發(fā)布時(shí)間：2018-05-16 01:46

  本文選題：PD- + 原核表達(dá)載體�。� 參考：《鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版)》2017年02期

【摘要】：旨在利用原核表達(dá)系統(tǒng)制備可溶性的PD-1胞外段(以下簡(jiǎn)稱exPD-1)蛋白.以C57BL/6小鼠脾細(xì)胞cDNA為模板,擴(kuò)增小鼠exPD-1基因,成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-exPD-1,并在E.coliBL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá).結(jié)果顯示,小鼠exPD-1重組蛋白大小約為17kD,以包涵體形式存在.exPD-1包涵體蛋白經(jīng)8mol/L尿素變性、Ni-NTA親和層析后,采用尿素梯度透析法對(duì)蛋白進(jìn)行復(fù)性,復(fù)性效果不佳,添加氧化/還原型谷胱甘肽復(fù)性后,復(fù)性率達(dá)到50%以上,提高了復(fù)性效率.小鼠exPD-1蛋白的成功制備,為進(jìn)一步研究PD-1的免疫學(xué)功能奠定了材料基礎(chǔ).
[Abstract]:The aim of this study was to prepare soluble PD-1 extracellular domain (exPD-1) protein by prokaryotic expression system. The mouse exPD-1 gene was amplified by using cDNA of C57BL/6 mouse spleen cells as template, and the recombinant plasmid pET-28a-exPD-1 was successfully constructed and expressed in E. coli BL21 (DE3). The results showed that the size of mouse exPD-1 recombinant protein was about 17kD.ExPD-1 inclusion body protein existed in the form of inclusion body after 8mol/L urea denaturation Ni-NTA affinity chromatography, the protein was renatured by urea gradient dialysis, and the renaturation effect was not good. After refolding with oxidized / reduced glutathione, the renaturation rate was more than 50%, and the renaturation efficiency was improved. The successful preparation of mouse exPD-1 protein laid a material foundation for further study on the immunological function of PD-1.
【作者單位】： 鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)(2012ZX09103301-022) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(U1204817,81373119)
【分類號(hào)】：R392;Q78

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本文編號(hào)：1894910