發(fā)布時(shí)間：2018-05-12 08:22

  本文選題：siRNA + 銅綠假單胞菌　； 參考：《華中科技大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：目的：MexAB-OprM外排泵系統(tǒng)在銅綠假單胞菌固有耐藥中起著重要的作用,本研究旨在探討RNA分子干擾銅綠假單胞菌MexAB-OprM外排泵MexB基因的效應(yīng)；觀察銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA01)野生株和MexAB-OprM外排泵變異菌株對(duì)小鼠致病性的差異。 方法：設(shè)計(jì)并合成2條21bp小分子干擾RNA(small interfering RNA, siRNA)序列,構(gòu)建干擾RNA表達(dá)載體,將帶有siRNA質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)入PAO1。應(yīng)用E-test方法檢測(cè)PAO1相應(yīng)抗生素MIC的變化;RT-PCR法檢測(cè)Me.xB的mRNA的表達(dá)變化。建立銅綠假單胞菌小鼠肺部感染的模型觀察siRNA干擾MexB基因的效應(yīng),分別于感染后1d,2d和3d給小鼠腹腔注射美羅培南(meropenem 100mg/kg,2次/d)。觀察各組小鼠肺大體和鏡下病理改變情況,細(xì)菌計(jì)數(shù),檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-1b(IL-1b)和白介素-12(IL—12)表達(dá)水平,并檢測(cè)肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)表達(dá)水平。同時(shí)建立銅綠假單胞菌野生株K767,銅綠假單胞菌MexAB-OprM高表達(dá)(nalB)和MexAB-OprM敲除株(△mexB)小鼠肺部感染模型,并于感染后1,2和3d應(yīng)用美羅培南(meropenem 100mg/kg,2次/d)治療小鼠,治療后第3d,7d,14d進(jìn)行各組小鼠各項(xiàng)指標(biāo)觀察。 結(jié)果：MIC結(jié)果顯示siRNA能明顯提高PAO1對(duì)抗生素的敏感性。RT-PCR結(jié)果顯示siRNA干擾后的PA01MexB基因表達(dá)明顯下降(p0.05)。siRNA干擾組小鼠,感染后3d,5d,7d肺部細(xì)菌負(fù)荷明顯下降。相對(duì)于siRNAnon (PA01)組和Scrambled siRNA(陰性分子對(duì)照)組,siRNA組小鼠肺部病理學(xué)改變明顯減輕。siRNA干擾組在感染早期(3d),中性粒細(xì)胞的募集(MPO)和炎性細(xì)胞因子(IL-1b和IL-12)升高,在感染后期(7d)上述因子表達(dá)水平下降。MexAB-OprM外排泵變異小鼠感染模型的結(jié)果顯示,相比于K767和nalB組,在感染早期(3d),ΔmexB組中性粒細(xì)胞的募集(MPO)升高,在感染后期(14d)炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平下降。各組血清巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-2(MIP-2)的水平在感染期間均持續(xù)升高,ΔmexB組與K767和nalB組相比,組間差異顯著,p0.05。ΔmexB組細(xì)菌載量在感染后7,14d下降明顯,同時(shí)ΔmexB組具有明顯減輕的病理學(xué)改變。與K767和nalB組相比,在感染早期(3d),ΔmexB組中性粒細(xì)胞的募集(MPI)和炎性細(xì)胞因子(IL-1b,IL-12和TNF-a)水平明顯升高,在感染后期(14d),MPO和細(xì)胞因子表達(dá)水平明顯下降。三組血清巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-2(MIP-2)的水平在感染期間均持續(xù)升高,ΔmexB組與K767和nalB組相比,組間差異顯著,p0.05。 結(jié)論：siRNA可以同時(shí)抑制(?)MexAB-OprM外排泵MexB基因的表達(dá)和提高銅綠假單胞菌對(duì)抗生素的敏感性。體內(nèi)研究顯示,siRNA能有效減少小鼠慢性肺部感染的細(xì)菌載量,說(shuō)明以MexB為靶基因設(shè)計(jì)的siRNA分子能控制銅綠假單胞菌所致的感染。本研究為慢性銅綠假單胞菌肺部感染的治療提供了新的思路。此外,MexAB-OprM外排泵缺陷菌株ΔmexB組的肺部病變明顯輕于nalB組,表明MexAB-OprM外排泵系統(tǒng)在銅綠假單胞菌慢性肺部感染發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of RNA molecules on the resistance of Pseudomonas aeruginosa ( Pseudomonas aeruginosa ) to Pseudomonas aeruginosa ( Pseudomonas aeruginosa ) .
The pathogenicity of Pseudomonas aeruginosa ( PA01 ) wild strain was observed in mice .
Methods : Two 21bp small interfering RNA ( siRNA ) sequences were designed and synthesized . The interfering RNA expression vector was constructed . The expression of MIC of PAO1 was detected by E - test . The effect of siRNA on the mRNA expression of ME.xB was detected by RT - PCR . The expression level of interleukin - 1b ( IL - 1b ) and interleukin - 12 ( IL - 12 ) in BALF were measured and the expression level of myeloperoxidase ( MPO ) in lung tissues was detected .
Results : The results showed that siRNA could significantly increase the sensitivity of PAO1 to antibiotics . Compared with group K767 and nalB , the level of TNF - a decreased significantly after infection .
Conclusion : siRNA can inhibit the expression and the sensitivity of Pseudomonas aeruginosa to antibiotics at the same time . In vivo studies show that siRNA can effectively reduce the bacterial load of chronic pulmonary infection in mice .

【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王文敏;徐志豪;;銅綠假單胞菌生物被膜形成的調(diào)控及治療對(duì)策研究進(jìn)展[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年01期

，

本文編號(hào)：1877866