本文選題：乙型肝炎病毒 + HBV��； 參考：《山東大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：研究目的： 1.研究乙肝病毒核心蛋白(Hepatitis B virus core protein, HBc)對(duì)人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(Human Telomerase Reverse Transcriptase, hTERT)表達(dá)的調(diào)控作用。 2.驗(yàn)證hTERT在HBc調(diào)控肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖中的關(guān)鍵作用。 3.探討乙肝病毒核心蛋白HBc調(diào)控hTERT表達(dá)的分子機(jī)制。 研究方法： 1.HBc蛋白影響肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的體內(nèi)試驗(yàn)研究 課題組前期試驗(yàn)結(jié)果顯示,HBc可在體外增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及克隆增殖能力。本論文在此研究基礎(chǔ)上,利用裸鼠皮下成瘤模型在體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證該現(xiàn)象。將HepG2.2.15細(xì)胞(1×107個(gè)/0.2ml)皮下接種裸鼠,經(jīng)10d左右腫瘤直徑達(dá)0.5cm。將成瘤小鼠隨機(jī)分為兩組,每隔3d分別注射2ug pshRNA-HBc質(zhì)粒和pshRNA-NC質(zhì)粒,每隔1d測(cè)量腫瘤直徑大小,計(jì)算腫瘤體積,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。2w后,處死裸鼠,取出瘤體,稱量瘤重。同時(shí),提取腫瘤組織總RNA, RT-PCR檢測(cè)hTERT和HBc mRNA的表達(dá)情況。 2.HBc蛋白對(duì)hTERT基因表達(dá)的調(diào)控作用 2.1HBc蛋白對(duì)hTERT表達(dá)的影響 課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,HBc可以促進(jìn)BEL7402細(xì)胞中hTERT mRNA的表達(dá),同時(shí)pshRNA-HBc亦可抑制HepG2.2.15細(xì)胞中hTERT mRNA的表達(dá)。本論文在此基礎(chǔ)上,將pcDNA3-HBc-HA質(zhì)粒和pcDNA3質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入BEL7402、Hela以及HepG2細(xì)胞中,培養(yǎng)48h后提取總蛋白,Western Blot檢測(cè)hTERT的蛋白的表達(dá)情況。同時(shí)為了進(jìn)一步檢測(cè)hTERT的表達(dá)定位情況,我們?cè)贖ela細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)入pcDNA3-HBc-HA質(zhì)粒和pcDNA3質(zhì)粒,48h后進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn),使用熒光抗體標(biāo)記hTERT蛋白,DAPI染核后利用熒光顯微鏡觀察hTERT的表達(dá)及定位情況。 2.2肝細(xì)胞肝癌組織標(biāo)本中HBc與hTERT表達(dá)的相關(guān)性分析 上述細(xì)胞試驗(yàn)完成后,我們又選取了16例肝細(xì)胞肝癌(HepatoCellular Carcinoma, HCC)組織標(biāo)本,分別提取各樣本的RNA和蛋白質(zhì),RT-PCR檢測(cè)每例標(biāo)本中HBc表達(dá)情況后,將各組織標(biāo)本分為HBc陽性和HBc陰性兩組。利用Western Blot比較這兩組標(biāo)本中hTERT蛋白的表達(dá)情況,光密度掃描分析蛋白表達(dá)強(qiáng)度,最后繪制散點(diǎn)圖,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組標(biāo)本中hTERT蛋白表達(dá)的差異。 3. hTERT在HBc促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用 為了進(jìn)一步研究HBc, hTERT和細(xì)胞增長(zhǎng)之間的關(guān)系,我們將hTERT-si或NC-si與pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染至BEL7402細(xì)胞中,繪制生長(zhǎng)曲線并進(jìn)行克隆形成試驗(yàn),檢測(cè)BEL7402細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖情況。另一方面,將hTERT-si或NC-si與HBc干擾質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至HepG2.2.15細(xì)胞,繪制生長(zhǎng)曲線并進(jìn)行克隆形成試驗(yàn),檢測(cè)HepG2.2.15細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖情況,反向驗(yàn)證hTERT在HBc促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用。 4.HBc對(duì)hTERT啟動(dòng)子活性的調(diào)控機(jī)制研究 4.1HBc對(duì)hTERT核心啟動(dòng)子的調(diào)控作用 為了明確HBc影響hTERT表達(dá)的機(jī)制,將pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體與攜帶有hTERT核心啟動(dòng)子的報(bào)告基因質(zhì)粒pGL3B-hTERT371分別共轉(zhuǎn)染至BEL7402,HepG2細(xì)胞,同時(shí)轉(zhuǎn)染pRL-TK作為內(nèi)參質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染24h后裂解細(xì)胞,利用96孔化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)樣品熒光強(qiáng)度,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另一方面,將pshRNA-HBc或pshRNA-NC與攜帶有hTERT核心啟動(dòng)子的報(bào)告基因質(zhì)粒pGL3B-hTERT371,以及內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后裂解細(xì)胞,利用96孔化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)樣品熒光強(qiáng)度,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,反向驗(yàn)證HBc對(duì)hTERT核心啟動(dòng)子的調(diào)控作用。 