本文選題：腸道病毒71型 + 比較蛋白質(zhì)組學�。� 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2011年博士論文

【摘要】：手足口病是由腸道病毒引起的一種急性傳染病。近年來,國內(nèi)報告的手足口病發(fā)病例數(shù)和死亡例數(shù)均大幅度上升。在導致手足口病的20多種病毒中,由腸道病毒71型作為主要病原引起的手足口病發(fā)病病例數(shù)在總病例數(shù)中的比例在不斷上升。腸道病毒71型感染人體除了引起手足口病外,還可導致腦膜炎、腦炎、局部麻痹和急性遲緩性麻痹等神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及皰疹性咽岡峽炎等非神經(jīng)系統(tǒng)疾病,嚴重者能導致患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥或肺水腫等致死性的臨床后果。目前關于腸道病毒71型病毒的研究主要集中在病原學、流行病學方面,其對人體的致病機理尚不是十分清楚。隨著腸道病毒71型引起的手足口病發(fā)病態(tài)勢不斷擴大,而臨床上尚無公認的特效治療藥物,因此研制一種安全有效的疫苗成為防治腸道病毒71型所致手足口病的最有效的預治措施。 本研究采用初步研制成功的腸道病毒71型滅活疫苗,利用恒河猴嬰猴這一經(jīng)典動物模型進行了該疫苗的保護性實驗。用疫苗免疫動物后攻毒,疫苗免疫組恒河猴嬰猴神經(jīng)系統(tǒng)的各個部分均未檢出超過可信限的病毒RNA陽性結(jié)果,而感染對照組動物各部位均檢測到明顯的病毒RNA陽性結(jié)果。滅活疫苗能夠誘導免疫后的恒河猴嬰猴產(chǎn)生中和抗體,免疫后病毒攻擊后第7天恒河猴嬰猴血清中和抗體水平達1：512,能夠形成有效的抗病毒免疫保護效應。免疫組化結(jié)果顯示,免疫動物所誘導產(chǎn)生的免疫保護效應能夠抑制病毒在體內(nèi)器官及組織中的增殖。結(jié)合攻毒后動物相應靶器官組織切片病理觀察,血清中和抗體檢測和免疫組化結(jié)果,分析表明：腸道病毒71型滅活疫苗免疫恒河猴嬰猴后,繼而以病毒攻擊,將不會引起導致機體組織器官受損的病理學反應,疫苗具有保護性。 此外,取上述研究對象中,免疫后攻毒和未免疫攻毒的恒河猴嬰猴中樞神經(jīng)系統(tǒng)的丘腦組織進行了蛋白質(zhì)組學研究。運用蛋白質(zhì)組學相關技術：蛋白質(zhì)雙向電泳分離蛋白和專業(yè)軟件Imagemaster 7.0進行圖像分析,定量研究在病毒感染組及疫苗保護組中表達量有所差異的蛋白質(zhì)點,通過基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜和蛋白信息數(shù)據(jù)庫建立差異蛋白質(zhì)譜。 本研究共發(fā)現(xiàn)48個表達量變化的蛋白,按功能分為7類：①、細胞骨架相關蛋白8個,其中CFL2表達量變化結(jié)合功能分析提示該蛋白是研究EV71感染所致肌張力變化、心肌原纖維退化、心肌細胞凋亡潛在的靶點。結(jié)合各組PFN1、PFN2表達量變化與Profilins功能分析,提示在感染過程中PFN1、PFN2與細胞膜完整性或細胞內(nèi)吞作用相關,疫苗的保護性降低了感染對細胞形態(tài)完整性的影響。②、小熱休克蛋白1個,CRYAB,結(jié)合該蛋白在感染高峰期表達上調(diào)而與其它組不同的表現(xiàn)及其在生理或者神經(jīng)變性疾病的壓力下能夠抑制中間纖維的聚集的能力,提示這種小熱休克蛋白與感染壓力下的細胞骨架穩(wěn)定性維持相關；③、生物大分子合成相關蛋白4個,其中,CyPA作為一種具有調(diào)控免疫相關的因子,可能通過某種未知的信號傳導途徑激活T細胞活化所需的細胞因子,而促進T細胞的增殖,從而顯示感染高峰CyPA表達量與其它組的差異。NUTF2作為一種入核轉(zhuǎn)運因子,其表達量變化提示其是感染狀態(tài)下宿主實現(xiàn)關閉或下調(diào)相關因子以抵抗病毒感染的可能途徑之一。④、代謝相關蛋白13個,這些蛋白含量變化提示感染狀態(tài)下的神經(jīng)細胞增殖周期的改變、神經(jīng)元發(fā)育的阻滯、突觸后神經(jīng)元的保護性抑制狀態(tài)改變等與EV71感染致病機理密切相關,對疫苗組這些蛋白表達量的分析進一步映證了疫苗的保護效應。⑤、能量代謝與生物氧化相關蛋白11個,提示病理狀態(tài)下和疫苗保護效應下機體能量代謝系統(tǒng)和生物氧化途徑發(fā)生了改變。⑥、泛素-蛋白酶體途徑相關蛋白2個,UCHL1和UBE2N在病毒感染組和疫苗保護組中的表達量差異及功能分析也支持了滅活疫苗所誘導的免疫保護的有效性。⑦、信號傳導相關蛋白9個,PARK7表達變化提示中樞神經(jīng)系統(tǒng)對感染的具有保護性,且可能通過PARK7實現(xiàn)。蛋白質(zhì)組學實驗中共結(jié)合差異譜中表達量發(fā)生改變的蛋白的功能與免疫后攻毒和未免疫攻毒恒河猴嬰猴丘腦蛋白表達量變化分析,進一步驗證了滅活疫苗具有保護效應,發(fā)現(xiàn)了一些在感染中有重要意義的分子靶標,并為探討腸道病毒71型感染在疫苗免疫和非疫苗免疫機體中的宿主反應的分子生物學特征,以及從這一水平上認識腸道病毒71型感染的致病機理和疫苗的免疫保護機理而提供資料。 由于本研究對象為獼猴屬的恒河猴,現(xiàn)有蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中關于獼猴屬蛋白的數(shù)據(jù)還不全面,結(jié)合直系同源序列聚類分析(COG)以及蛋白數(shù)據(jù)庫中現(xiàn)有靈長目其它物種的蛋白信息,初步證實了13個尚未在氨基酸或蛋白水平報道的靈長目某已知蛋白在恒河猴中的同源蛋白。
[Abstract]:In recent years , there has been a significant increase in the number of cases of hand - and - mouth disease caused by enteroviruses . In recent years , the number of cases of hand - foot - mouth disease caused by Enterovirus 71 as the main pathogen has been increasing .

