本文選題：肺炎鏈球菌蛋白疫苗 + 肺炎鏈球菌內(nèi)肽酶O　； 參考：《中國當代兒科雜志》2017年05期

【摘要】：目的原核表達肺炎鏈球菌內(nèi)肽酶O(PepO)及肺炎鏈球菌表面黏附素A(PsaA),評價其作為疫苗候選蛋白的免疫保護效果。方法設(shè)計pepO,psaA目的基因片段的特異性引物,經(jīng)PCR擴增,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a(+)-pepO,pET28a(+)-psaA,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3)誘導表達,經(jīng)純化后獲得高純度目的蛋白PepO及PsaA。經(jīng)黏膜免疫BALB/c小鼠制備其特異性抗血清,ELISA檢測抗體效價,Western blot分析驗證目的蛋白抗血清的特異性。將BALB/c小鼠隨機分為陰性對照組、PepO組、PsaA組及PepO+PsaA聯(lián)合免疫組,每組18只。構(gòu)建不同血清型肺炎鏈球菌感染模型,評估目的蛋白單用及聯(lián)合使用的免疫保護效果。結(jié)果成功制備并獲得目的蛋白PepO及PsaA,經(jīng)Western blot驗證目的蛋白抗血清特異性好。PepO組和聯(lián)合免疫組小鼠唾液中IgA及血清中IgG效價比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),但均高于PsaA組(P0.05)。PepO組、PsaA組及聯(lián)合免疫組對鼻腔感染肺炎鏈球菌D39及CMCC31436小鼠的保護率高于陰性對照組(P0.05),且PepO組及聯(lián)合免疫組對鼻腔感染肺炎鏈球菌D39小鼠的保護率高于PsaA組(P0.05)�？苟ㄖ矊嶒灲Y(jié)果顯示,與對照組比較,PepO組、PsaA組及聯(lián)合免疫組均能有效降低肺炎鏈球菌CMCC31693及CMCC31207在小鼠鼻咽部和肺部的定植(P0.05),且聯(lián)合免疫組對降低肺炎鏈球菌CMCC31207在小鼠肺部的定植效果更好(P0.05)。結(jié)論 PepO+PsaA聯(lián)合疫苗經(jīng)黏膜途徑免疫小鼠后,較單用對小鼠有更好的保護作用,能有效抵抗肺炎鏈球菌在鼻咽部、肺部的定植,是一組較有開發(fā)潛力的蛋白疫苗。
[Abstract]:Objective to express prokaryotic expression of Streptococcus pneumoniae endopeptidase Op Pepo and Streptococcus pneumoniae surface adhesin A PsaAn, and to evaluate its protective effect as a vaccine candidate protein. Methods the specific primers were designed and amplified by PCR to construct the recombinant plasmid pET28a, which was transformed into Escherichia coli BL21DE3. After purification, high purity PepO and psaA were obtained. BALB/c mice were immunized with their specific antiserum. The titer of antibody was detected by Elisa. Western blot analysis was used to verify the specificity of the target protein antiserum. BALB/c mice were randomly divided into PsaA group (negative control group) and PepO PsaA combined immunization group (18 mice in each group). Different serotypes of Streptococcus pneumoniae infection models were established to evaluate the immune protection effect of single and combined use of the target protein. Results PepO and PsaA were successfully prepared and obtained. The specificity of the antiserum was verified by Western blot. There was no significant difference in IgA in saliva and IgG titer in serum between PepO group and combined immunized group, but they were higher than that in PsaA group. The protective rate of P0.05A group and combined immunization group on D39 and CMCC31436 mice infected with Streptococcus pneumoniae in nasal cavity was higher than that in negative control group (P 0.05), and the protective rate of PepO group and combined immunization group on D39 mice infected with Streptococcus pneumoniae in nasal cavity group was higher than that in PsaA group. The results of anti-colonization experiment showed that, Compared with the control group, PsaA group and combined immunization group could effectively reduce the colonization of streptococcus pneumoniae CMCC31693 and CMCC31207 in nasopharynx and lung of mice, and the combined immunization group had better effect on reducing the colonization of streptococcus pneumoniae CMCC31207 in the lungs of mice. Conclusion compared with the mice immunized by mucosal pathway, PepO PsaA combined vaccine has better protective effect and can effectively resist the colonization of Streptococcus pneumoniae in nasopharynx and lung.
【作者單位】： 四川大學華西第二醫(yī)院檢驗科/婦兒疾病與出生缺陷教育部重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(81301399)
【分類號】：R392

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