本文選題：乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù) + 神經(jīng)��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：陰道成形術(shù)是解決先天性無子宮無陰道(Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome,MRKHS)患者性生活和性角色的主要方法。手術(shù)方式較多,臨床上常采用自體或異體組織移植以及應(yīng)用人工代用品植入尿道和直腸之間的人工腔穴做襯里進(jìn)行陰道重建。乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)是較常用的一種術(shù)式,該術(shù)式成功率高,構(gòu)建的陰道具有足夠的長(zhǎng)度、寬度和潤(rùn)滑,不易攣縮,多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道患者有滿意的性生活。我們前期研究已經(jīng)觀察到帶蒂腸段形成新陰道后其組織形態(tài)、分泌功能和防御功能都發(fā)生了一系列的適應(yīng)性改變,但與性活動(dòng)關(guān)系密切的神經(jīng)纖維在移位后的乙狀結(jié)腸黏膜的分布和數(shù)量是否會(huì)發(fā)生變化?這種變化與患者的性生活質(zhì)量有何關(guān)系?目前尚無相關(guān)研究,本研究第一部分以此為切入點(diǎn),探討乙狀結(jié)腸陰道神經(jīng)分布和功能之間的關(guān)系。 結(jié)合國(guó)內(nèi)外對(duì)不同陰道成形術(shù)的臨床效果以及手術(shù)近期和遠(yuǎn)期并發(fā)癥的觀察研究,發(fā)現(xiàn)盡管傳統(tǒng)的陰道成形術(shù)解決了患者的痛苦,但同時(shí)也存在不同程度的缺陷。自體組織可造成機(jī)體的額外損傷,來源有限,異體組織存在免疫排斥和傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn),而且利用這些非陰道組織再造的陰道在形態(tài)學(xué)和組織學(xué)方面與自然陰道組織差別較大,在功能上存在一定的局限性。因此,探索和改進(jìn)陰道成形方法是必要而迫切的,組織工程學(xué)(tissue engineering)的興起為其提供了空間和可能。本研究嘗試構(gòu)建組織工程陰道動(dòng)物模型,期望建立形態(tài)和功能均接近正常的人工陰道,從而為在人體實(shí)現(xiàn)永久性替代、完美的形態(tài)修復(fù)和真正意義上的功能重建提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分：乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)后陰道黏膜神經(jīng)分布、雌激素受體表達(dá)及與性生活質(zhì)量的關(guān)系 目的：檢測(cè)乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)后陰道黏膜神經(jīng)分布和雌激素受體(ER)表達(dá)的變化,探討局部黏膜神經(jīng)纖維密度和ER表達(dá)與患者性生活質(zhì)量的關(guān)系,為乙狀結(jié)腸陰道功能的評(píng)估和合理術(shù)式的選擇提供依據(jù)。 方法：2006年1月-2010年12月,選擇在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科接受乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)的MRKHS患者為研究對(duì)象。觀察人工陰道解剖結(jié)構(gòu),對(duì)有性生活者,采用女性性功能量表(FSFI)中調(diào)查手術(shù)后患者近期的性生活質(zhì)量。留取手術(shù)時(shí)患者乙狀結(jié)腸斷端黏膜(乙狀結(jié)腸組,n=24),隨訪時(shí)取該患者的人工陰道黏膜組織(人工陰道組,n=24),取同期因非陰道疾患住院治療患者的陰道黏膜(自然陰道組,n=10)。采用免疫組化法檢測(cè)局部組織中的蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)的表達(dá)、血管活性腸肽(VIP)能神經(jīng)和神經(jīng)肽Y (NPY)能神經(jīng)的分布和密度,以及ER的表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR (FQ-PCR)檢測(cè)上述指標(biāo)的mRNA表達(dá)；進(jìn)一步分析人工陰道神經(jīng)密度和ER表達(dá)與隨訪時(shí)限有無相關(guān)性；分析人工陰道神經(jīng)分布和密度改變、ER表達(dá)和患者性功能指數(shù)評(píng)分之間的相關(guān)性。 結(jié)果： 1患者一般情況和FSFI評(píng)分 隨訪時(shí)限3個(gè)月-39個(gè)月。術(shù)后人工陰道外觀與自然陰道相似,平均長(zhǎng)度10.6±2.4cm,平均寬度2.9±0.6cm。隨訪時(shí)有性生活者17例(70.8%),性生活史從2個(gè)月-30個(gè)月不等�；颊逨SFI平均得分為24.11±1.33,23-29分之間有15例(88.2%),低于23分2例(11.8%)。其中性欲望評(píng)分為4.18±0.51,性興奮4.044±0.55,陰道潤(rùn)滑3.57±0.49,性高潮4.00±0.48,性滿意度5.06±0.65,疼痛3.25±0.90。 