were established to evaluate the immune protection effect of single and combined use of the target protein. Results PepO and PsaA were successfully prepared and obtained. The specificity of the antiserum was verified by Western blot. There was no significant difference in IgA in saliva and IgG titer in serum between PepO group and combined immunized group, but they were higher than that in PsaA group. The protective rate of P0.05A group and combined immunization group on D39 and CMCC31436 mice infected with Streptococcus pneumoniae in nasal cavity was higher than that in negative control group (P 0.05), and the protective rate of PepO group and combined immunization group on D39 mice infected with Streptococcus pneumoniae in nasal cavity group was higher than that in PsaA group. The results of anti-colonization experiment showed that, Compared with the control group, PsaA group and combined immunization group could effectively reduce the colonization of streptococcus pneumoniae CMCC31693 and CMCC31207 in nasopharynx and lung of mice, and the combined immunization group had better effect on reducing the colonization of streptococcus pneumoniae CMCC31207 in the lungs of mice. Conclusion compared with the mice immunized by mucosal pathway, PepO PsaA combined vaccine has better protective effect and can effectively resist the colonization of Streptococcus pneumoniae in nasopharynx and lung.
【作者單位】： 四川大學華西第二醫(yī)院檢驗科/婦兒疾病與出生缺陷教育部重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(81301399)
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 陸德源;;肺炎鏈球菌表面蛋白A是肺炎鏈球菌的一種乳鐵蛋白結合蛋白[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);2000年02期

2 張雪梅;肺炎鏈球菌自然轉化機制的研究進展[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;2002年06期

3 秦燕;劉仁貴;;肺炎鏈球菌自然轉化機制的研究進展[J];大理學院學報;2008年10期

4 張守釵;劉小康;;肺炎鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的研究現(xiàn)狀[J];四川生理科學雜志;2008年02期

5 樊有;施毅;;肺炎鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的研究進展[J];中國感染與化療雜志;2008年02期

6 陳蓉;趙根明;;肺炎鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的研究進展[J];中國感染與化療雜志;2010年03期

7 賁亞t ;崔古貞;劉德立;;肺炎鏈球菌HMG-CoA合成酶基因克隆和表達[J];哈爾濱醫(yī)科大學學報;2010年05期

8 姚開虎;張敬仁;;國內(nèi)耐藥肺炎鏈球菌的流行現(xiàn)狀[J];傳染病信息;2011年02期

9 劉美玲;江鏡全;黃潔貞;;肺炎鏈球菌毒力相關基因檢測及臨床意義[J];吉林醫(yī)學;2012年24期

10 江麗君;;中國科技大學有關肺炎鏈球菌的新發(fā)現(xiàn)[J];微生物學免疫學進展;2012年04期

相關會議論文 前10條

1 黃小翠;崔亞利;;兒童使用的肺炎鏈球菌疫苗研究進展[A];第一次全國中西醫(yī)結合檢驗醫(yī)學學術會議暨中國中西醫(yī)結合學會檢驗醫(yī)學專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2014年

2 張剛;馮婕;;肺炎鏈球菌對莫西沙星耐藥發(fā)展的突變途徑研究[A];2012年第五屆全國微生物遺傳學學術研討會論文摘要集[C];2012年

3 龐丹;王虹;楊曉亮;劉鑫;張雪梅;尹一兵;;肺炎鏈球菌的一種莢膜表面聚合連接酶的鑒定[A];重慶市生物化學與分子生物學學術會議論文摘要匯編[C];2009年

4 李忠云;周本立;張岷;;肺炎鏈球菌性疾病與肺炎球鏈菌多糖疫苗[A];“環(huán)境與健康”學術研討會論文摘要集[C];2007年

5 李耘;王珊;薛峰;鄭波;劉健;呂媛;;大環(huán)內(nèi)酯耐藥肺炎鏈球菌分子特性研究[A];第8屆全國抗菌藥物臨床藥理學術會議暨北京大學臨床藥理研究所成立三十周年論文集[C];2010年

6 牛司強;羅淼;尹一兵;汪德強;;新肺炎鏈球菌毒力因子GHIA的鑒定及其結構功能研究[A];中國晶體學會第五屆全國會員代表大會暨學術大會（大分子分會場）論文摘要集[C];2012年

7 王雷;楊益虎;杜洋;張敬仁;周叢照;陳宇星;;肺炎鏈球菌R6的ABC轉運蛋白ProWX的結構和功能研究[A];中國晶體學會第五屆全國會員代表大會暨學術大會（大分子分會場）論文摘要集[C];2012年