4.2HBc調(diào)節(jié)hTERT啟動(dòng)子活性關(guān)鍵區(qū)域的尋找 為進(jìn)一步明確HBc調(diào)節(jié)hTERT啟動(dòng)子活性的關(guān)鍵區(qū)域,將pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體與一系列截短缺失的hTERT啟動(dòng)子報(bào)告基因載體和內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染至BEL7402和HepG2細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24h后裂解細(xì)胞,利用96孔化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)樣品熒光強(qiáng)度。另一方面,利用pshRNA-HBc封閉HBc的表達(dá)后,將一系列截短缺失的hTERT啟動(dòng)子報(bào)告基因載體和內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染至HepG2.2.15細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24h后裂解細(xì)胞,利用96孔化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)樣品的熒光強(qiáng)度。 4.3HBc調(diào)節(jié)hTERT啟動(dòng)子活性關(guān)鍵位點(diǎn)的尋找 明確HBc影響hTERT啟動(dòng)子活性的關(guān)鍵區(qū)域后,我們通過相應(yīng)的文獻(xiàn)’分析了關(guān)鍵區(qū)域中包含的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),其中包括c-Ets-2的結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)合相關(guān)的文獻(xiàn),轉(zhuǎn)錄因子c-Ets-2在調(diào)控和維持hTERT基因啟動(dòng)子的活性中發(fā)揮重要作用。因此,我們?cè)O(shè)計(jì)并構(gòu)建了c-Ets-2結(jié)合位點(diǎn)突變的hTERT核心啟動(dòng)子報(bào)告基因載體,將pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體與c-Ets-2結(jié)合位點(diǎn)突變或野生型hTERT核心啟動(dòng)子報(bào)告基因載體,以及內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK分別共轉(zhuǎn)染BEL7402細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后裂解細(xì)胞,利用96孔化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)樣品熒光強(qiáng)度。另一方面,將pshRNA-HBc或pshRNA-NC與c-Ets-2結(jié)合位點(diǎn)突變或野生型hTERT核心啟動(dòng)子報(bào)告基因載體,以及內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后裂解細(xì)胞,利用96孔化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)樣品的熒光強(qiáng)度。 5.c-Ets-2蛋白及相關(guān)信號(hào)通路分子在HBc調(diào)控hTERT表達(dá)中的作用研究 5.1HBc對(duì)c-Ets-2蛋白核轉(zhuǎn)位的影響 結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道,c-Ets-2蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用依賴于其從胞漿到胞核的轉(zhuǎn)位過程。因此,我們將pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后,分別提取兩組細(xì)胞的胞核蛋白和胞漿蛋白,通過Western Blot檢測(cè)c-Ets-2蛋白在胞質(zhì)、胞核中的表達(dá)變化,明確HBc是否影響c-Ets-2蛋白的核轉(zhuǎn)位。 5.2HCC組織標(biāo)本中HBc表達(dá)與c-Ets-2蛋白細(xì)胞定位的相關(guān)性分析 在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,我們又提取了上述HCC組織標(biāo)本的胞漿、胞核蛋白,Western Blot檢測(cè)HBc陽性和HBc陰性兩組標(biāo)本中c-Ets-2蛋白的細(xì)胞定位情況,光密度掃描分析蛋白表達(dá)強(qiáng)度,最后做出散點(diǎn)圖進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性分析。 5.3c-Ets-2在HBc調(diào)控hTERT基因表達(dá)中的作用 為了進(jìn)一步驗(yàn)證c-Ets-2在HBc調(diào)節(jié)hTERT表達(dá)中的關(guān)鍵作用,我們將pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體與c-Ets-2-si或NC-si分別共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,24h后提取RNA, RT-PCR檢測(cè).hTERT基因mRNA的表達(dá)情況。 