2神經(jīng)分布特征 人工陰道黏膜組織的固有層、黏膜肌層、黏膜下層和肌層可見豐富的PGP9.5陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維,VIP和NPY表達(dá)陽性的神經(jīng)纖維主要分布在血管周圍和肌層；人工陰道黏膜組織中PGP9.5陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維密度分別高于VIP和NPY陽性表達(dá)的神經(jīng)密度(38.22±8.93 vs7.45±2.01,6.13±2.38,P0.05)。人工陰道的神經(jīng)分布特征與乙狀結(jié)腸相似。陽性神經(jīng)纖維主要分布在自然陰道的固有層和肌層。 3人工陰道PGP9.5、VIP和NPY蛋白和mRNA的表達(dá) 本研究隨訪期限內(nèi),人工陰道黏膜PGP9.5、VIP、NPY陽性神經(jīng)纖維的IOD均低于原位乙狀結(jié)腸黏膜(38.22±8.93 vs 46.12±6.63,P10.05；7.45±2.01 vs 9.744±2.19,P20.05；6.13±2.38 vs 8.38±2.51,P30.05),但高于自然陰道黏膜(38.22±8.93 vs 22.76±6.61,Pj0.05；7.45±2.01 vs4.59±1.76,P20.05；6.13±2.38 vs 3.58±1.23,P30.05)。 人工陰道PGP9.5、VIP和NPY mRNA表達(dá)均較原位乙狀結(jié)腸降低(7.94±1.92 vs 10.17±2.24,Pj0.05；2.37±0.87 vs 4.14±1.32,P20.05；2.68±0.75 vs 3.79±0.98,P30.05),較自然陰道黏膜高(7.94±1.92 vs 5.68±0.47,Pj0.05；2.37±0.87 vs 1.04±0.36,P20.05；2.68±0.75 vs 1.15±0.33,P30.05)。 4人工陰道PGP9.5、VIP和NPY的表達(dá)與隨訪時(shí)限的相關(guān)性 人工陰道黏膜PGP9.5、VIP能陽性神經(jīng)纖維表達(dá)與隨訪時(shí)限均呈正相關(guān)(r1=0.73,Pj=0.01；r2=0.16,P2=0.04),即隨時(shí)間推移,移位的乙狀結(jié)腸總的神經(jīng)纖維密度和VIP能神經(jīng)纖維密度降低后又有逐步回升趨勢(shì)。人工陰道黏膜NPY能陽性神經(jīng)纖維表達(dá)與隨訪時(shí)限無相關(guān)性(r=0.30,P=0.38)。 5人工陰道ER蛋白和mRNA表達(dá)及與隨訪時(shí)限的相關(guān)性 與原位乙狀結(jié)腸比,人工陰道黏膜ER蛋白和mRNA表達(dá)明顯升高(19.56±5.29 vs 10.49±2.84,Pj0.05；4.36±1.41 vs 2.31±0.75,P20.05),但仍低于自然陰道黏膜的表達(dá)水平(19.56±5.29 vs 27.83±6.78,P10.05；4.36±1.41 vs 9.59±2.64,P20.05)。ER在人工陰道黏膜的表達(dá)與隨訪時(shí)限呈正相關(guān)(r=0.92,P=0.00),即隨時(shí)間推移,ER表達(dá)逐步升高,但在本研究隨訪期限內(nèi),仍低于自然陰道。 6人工陰道神經(jīng)分布、雌激素受體表達(dá)與患者性生活質(zhì)量的相關(guān)性 PGP9.5和VIP mRNA表達(dá)與ER mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r1=0.66,P1=0.03；r2=0.65,P2=0.03)；NPY mRNA表達(dá)與ER mRNA表達(dá)無相關(guān)性(r=0.46,P=0.15)。FSFI與PGP9.5、VIP mRNA及NPY mRNA表達(dá)均無相關(guān)性(r1=0.12,Pj=0.72；r2=0.25,P2=0.43；r3=-0.47,P3=0.13)；FSFI與ER表達(dá)無相關(guān)性(r=0.50,P=0.12)。 結(jié)論： 1通過對(duì)乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)后患者的性功能指數(shù)調(diào)查,發(fā)現(xiàn)該術(shù)式可使患者獲得較理想的性生活質(zhì)量。 2人工陰道黏膜的神經(jīng)分布特征與原位乙狀結(jié)腸相似,其神經(jīng)纖維密度介于乙狀結(jié)腸和自然陰道之間,且隨時(shí)間推移逐步回升,這種適應(yīng)性改變可能是改善患者遠(yuǎn)期性生活質(zhì)量的基礎(chǔ)。 3人工陰道黏膜ER表達(dá)隨時(shí)間的推移逐漸升高,提示移位后的乙狀結(jié)腸黏膜對(duì)雌激素的敏感性增高,可能是移位后乙狀結(jié)腸發(fā)生適應(yīng)性改變及人工陰道pH值降低的基礎(chǔ)。 4人工陰道黏膜PGP9.5和VIP mRNA表達(dá)與ER表達(dá)存在正相關(guān),提示雌激素可能對(duì)局部神經(jīng)有保護(hù)和促進(jìn)再生作用。 5在對(duì)患者術(shù)后3年隨訪的研究期間,問卷調(diào)查顯示患者FSFI評(píng)分與人工陰道的神經(jīng)纖維密度和ER表達(dá)無明顯相關(guān)性,提示影響性功能的因素復(fù)雜,需進(jìn)一步深入廣泛的研究。 第二部分：原代培養(yǎng)大鼠陰道黏膜上皮細(xì)胞的研究 目的：探討大鼠陰道黏膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴(kuò)增技術(shù),為構(gòu)建組織工程化陰道動(dòng)物模型提供種子細(xì)胞。 方法：(1)組織塊法：將SD大鼠陰道全層組織剪切成0.5-1mm2小塊,用解剖鑷均勻地接種于一次性塑料培養(yǎng)皿中,在37。C 5%CO2飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)3.0 h后,補(bǔ)加角化細(xì)胞無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。