本文選題：小鼠肝移植 + 肝轉(zhuǎn)移瘤模型��； 參考：《浙江大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：背景： 目前已知調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)在移植和腫瘤免疫中都發(fā)揮了重要的作用。但是,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肝移植(LT)后對(duì)肝內(nèi)腫瘤的確切影響還不甚清楚。本實(shí)驗(yàn)的目的在于研究小鼠肝移植后移植肝內(nèi)免疫微環(huán)境改變對(duì)移植肝內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響,以期找到預(yù)防和控制臨床肝移植后腫瘤復(fù)發(fā)的新方法。 方法： 本實(shí)驗(yàn)采用小鼠肝移植后轉(zhuǎn)移瘤模型,在體內(nèi)水平研究了移植肝內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞介導(dǎo)的肝內(nèi)免疫微環(huán)境改變對(duì)移植肝內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響；體外腫瘤-淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)被用于檢測(cè)不同基因背景的淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷能力的差異；一系列免疫組化染色被用于檢測(cè)和分析移植肝內(nèi)浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞群及兩組間的改變；RT-PCR和ELISA被用于檢測(cè)Tregs和效應(yīng)性T細(xì)胞(Teffs)功能相關(guān)的各種調(diào)控因子的水平；流式細(xì)胞胞內(nèi)染色用于檢測(cè)活體Tregs和Teffs的功能狀態(tài)；淋巴細(xì)胞體外混合(Tregs-Teffs)和荷瘤裸鼠過(guò)繼免疫實(shí)驗(yàn)用于驗(yàn)證不同基因背景的Tregs對(duì)Teff增殖／凋亡以及腫瘤殺傷能力的影響。 結(jié)果： 異基因小鼠肝移植后,移植肝內(nèi)的轉(zhuǎn)移瘤生長(zhǎng)快于同基因移植組；異基因移植肝中浸潤(rùn)的Teffs功能下調(diào),無(wú)法有效殺傷腫瘤細(xì)胞；Tregs在異基因移植肝內(nèi)浸潤(rùn)增多,Tregs的各種免疫負(fù)向調(diào)節(jié)介質(zhì)表達(dá)上調(diào)；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞通過(guò)下調(diào)效應(yīng)T細(xì)胞細(xì)胞毒性介質(zhì)及炎性細(xì)胞因子的釋放,促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞凋亡和死亡；體外淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和荷瘤裸鼠過(guò)繼免疫實(shí)驗(yàn)證實(shí)異基因來(lái)源的Tregs可以明顯促進(jìn)Teffs凋亡及抑制其增殖,同時(shí)可以抑制其腫瘤殺傷能力。 結(jié)論： 異基因小鼠肝移植促進(jìn)了腫瘤在移植肝中的生長(zhǎng)；移植肝中Tregs浸潤(rùn)增多并伴隨負(fù)向調(diào)控功能增強(qiáng)；Tregs通過(guò)減弱Teffs的免疫殺傷功能、促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞的凋亡等機(jī)制為移植肝內(nèi)的腫瘤提供了免疫庇護(hù)；控制和干預(yù)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肝移植后介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸可能成為臨床肝移植后預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)的新方法。
[Abstract]:Background: Regulatory T cell Tregs have been known to play an important role in transplantation and tumor immunity. However, the exact effect of regulatory T cells on intrahepatic tumors after liver transplantation is unclear. The purpose of this study was to study the effect of immune microenvironment on tumor growth after liver transplantation in mice, and to find a new method to prevent and control tumor recurrence after liver transplantation. Methods: In this study, the effects of regulatory T cell mediated intrahepatic immune microenvironment changes on the growth of transplanted liver tumors were studied in vivo using a mouse model of metastatic tumor after liver transplantation. In vitro tumor-lymphocyte co-culture was used to detect the cytotoxicity of lymphocytes from different gene backgrounds to tumor. A series of immunohistochemical staining was used to detect and analyze the infiltrating lymphocyte groups in the transplanted liver and the changes between the two groups. RT-PCR and ELISA were used to detect the levels of various regulatory factors related to the function of Tregs and effectual T cell Teffs. Flow cytometry was used to detect the functional status of Tregs and Teffs in vivo, and Tregs-Teffs in vitro and adoptive immunoassay in nude mice bearing tumor were used to test the effects of Tregs with different gene backgrounds on Teff proliferation / apoptosis and tumor killing ability. Results: After allogeneic liver transplantation, the growth of metastatic tumor in allogeneic mice was faster than that in allogeneic transplantation group, and the function of infiltrating Teffs in allogeneic transplanted liver was down-regulated. The expression of Tregs was up-regulated by various immunoregulatory mediators which could not effectively kill tumor cells in allogeneic liver transplantation, and regulatory T cells down-regulated the toxic mediators of T cells and the release of inflammatory cytokines. The co-culture of lymphocytes and adoptive immunoassay in nude mice showed that allogeneic Tregs could significantly promote the apoptosis and inhibit the proliferation of Teffs and inhibit its tumor killing ability. Conclusion: Allogeneic liver transplantation promoted the growth of tumor in the transplanted liver, and the infiltration of Tregs in the transplanted liver was increased, and the negative regulatory function was enhanced by weakening the immune and killing function of Teffs. The mechanism of promoting the apoptosis of effector T cells provides immune shelter for tumor in liver transplantation, and controlling and intervening the immune escape of tumor mediated by regulatory T cells after liver transplantation may become a new method to prevent tumor recurrence after clinical liver transplantation.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1842410