The results showed that the immune protective effect induced by the immune animal could inhibit the proliferation of the virus in the organs and tissues of the rhesus monkey after vaccination . The results showed that the immune protective effect induced by the immune animal could inhibit the proliferation of the virus in the organs and tissues of the body .

In addition , a proteomic study was carried out in the hypothalamus of the central nervous system of rhesus monkeys in rhesus monkeys immunized with post - immune challenge and unimmune challenge . Proteomics - related techniques were used : protein two - dimensional electrophoresis separation protein and professional software Imagemaster 7.0 for image analysis , the protein spots with different expression levels in the viral infection group and the vaccine protection group were quantitatively studied , and the difference protein spectrum was established by matrix - assisted laser desorption ionization time - of - flight mass spectrometry and protein information database .

The expression of PFN1 and PFN2 was correlated with membrane integrity or endocytosis . The expression of PFN1 and PFN2 correlated with cell membrane integrity or endocytosis in the course of infection .
In this paper , the changes of the expression quantity of the protein expressed in the infected group and in the vaccine protection group were analyzed . The changes of the expression quantity of the protein in the infected group and the vaccine protection group showed that the protective effect of the inactivated vaccine could be achieved .

Since the present study is a rhesus monkey of the genus Macaque , the data of the existing protein database on the genus Macaque is not comprehensive , and the homologous protein of 13 known proteins which have not been reported at amino acid or protein levels in rhesus monkeys has been preliminarily confirmed by combining the direct sequence homology cluster analysis ( COG ) and the protein information of other species in the protein database .

【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 賀福初;蛋白質(zhì)組(proteome)研究——后基因組時代的生力軍[J];科學通報;1999年02期

2 何顏霞;付丹;;EV71感染相關神經(jīng)源性肺水腫和心肺衰竭[J];臨床兒科雜志;2008年12期

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本文編號：1885554