發(fā)布時(shí)間：2018-05-09 22:20

  本文選題：EGFRvⅢ + scFv　； 參考：《南華大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的:應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)篩選出能與EGFRvⅢ特異性結(jié)合的單鏈抗體(single-chain Fv,scFv),并研究其生物學(xué)活性。 方法:利用抗原PEP3-KLH免疫BALB/c小鼠,擴(kuò)增VH、VL片段后拼接成scFv片段,克隆入pCANTAB5E-Thrombin載體,電轉(zhuǎn)化Hpd3細(xì)胞,構(gòu)建EGFRvⅢ特異性scFv噬菌體庫(kù)。用PEP3-BSA進(jìn)行ELISA篩選,陽(yáng)性克隆測(cè)序分析,并將陽(yáng)性EGFRvⅢ-scFv質(zhì)粒重新克隆入pCANTAB-Thrombin-His載體,轉(zhuǎn)化E.coli ER2738,IPTG誘導(dǎo)EGFRvⅢ-scFv表達(dá),上清沉淀后經(jīng)Ni Sepharose 4 Fast Flow純化得到可溶性scFv。間接免疫熒光及活體成像技術(shù)鑒定EGFRvⅢ-scFv與EGFRvⅢ的特異性結(jié)合。 結(jié)果:成功構(gòu)建了庫(kù)容為2.23×10~8的EGFRvⅢ-scFv噬菌體單鏈抗體庫(kù),ELISA篩選得到16個(gè)EGFRvⅢ-scFv克隆,取一克隆命名為EGFRvⅢ-scFv-2A1。EGFRvⅢ-scFv-2A1質(zhì)粒重新克隆入pCANTAB-Thrombin-His載體,成功表達(dá)可溶性EGFRvⅢ-scFv-2A1。EGFRvⅢ-scFv-2A1在體外可特異性結(jié)合HuH7-EGFRvⅢ細(xì)胞,但不結(jié)合HuH7-EGFR細(xì)胞;熒光標(biāo)記的EGFRvⅢ-scFv-2A1體內(nèi)可富集到U87MG-EGFRvⅢ細(xì)胞移植瘤,在U87MG細(xì)胞移植瘤處沒(méi)有富集。 結(jié)論:成功篩選抗EGFRvⅢ-scFv-2A1,該抗體在腫瘤的影像診斷和靶向治療中可能具有一定作用。
[Abstract]:Objective: to screen single-chain Fv-scFvv with specific binding to EGFRv 鈪，

本文編號(hào)：1867680