本文選題：成骨細胞 + TNF-α��； 參考：《第二軍醫(yī)大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是一類炎癥因子，整合素β1是存在于細胞膜上的一中跨膜信號分子，一氧化氮（nitric oxide, NO）是一種短效自由基，這三種物質(zhì)在細胞活動中發(fā)揮不同的生物作用。我們的實驗目的是了解TNF-α在成骨細胞活性、凋亡、整合素β1表達、NO代謝中的作用以及TNF-α與整合素β1對成骨細胞凋亡和NO代謝的影響。 方法： 1.運用小鼠顱蓋骨原代培養(yǎng)鑒定和傳代的方法獲得生長狀態(tài)良好的成骨細胞。 2.將TNF-α與α-MEM培養(yǎng)基配成混懸液，按0μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L的TNF-α濃度與成骨細胞共培養(yǎng)，按時間段分為24h和48h組。 3.按TNF-α濃度梯度和時間組用酶標儀檢測成骨細胞活性和堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性。 4.按TNF-α濃度梯度和時間組采用流式細胞儀檢測成骨細胞整合素β1的表達和凋亡，按格里思法檢測氧化氮的代謝產(chǎn)物——亞硝酸根離子（NO_2~-），代表NO的濃度。 5.使用整合素封閉劑封閉整合素β1，按TNF-α濃度梯度檢測成骨細胞凋亡，研究整合素和TNF-α的交互作用。 結(jié)果： 1.實驗獲得的成骨細胞在3代時生長狀態(tài)穩(wěn)定。成骨細胞進行骨結(jié)節(jié)誘導和染色后，出現(xiàn)鈣化的骨結(jié)節(jié)。細胞活性較好適宜進行藥物實驗。 2.隨著TNF-α濃度的升高和培養(yǎng)時間的延長，成骨細胞活性和堿性磷酸酶活性減低，凋亡增多。 3.48h，，TNF-α的濃度為10μg/L時NO_2~-含量達最大值；培養(yǎng)時間的延長NO_2~-的代謝含量維持在一個較高的濃度，與對照組有顯著性差異(P＜0.01)。 4.隨著TNF-α濃度的升高和培養(yǎng)時間的延長，成骨細胞整合素β1表達減少。 5.整合素β1封閉后，共培養(yǎng)的TNF-α濃度的升高，成骨細胞凋亡較未封閉組增多；NO_2~-的濃度較未封閉組無明顯變化。 結(jié)論： 1. TNF-α可以降低成骨細胞活性和堿性磷酸酶活性，且具有一定的時間和濃度依賴性。 2.單一的TNF-α可以促進成骨細胞NO的代謝和釋放，48h，TNF-α的濃度為10μg/L時，呈峰值表達；TNF-α可以誘導成骨細胞凋亡。整合素β1對成骨細胞NO代謝無明顯相關性。 3.成骨細胞在培養(yǎng)過程中，整合素β1的表達呈陽性。高濃度TNF-α能夠抑制成骨細胞整合素β1的表達，具有濃度和時間依賴性。在誘導成骨細胞凋亡，整合素β1和TNF-α具有拮抗作用。
[Abstract]:Objective: tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽) is a kind of inflammatory factor, integrin 尾 1 is a transmembrane signaling molecule in cell membrane, nitric oxide (no) is a kind of short-acting free radical. These three substances play different biological roles in cell activity. Our aim was to investigate the role of TNF- 偽 in osteoblast activity, apoptosis, integrin 尾 1 expression and no metabolism, and the effects of TNF- 偽 and integrin 尾 1 on osteoblast apoptosis and no metabolism. Methods: 1. Osteoblasts with good growth state were obtained by primary culture and subculture of mouse calvaria. 2. TNF- 偽 was mixed with 偽 -MEM medium to form suspension. TNF- 偽 was co-cultured with 100 渭 g / L TNF- 偽 at the concentration of 10 渭 g / L ~ 10 渭 g / L ~ (10) 渭 g 路L ~ (-1) and divided into 24 h and 48 h groups. 3. The activity of osteoblasts and alkaline phosphatase (ALP) were measured by enzyme labeling instrument according to TNF- 偽 concentration gradient and time group. 4. The expression and apoptosis of integrin 尾 1 in osteoblasts were detected by flow cytometry according to TNF- 偽 concentration gradient and time group. Nitrite ion, the metabolite of nitrogen oxide, was used to detect the expression and apoptosis of integrin 尾 1 in osteoblasts. 5. Using integrin sealant to block integrin 尾 1, osteoblast apoptosis was detected according to TNF- 偽 concentration gradient, and the interaction between integrin and TNF- 偽 was studied. Results: 1. The growth state of osteoblasts was stable at the third passage. After osteoblasts were induced and stained with bone nodules, calcified bone nodules appeared. Good cell activity is suitable for drug experiment. 2. With the increase of TNF- 偽 concentration and the prolongation of culture time, osteoblast activity and alkaline phosphatase activity decreased and apoptosis increased. When the concentration of TNF- 偽 was 10 渭 g / L at 3.48 h, the content of NO2- was the highest, and the metabolic content of NO2- was maintained at a higher concentration when the culture time was prolonged (P < 0.01). 4. With the increase of TNF- 偽 concentration and the prolongation of culture time, the expression of integrin 尾 1 in osteoblasts decreased. 5. After integrin 尾 1 was blocked, the concentration of TNF- 偽 in co-cultured cells increased, and the apoptosis of osteoblasts increased compared with the unblocked group. Conclusion: 1. TNF- 偽 decreased osteoblast activity and alkaline phosphatase activity in a time and concentration dependent manner. 2. When the concentration of TNF- 偽 was 10 渭 g / L, the peak expression of TNF- 偽 could induce apoptosis of osteoblasts. There was no significant correlation between integrin 尾 1 and no metabolism in osteoblasts. 3. The expression of integrin 尾 1 was positive in osteoblasts. High concentration of TNF- 偽 inhibited the expression of integrin 尾 1 in osteoblasts in a concentration and time dependent manner. Integrin 尾 1 and TNF- 偽 have antagonistic effects on osteoblast apoptosis.
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【共引文獻】

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本文編號：1890568