8 柏曉輝;周叢照;陳宇星;;在肺炎鏈球菌中大量表達糖基化蛋白PsrP[A];中國晶體學會第五屆全國會員代表大會暨學術大會（大分子分會場）論文摘要集[C];2012年

9 牛司強;尹一兵;黃愛龍;汪德強;;新肺炎鏈球菌毒力因子GHIA三維結構與功能研究[A];2012全國臨床微生物與感染免疫學術研討會論文集[C];2012年

10 楊曉亮;崔亞利;王虹;劉鑫;龐丹;班艷娜;尹一兵;張雪梅;;肺炎鏈球菌假想蛋白SPD-0873溶菌酶活性的分析和鑒定[A];重慶市生物化學與分子生物學學術會議論文摘要匯編[C];2009年

相關重要報紙文章 前4條

1 衛(wèi)生部北京醫(yī)院 張秀珍;肺炎鏈球菌對青霉素耐藥率上升快[N];健康報;2008年

2 葛秋芳;英科學家發(fā)現(xiàn)肺炎鏈球菌產(chǎn)生抗藥性的機理[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

3 劉霞;免疫系統(tǒng)對抗肺炎感染機制揭開[N];科技日報;2010年

4 葛秋芳;病菌為何不怕青霉素了？科學家解謎[N];新華每日電訊;2008年

相關博士學位論文 前10條

1 李瓊;肺炎鏈球菌自溶素LytA的結構和功能研究[D];中國科學技術大學;2015年

2 孟江萍;應用啟動子誘捕策略篩選并初步鑒定肺炎鏈球菌宿主體內(nèi)誘導基因[D];重慶醫(yī)科大學;2005年

3 張雪梅;肺炎鏈球菌轉化對細菌毒力和耐藥性影響的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2003年

4 馬千里;肺炎鏈球菌毒力蛋白基因工程疫苗優(yōu)勢抗原篩選[D];第三軍醫(yī)大學;2009年

5 賁亞t ;肺炎鏈球菌HMG-CoA合成酶和還原酶基因克隆表達及功能研究[D];華中師范大學;2008年

6 牛司強;一種肺炎鏈球菌溶菌酶樣假想蛋白質(zhì)SP0987的結構和功能研究[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

7 李南;肺炎鏈球菌組氨酸激酶（VicK）的同源模建及其先導抑制劑的篩選和鑒定[D];重慶醫(yī)科大學;2009年

8 胥文春;DFI體內(nèi)篩選肺炎鏈球菌致腦膜炎相關基因[D];重慶醫(yī)科大學;2007年

9 范楷;肺炎鏈球菌HtrA蛋白PDZ結構域和嗜鹽古菌SAMPs蛋白結構與功能研究[D];中國科學技術大學;2011年

10 張群;ClpE在肺炎鏈球菌致病過程中的作用機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2009年

相關碩士學位論文 前10條

1 許佳毅;大環(huán)內(nèi)酯類（阿奇霉素）對肺炎鏈球菌小鼠模型的療效研究[D];復旦大學;2014年

2 王建敏;肺炎鏈球菌烯醇化酶與熱休克蛋白DnaJ相互作用研究[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

3 徐紅梅;GntR型轉錄因子SPD_0064對肺炎鏈球菌莢膜多糖的調(diào)控作用及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

4 趙博;肺炎鏈球菌融合蛋白PsaA-PcpA疫苗的應用研究[D];吉林大學;2016年

5 張濤;肺炎鏈球菌莢膜多糖血清型3結合疫苗的研制及免疫原性的研究[D];天津科技大學;2015年

6 張紅;肺炎鏈球菌肽鏈內(nèi)切酶O（PepO）在宿主固有免疫激活中的作用及機制[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

7 崔晶晶;一種具有CaPi礦化外殼的新型肺炎鏈球菌減毒活疫苗的構建及其免疫保護效果及機制的初步探究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

8 高華;肺炎鏈球菌生物學特性鑒定及耐藥性分析[D];北京生物制品研究所;2004年

9 吳艷麗;肺炎鏈球菌表面粘附素A的原核表達和免疫保護性的初步研究[D];大連醫(yī)科大學;2009年

10 姚成;肺炎鏈球菌耐藥性、分子流行病學和耐藥機制[D];重慶醫(yī)科大學;2002年

，

本文編號：1908423