發(fā)布時(shí)間：2018-05-18 15:39

  本文選題：程序性死亡受體 + 單克隆抗體　； 參考：《免疫學(xué)雜志》2017年04期

【摘要】：目的制備鼠抗人PD-1單克隆抗體,并對(duì)其生物阻斷活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法利用重組人源PD-1/PDCD1蛋白作為免疫蛋白,免疫接種Balb/c小鼠,分離并提取小鼠脾淋巴細(xì)胞,然后與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0細(xì)胞融合培養(yǎng),經(jīng)過(guò)多次克隆化培養(yǎng)篩選出穩(wěn)定分泌鼠抗人PD-1單抗的雜交瘤細(xì)胞株。鑒定單抗Ig G類別及亞類,并分析其特異性和細(xì)胞毒性;建立Hep G2細(xì)胞和Jurkat細(xì)胞共同培養(yǎng)體系,ELISA法檢測(cè)PD-1單抗對(duì)Jurkat細(xì)胞分泌抗腫瘤細(xì)胞因子的影響,MTT法分析PD-1單抗對(duì)Jurkat細(xì)胞殺傷Hep G2細(xì)胞能力的影響。結(jié)果獲得了1株新的小鼠抗人PD-1單克隆抗體,命名為2H7。單抗2H7能夠特異性識(shí)別T細(xì)胞表面的PD-1蛋白;高濃度長(zhǎng)時(shí)間處理對(duì)Jurkat細(xì)胞有一定毒性作用;低濃度單抗2H7可阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路,使Jurkat細(xì)胞對(duì)Hep G2細(xì)胞殺傷能力顯著增強(qiáng)(P0.01),且Jurkat細(xì)胞分泌的IL-2和IFN-γ等細(xì)胞因子水平顯著高于對(duì)照組(P0.01)。結(jié)論成功制備了1株具有良好生物阻斷活性的小鼠抗人PD-1單克隆抗體2H7,該抗體能夠顯著提高T細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞Hep G2的殺傷能力。
[Abstract]:Objective to prepare mouse anti-human PD-1 monoclonal antibody and evaluate its biological blocking activity. Methods Recombinant human PD-1/PDCD1 protein was used as immune protein to immunize Balb/c mice. Spleen lymphocytes of mice were isolated and extracted, and then fused with SP2/0 cells of mouse myeloma cells. The hybridoma cell lines secreting murine anti-human PD-1 McAb stably were screened by multiple clonal culture. The specific and cytotoxic characteristics of McAb Ig G were identified. A co-culture system of Hep G2 cells and Jurkat cells was established to detect the effect of PD-1 monoclonal antibody on the secretion of anti-tumor cytokines in Jurkat cells by Elisa. The effect of PD-1 monoclonal antibody on the ability of Jurkat cells to kill Hep G2 cells was analyzed by MTT assay. Results A new mouse monoclonal antibody against human PD-1 was obtained and named as 2H 7. Monoclonal antibody 2H7 can specifically recognize PD-1 protein on T cell surface, high concentration of 2H7 has toxic effect on Jurkat cell, and low concentration of 2H7 can block PD-1/PD-L1 signal pathway. The cytotoxicity of Jurkat cells to Hep G2 cells was significantly enhanced, and the levels of cytokines such as IL-2 and IFN- 緯 secreted by Jurkat cells were significantly higher than those of control cells. Conclusion A mouse anti-human PD-1 monoclonal antibody 2H7 with good bioblocking activity was successfully prepared. The antibody can significantly enhance the cytotoxicity of T cells to Hep G2 cells.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所藥學(xué)部;
【基金】：國(guó)家自然基金(81273608) 重慶市基礎(chǔ)科學(xué)與前沿技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(CSTC2015jcyj BX0018) 第三軍醫(yī)大學(xué)科技成果轉(zhuǎn)化基金培育項(xiàng)目(2015XZH19)
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1906415