(2)酶消化法：取大鼠陰道全層組織,Dispase酶消化后分離上皮層,0.25%胰酶進(jìn)一步消化成細(xì)胞懸液,接種于無血清角化細(xì)胞培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)。觀察兩種方法細(xì)胞生長(zhǎng)所需時(shí)間、細(xì)胞形態(tài)和體外生長(zhǎng)特性,繪制生長(zhǎng)曲線,免疫組化鑒定。 結(jié)果： 1組織塊法于接種后3-5d有少量細(xì)胞自貼壁組織塊周圍爬出,3-4w后可傳代。酶消化法24-36h后細(xì)胞開始貼壁,至7-1 Od細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合,傳代培養(yǎng)。 2倒置顯微鏡下見上皮細(xì)胞呈不規(guī)則圓形或多邊形,連接成片后似鋪路石狀。掃描電鏡下細(xì)胞表面可見微絨毛嵴。兩種方法獲得的細(xì)胞形態(tài)一致,傳代后增殖特性和生長(zhǎng)曲線基本一致。 3組織塊法細(xì)胞培養(yǎng)成功率為37.5%,低于細(xì)胞法(50%),差異有顯著性(P0.05)。組織塊法第一代細(xì)胞產(chǎn)量為2.67±0.23(×106/L),酶消化法為2.89±0.94(×106/L),差異無顯著性(P0.05) 4角蛋白染色陽性,組織塊法細(xì)胞純度為92%,酶消化法為98%。第四代細(xì)胞為正常二倍體核型。 結(jié)論：兩種細(xì)胞培養(yǎng)方法均能獲得不規(guī)則圓形或多邊形的陰道上皮細(xì)胞,但酶消化法較組織塊法細(xì)胞貼壁快,生長(zhǎng)時(shí)間短,細(xì)胞增殖良好,成功率高,能較迅速獲得較多細(xì)胞用于組織工程陰道的構(gòu)建。 第三部分：聚乳酸-羥基乙酸/Ⅰ型膠原復(fù)合支架與陰道上皮細(xì)胞的相容性研究 目的：利用組織工程學(xué)原理,探討聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)/Ⅰ型膠原復(fù)合支架材料與陰道上皮細(xì)胞的生物相容性,驗(yàn)證該材料作為組織工程陰道支架的可行性。 方法：酶消化法培養(yǎng)SD大鼠陰道上皮細(xì)胞,制備PLGA/I型膠原支架材料。四甲基偶氮唑鹽法測(cè)定支架材料浸提液對(duì)上皮細(xì)胞的毒性。上皮細(xì)胞接種于PLGA/I型膠原支架材料上體外培養(yǎng),檢測(cè)細(xì)胞與支架材料的黏附率,掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架材料上的生長(zhǎng)情況。將培養(yǎng)的細(xì)胞-支架材料移植到大鼠背部皮下,分別于2、4、8周取材,HE染色、免疫組化觀察細(xì)胞在支架材料上的生長(zhǎng)增殖。 結(jié)果：大鼠陰道上皮細(xì)胞在PLGA/I型膠原支架材料的浸提液中生長(zhǎng)及增殖良好。PLGA/I型膠原支架的細(xì)胞黏附率為71.8%±9.2%,明顯高于PLGA支架材料(63.4%±5.7%)。掃描電鏡觀察上皮細(xì)胞在復(fù)合支架材料上黏附、生長(zhǎng)良好。皮下埋植2周,細(xì)胞在支架孔隙內(nèi)生長(zhǎng)增殖,成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)；4周材料表面形成1-3層上皮；8周后,支架材料部分降解,上皮層次增加,呈極性排列,廣譜角蛋白免疫組化染色陽性。 結(jié)論：PLGA/I型膠原復(fù)合材料適合陰道上皮細(xì)胞的黏附生長(zhǎng),具有良好的相容性,可作為支架材料用于構(gòu)建組織工程陰道。 第四部分：組織工程陰道動(dòng)物模型的構(gòu)建 目的：利用組織工程學(xué)原理,體外分離培養(yǎng)SD大鼠陰道上皮細(xì)胞,以PLGA/I型膠原為支架材料,構(gòu)建人工陰道動(dòng)物模型,以探討更理想的陰道成形新術(shù)式的可行性,為進(jìn)一步臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：取10只SD大鼠陰道黏膜體外分離培養(yǎng)上皮細(xì)胞,接種于管狀PLGA/I型膠原支架材料的內(nèi)側(cè)面,體外培養(yǎng)后原位移植到去除陰道的大鼠體內(nèi),分別于術(shù)后1、3、6個(gè)月處死動(dòng)物,HE染色、Masson's染色和免疫組化動(dòng)態(tài)觀察組織學(xué)變化。 結(jié)果： 1大鼠的組織工程陰道重建手術(shù)成功完成。1只死于麻醉過量,觀察過程中3只大鼠發(fā)生腹腔感染,其中2只死亡,1只陰道閉鎖,其余6只大鼠陰道切口愈合良好,無陰道狹窄和塌陷。 2大體觀察：1個(gè)月,陰道腔內(nèi)可見島狀分布的黏膜,極薄,色紅,支架材料少部分降解,陰道深度約1.4cm；3個(gè)月,陰道黏膜漸增厚,粉紅色,有光澤,支架材料大部分降解,陰道深度約1.2cm.；術(shù)后6個(gè)月,組織工程陰道黏膜類似正常陰道黏膜,陰道深度約1.2cm.,無明顯狹窄。 3組織學(xué)觀察：術(shù)后1個(gè)月,僅有1-3層上皮細(xì)胞,未見平滑肌層,血管稀疏,膠原纖維較少,不均勻分布；術(shù)后3個(gè)月,上皮層增多,極性排列,可見少許平滑肌,間斷存在,膠原纖維增多,欠整齊；術(shù)后6個(gè)月,上皮層與正常陰道無明顯區(qū)別,基底層可見釘狀突起,少于正常陰道,平滑肌束增多,膠原纖維致密,排列整齊。免疫組化證實(shí)陰道內(nèi)腔面上皮組織的存在,與HE染色結(jié)果一致。 結(jié)論：以陰道上皮細(xì)胞和PLGA/I型膠原支架材料構(gòu)建的組織工程陰道與大鼠正常陰道相似,可以成功修復(fù)大鼠陰道缺損。臨床應(yīng)用組織工程技術(shù)治療先天性無陰道患者具有可行性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R-332;R713.3

