發(fā)布時間：2018-05-11 17:29

  本文選題：基因敲除 + 打靶載體構(gòu)建��； 參考：《華東師范大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)是一類具有七次跨膜結(jié)構(gòu)域的受體超家族,占人類基因組的3%-4%,具有廣泛的生理功能,并且是最重要的藥物作用靶點。粘附亞家族成員絕大多數(shù)為功能不明、配體未知的孤兒受體。闡明該家族成員的生理功能對于基礎(chǔ)理論研究和潛在藥物靶點的發(fā)現(xiàn)具有十分重大的意義。 GPCR粘附家族是一類非常獨特的GPCRs亞家族,它是GPCRs家族中唯一具有與其他膜蛋白家族(例如酪氨酸激酶受體鈣粘素受體等)相類似長的N末端結(jié)構(gòu)的成員,很明顯對于G蛋白粘附家族的研究還需要很多工作要完成。所以我們設(shè)計了GPCR粘附家族成員中Gpr56, Bail, Gpr111的完全基因敲除打靶載體以及Gpr126的條件性基因敲除載體,用來研究上述基因的功能。 基因敲除小鼠模型是在動物體內(nèi)研究基因功能的最重要和可靠的手段之一。由于PCR、酶切和連接長片段目的序列的難度,利用常規(guī)的分子克隆的方法構(gòu)建基因敲除打靶載體一般耗時較長,甚至無法完成特定基因打靶載體的構(gòu)建�；蚯贸夹g(shù)包括完全敲除基因打靶和條件性敲除基因打靶技術(shù)。本研究合理應(yīng)用Red重組系統(tǒng),通過兩次重組,實現(xiàn)完全基因敲除打靶載體的快速構(gòu)建。根據(jù)多次反復(fù)實驗,改進(jìn)了利用Red重組系統(tǒng)構(gòu)建條件性基因敲除打靶載體構(gòu)建的方法,能夠?qū)蓚�LoxP位點更加準(zhǔn)確的插入到目標(biāo)位置。
[Abstract]:G protein-coupled receptor (GPCR) is a kind of receptor superfamily with seven transmembrane domains, which accounts for 3- 4 of the human genome. It has a wide range of physiological functions and is the most important target of drug action. Most of the adherent subfamily members are orphan receptors with unknown function and unknown ligand. It is of great significance to clarify the physiological function of the family members for basic theoretical research and discovery of potential drug targets. The GPCR adhesion family is a very unique subfamily of GPCRs. It is the only member of the GPCRs family that has a long N-terminal structure similar to that of other membrane proteins (such as tyrosine kinase receptor cadherin receptor, etc.). It is clear that there is still much work to be done on the G-protein adhesion family. So we designed the complete gene knockout vector of Gpr56, Bailand Gpr111 and the conditional gene knockout vector of Gpr126 to study the function of these genes. Knockout mouse model is one of the most important and reliable methods to study gene function in animals. Because of the difficulty of PCR, enzyme digestion and ligation of long fragment target sequence, the construction of gene knockout targeting vector by conventional molecular cloning method is usually time-consuming, and even the construction of specific gene targeting vector can not be completed. Gene knockout techniques include complete knockout and conditional knockout. In this study, the Red recombination system was used to construct the complete gene knockout vector by twice recombination. According to repeated experiments, the method of constructing conditional gene knockout vector using Red recombination system is improved, and two LoxP sites can be inserted more accurately into the target position.
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R3416

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本文編號：1874889