本文選題：稀有血型 + 等位基因��； 參考：《華東師范大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目前,國(guó)際輸血協(xié)會(huì)(ISBT)正式命名的人類紅細(xì)胞血型系統(tǒng)有30個(gè),包括近300個(gè)血型抗原。除ABO、Rh血型外,還存在一些稀有血型,這些稀有血型在人群中的比例非常低。在臨床輸血過(guò)程中即便供、受血者的ABO、Rh血型都相同,也有可能因?yàn)橄∮醒筒缓弦鹜N免疫輸血反應(yīng)。現(xiàn)有的血清學(xué)檢測(cè)方法僅能檢測(cè)少數(shù)稀有血型抗原,并且在應(yīng)用時(shí)往往還受到抗體缺乏或效價(jià)低下的限制。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展及其在血型研究中的應(yīng)用,目前幾乎所有血型系統(tǒng)的分子生物學(xué)機(jī)制都已闡明。根據(jù)稀有血型等位基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn),通過(guò)設(shè)計(jì)序列特異性引物,可以對(duì)稀有血型抗原等位基因進(jìn)行分型。這一方法的優(yōu)點(diǎn)是高通量,同時(shí)又能彌補(bǔ)目前血清學(xué)檢測(cè)中單克隆抗體不足的問(wèn)題,已越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于稀有血型篩選中。 多重PCR技術(shù)篩選紅細(xì)胞稀有血型即在同一反應(yīng)體系中加入多對(duì)針對(duì)不同血型抗原等位基因的序列特異性引物,根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行結(jié)果判讀的一種技術(shù)。但由于待檢血型抗原的特殊性,大多數(shù)高頻率抗原缺失型或低頻率抗原的血樣較難大量獲得,而無(wú)法獲得相應(yīng)的血型等位基因?qū)φ掌?從而限制了血型基因檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用。 我們建立了能夠同時(shí)篩選Oka、Fya和s三種血型等位基因SNP位點(diǎn)的多重PCR體系,并對(duì)438份隨機(jī)獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行了篩選。438份樣本中共篩選出2例Fy(a-)樣本,未檢出OK(a-)和s-樣本。同時(shí),為了驗(yàn)證我們所建立的多重PCR體系的靈敏性和特異性,我們采用了基于PCR的基因定點(diǎn)誘變技術(shù),成功構(gòu)建了s和Oka血型等位基因的含有突變SNP位點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒,以期作為多重篩選體系的高頻抗原陰性對(duì)照品,以驗(yàn)證多重PCR體系的敏感性和特異性。 OK血型系統(tǒng)是國(guó)際輸血協(xié)會(huì)(ISBT)于1999年命名的第24個(gè)血型系統(tǒng),其多態(tài)性較為簡(jiǎn)單,Oka是其唯一抗原。該抗原位于免疫球蛋白超家族分子CD147上,屬高頻抗原,國(guó)內(nèi)外關(guān)于OK(a-)表型罕有報(bào)道,目前僅在8個(gè)日本家庭和一個(gè)高加索人中發(fā)現(xiàn)null表型(OK(a-)),在其他人群中還未曾發(fā)現(xiàn)。 Oka抗原由BSG基因編碼,該基因全長(zhǎng)10.8kb,目前發(fā)現(xiàn)是多態(tài)性位點(diǎn)位于第二外顯子上,當(dāng)BSG基因cDNA274位發(fā)生單核甘酸G/A突變時(shí),導(dǎo)致Oka抗原92位氨基酸由原來(lái)的谷氨酸被賴氨酸所置換,從而形成罕見(jiàn)的OK(a-)表型。Oka抗原頻率非常高,目前國(guó)內(nèi)尚沒(méi)有關(guān)于OK(a-)表型的報(bào)道。本文采用全長(zhǎng)cDNA測(cè)序的方法分析漢族人群OK血型系統(tǒng)BSG基因的多態(tài)性,進(jìn)一步了解OK血型系統(tǒng)在中國(guó)人群中的分布狀況。共測(cè)序分析了42例隨機(jī)獻(xiàn)血員的OK血型系統(tǒng)BSG基因的全長(zhǎng)cDNA,檢出3處多態(tài)性位點(diǎn),分別為cDNA195位C/T突變、234位C/G突變和327位T/C突變。通過(guò)對(duì)其編碼序列進(jìn)行分析,表明這些位點(diǎn)突變不會(huì)引起所編碼氨基酸序列的改變,對(duì)其抗原性影響不大。 目前關(guān)于CD147分子在紅細(xì)胞上的作用研究較少,且相關(guān)研究都是在活體動(dòng)物中進(jìn)行的。CD147是一種高度糖基化蛋白,但其糖基化具有組織特異性,即在不同組織中其糖基化程度不同,這可能與其在不同組織中行使不同的功能有關(guān)。CD147在紅細(xì)胞上為單次跨膜糖蛋白,我們通過(guò)WB檢測(cè),確定其在紅細(xì)胞上的分子量為55KD,屬于高糖型。有人認(rèn)為紅細(xì)胞膜上的CD147分子行使與CD47相似的功能,即作為巨噬細(xì)胞識(shí)別并吞噬衰老紅細(xì)胞標(biāo)志,當(dāng)CD147與其配體結(jié)合時(shí),產(chǎn)生抑制吞噬的信號(hào)。年老紅細(xì)胞由于細(xì)胞膜上CD147的不斷減少,抑制信號(hào)減弱,從而被巨噬細(xì)胞吞噬。為了驗(yàn)證這種假說(shuō),我們通過(guò)毛細(xì)管離心的方法分離出年輕和年老紅細(xì)胞,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)這兩種細(xì)胞上的CD147表達(dá)量。流式檢測(cè)結(jié)果表明,年老紅細(xì)胞上的CD147表達(dá)量呈現(xiàn)明顯的下降趨勢(shì),平均下降比達(dá)33.56%。但是關(guān)于CD147在紅細(xì)胞上的作用及其配體等方面研究還需要進(jìn)一步進(jìn)行。
[Abstract]:At present , there are 30 blood types in human red blood cell system named ISBT , including nearly 300 blood type antigens . In addition to the ABO and Rh blood types , there are some rare blood types , which are very low in the population . With the development of molecular biology and its application in blood type research , the present invention has the advantages of high flux , and can make up for the shortage of monoclonal antibodies in serological detection .

