本文選題：人巨細胞病毒 + UL蛋白　； 參考：《吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2017年04期

【摘要】：目的:探討應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選出與人巨細胞病毒(HCMV)UL132編碼蛋白相互作用的人胎腦cDNA文庫組織蛋白,闡明其在先天性巨細胞病毒感染中可能的致病機制。方法:采用聚合酶鏈式反應(yīng)擴增HCMV UL132片段,酶切、純化擴增的目的片段及酵母誘餌表達載體pGBKT7,連接HCMV UL132片段到載體pGBKT7上,將連接后的重組體pGBKT7-UL132轉(zhuǎn)化到酵母菌AH109中,再將人胎腦文庫DNA也轉(zhuǎn)化到酵母AH109中,篩選與HCMV UL132編碼蛋白相互作用的人胎腦文庫蛋白,并對陽性克隆進行測序和生物信息學(xué)分析。結(jié)果:成功構(gòu)建誘餌表達載體pGBKT7-UL132,雙酶切鑒定可見800及7 500bp 2條目的條帶;轉(zhuǎn)化文庫質(zhì)粒后計算轉(zhuǎn)化效率為6.6×103 cfu·μg-1,顯色反應(yīng)顯示有95個菌落呈藍色,最終確認10個克隆與HCMV UL132編碼蛋白相互作用,Blast結(jié)果顯示7個克隆與CAML高度同源。結(jié)論:利用酵母雙雜交系統(tǒng)成功篩選出與HCMV UL132編碼蛋白相互作用的人胎腦cDNA文庫蛋白CAML,推測該目的蛋白可能在HCMV感染所致神經(jīng)系統(tǒng)損傷、病毒的入侵和增殖過程中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:Objective: To investigate the interaction of human cytomegalovirus (HCMV) UL132 encoding protein by yeast two hybrid system, and to elucidate the possible pathogenesis of cDNA Library in human fetal brain, and to clarify its possible pathogenesis in congenital cytomegalovirus infection. Methods: polymerase chain reaction was used to expand HCMV UL132 fragment, enzyme digestion, and purify the amplified fragment. The yeast decoy expression vector pGBKT7, connecting the HCMV UL132 fragment to the carrier pGBKT7, transformed the linked recombinant pGBKT7-UL132 into yeast AH109, and then transformed the human fetal brain library DNA into yeast AH109 to screen the human fetal brain library protein interacting with the HCMV UL132 encoding protein and sequenced the positive clones and the biological letters. Results: the decoy expression vector pGBKT7-UL132 was successfully constructed, and 2 stripe bands of 800 and 7 500bp were identified by double enzyme digestion; the conversion efficiency was 6.6 * 103 CFU. G-1 after the transformation library plasmid. The color reaction showed that 95 colonies were blue, and 10 clones were interacted with the HCMV UL132 encoded protein, and the Blast results showed 7. The clones are highly homologous with CAML. Conclusion: the human fetal brain cDNA library protein CAML was successfully screened by the yeast two hybrid system, which could interact with the HCMV UL132 encoding protein. It is presumed that the target protein may play an important role in the nervous system damage caused by HCMV infection and the invasion and proliferation of the virus.
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院生物樣本庫;吉林大學(xué)第一醫(yī)院兒科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(81171581)
【分類號】：R373

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本文編號：1904896