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10 ;Sex&exercise——性愛與運(yùn)動(dòng)[N];華東旅游報(bào);2003年

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1 李雅釵;乙狀結(jié)腸陰道黏膜神經(jīng)分布與性生活質(zhì)量的關(guān)系及組織工程陰道動(dòng)物模型構(gòu)建的初步研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

2 周雯娟;宮頸癌治療后患者生活質(zhì)量與性生活狀況的研究[D];中南大學(xué);2012年

3 王璽坤;行瘀清熱法治療慢性前列腺炎綜合征臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李曉翠;全子宮與次全子宮切除術(shù)對(duì)女性性生活影響的Meta分析[D];吉林大學(xué);2012年

2 段佳佳;經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療對(duì)男性冠心病患者性生活的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

3 齊輝;全子宮與次全子宮切除術(shù)后對(duì)女性性生活質(zhì)量影響的臨床分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

4 龍穎;保留盆腔自主神經(jīng)在根治性子宮切除術(shù)中的循證醫(yī)學(xué)研究與基礎(chǔ)、臨床研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

5 許小林;尿道重建治療男性尿道狹窄對(duì)勃起功能、性生活質(zhì)量的影響[D];上海交通大學(xué);2008年

6 冷偉香;化療對(duì)卵巢功能影響的臨床分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

7 肖梓怡;女性盆底重建術(shù)對(duì)性功能的影響評(píng)價(jià)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

8 陳艷麗;改善生活質(zhì)量的宮頸癌手術(shù)的臨床與循證醫(yī)學(xué)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 張晴晴;促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑對(duì)乳腺癌化療患者的卵巢保護(hù)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

10 羅敏;FIGO Ⅰ-Ⅱ期宮頸癌患者治療后生存質(zhì)量的調(diào)查分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

本文編號(hào)：1860868