However , because of the particularity of the blood type antigen to be detected , most of the high frequency antigen deletion type or low frequency antigen blood sample is difficult to obtain , and the corresponding blood type allele control can not be obtained , thereby limiting the application of the blood type gene detection technology .

In order to verify the sensitivity and specificity of multiple PCR systems , we have successfully constructed standard plasmids containing mutated SNP sites of s and Oka blood type alleles in order to verify the sensitivity and specificity of multiplex PCR system .

The OK blood type system is the 24th blood type system named by ISBT in 1999 . The polymorphism is simpler , Oka is its sole antigen . The antigen is located on the immunoglobulin superfamily molecule CD147 . It is a high frequency antigen . There are rare reports about OK ( a - ) phenotype at home and abroad . The null phenotype ( OK ( a - )) is only found in 8 Japanese families and a Caucasian population , and has not been found in other populations .

Oka antigen was encoded by BSG gene with a full length of 10.8 kb . At present , it was found that the polymorphism site was located on the second exon , which led to a rare OK ( a - ) phenotype .

CD147 is a highly glycosylated protein . CD147 is a highly glycosylated protein , but its glycosylation is different in different tissues .

【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R446.11;R3416

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 李振林,夏虎,劉克榮,安靚;在分子克隆中用PCR進(jìn)行定點(diǎn)突變[J];第一軍醫(yī)大學(xué)分校學(xué)報(bào);2002年02期

2 趙曉明;李志強(qiáng);;上海地區(qū)漢族人群9個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)42種稀有血型抗原的基因多態(tài)性[J];臨床輸血與檢驗(yàn);2009年04期

3 張巍,沈倍奮;一種快速簡(jiǎn)便的定點(diǎn)突變方法[J];免疫學(xué)雜志;2003年S1期

4 王晨;陳和平;岳丹琪;朱自嚴(yán);;上海地區(qū)人群中部分稀有血型篩選[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2007年05期

5 莫秋華,徐湘民,鐘雄霖,劉忠英;一種改進(jìn)的大引物PCR定點(diǎn)誘變方法[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2002年01期

，

本文編號(hào)：1859736