5.4HBc對(duì)ERK通路活化的影響 已有文獻(xiàn)報(bào)道3,ERK信號(hào)通路的活化可磷酸化c-Ets-2蛋白,進(jìn)而促進(jìn)其核轉(zhuǎn)位過程。因此,我們將pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染Hela和HepG2細(xì)胞,24h、36h和48h后提取細(xì)胞總蛋白,Western Blot檢測(cè)p-ERK1/2的表達(dá)情況,驗(yàn)證HBc是否影響ERK信號(hào)通路的活化。 研究結(jié)果： 1.HBc蛋白可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的體內(nèi)生長(zhǎng) 在裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中,檢測(cè)裸鼠體內(nèi)腫瘤體積大小和瘤重等指標(biāo),結(jié)果顯示pshRNA-HBc注射組的腫瘤的體積和瘤重均明顯小于pshRNA-NC質(zhì)粒注射組(P0.05)。RT-PCR顯示pshRNA-HBc注射組腫瘤組織中hTERT的mRNA表達(dá)量明顯低于對(duì)照組。 2.HBc可上調(diào)hTERT蛋白的表達(dá) 2.1HBc可上調(diào)肝癌細(xì)胞系中hTERT蛋白的表達(dá) 將pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至BEL7402,Hela, HepG2細(xì)胞,Western Blot結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染HBc表達(dá)載體組細(xì)胞hTERT蛋白表達(dá)量顯著高于轉(zhuǎn)染空載體組(P0.05)。同時(shí)免疫熒光結(jié)果顯示,hTERT蛋白主要定位于細(xì)胞核內(nèi),過表達(dá)HBc可以顯著提高Hela細(xì)胞中hTERT蛋白的表達(dá)。 2.2HBc陽性肝癌組織中hTERT蛋白的表達(dá)顯著升高 選取16例HCC組織標(biāo)本,分別提取各樣本的RNA和蛋白質(zhì),通過RT-PCR將各組織標(biāo)本分為6例HBc陰性標(biāo)本和10例HBc陽性標(biāo)本。Western Blot檢測(cè)hTERT蛋白的表達(dá),結(jié)果蛋白條帶進(jìn)行光密度掃描,計(jì)算相對(duì)表達(dá)量hTERT/β-actin,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示HBc陽性HCC標(biāo)本中hTERT蛋白表達(dá)水平顯著高于HBc陰性組(P0.05)。 3. hTERT在HBc促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用 生長(zhǎng)曲線和克隆形成試驗(yàn)的結(jié)果顯示,過表達(dá)HBc可以增強(qiáng)BEL7402細(xì)胞的生長(zhǎng)和克隆形成能力(P0.05),但hTERT-si的轉(zhuǎn)入使細(xì)胞生長(zhǎng)顯著受抑制,且可逆轉(zhuǎn)HBc對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和克隆增殖的促進(jìn)作用(P0.05)。另一方面,小干擾RNA封閉HBc的表達(dá)后HepG2.2.15細(xì)胞的增殖和克隆形成率受到明顯抑制(P0.05),但hTERT-si亦可導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速度的減慢,且可消除pshRNA-HBc和pshRNA-NC轉(zhuǎn)染組間細(xì)胞生長(zhǎng)和克隆形成能力的差異(P0.05)。以上結(jié)果從正反兩方面驗(yàn)證了hTERT在HBc促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖過程中發(fā)揮重要作用。 4.HBc對(duì)hTERT啟動(dòng)子活性的調(diào)控機(jī)制研究 4.1HBc蛋白上調(diào)hTERT核心啟動(dòng)子的活性 共轉(zhuǎn)染及雙熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,在BEL7402細(xì)胞中,隨著HBc蛋白表達(dá)量的升高,hTERT核心啟動(dòng)子的活性被顯著上調(diào)(P0.001),且具有明顯劑量依賴性；HepG2細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染HBc組hTERT核心啟動(dòng)子的活性亦明顯高于轉(zhuǎn)染空載體組(P0.05)。另一方面,在HepG2.2.15細(xì)胞中,小干擾RNA封閉HBc的表達(dá)可明顯下調(diào)hTERT核心啟動(dòng)子的活性(P0.05)。以上結(jié)果顯示,HBc可上調(diào)hTERT核心啟動(dòng)子的活性。 4.2hTERT啟動(dòng)子-130-197bp區(qū)域是HBc發(fā)揮調(diào)控作用的關(guān)鍵區(qū)段 共轉(zhuǎn)染及雙熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,HBc的過表達(dá)可以上調(diào)BEL7402和HepG2細(xì)胞中pGL3B-hTERT371, pGL3B-hTERT306, pGL3B-hTERT197啟動(dòng)子報(bào)告基因的活性(P0.05),而HBc對(duì)pGL3B-hTERT130啟動(dòng)子的活性無明顯影響；另一方面,小干擾RNA封閉HBc的表達(dá)可顯著降低HepG2.2.15細(xì)胞中pGL3B-hTERT371, pGL3B-hTERT306, pGL3B-hTERT197啟動(dòng)子報(bào)告基因的活性,而不影響pGL3B-hTERT130啟動(dòng)子的活性。以上結(jié)果表明,HBc可能通過hTERT啟動(dòng)子-130-197bp區(qū)域來促進(jìn)hTERT基因的轉(zhuǎn)錄。 4.3轉(zhuǎn)錄因子c-Ets-2結(jié)合位點(diǎn)是HBc激活hTERT啟動(dòng)子的關(guān)鍵位點(diǎn) 相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道1,在-130--197bp區(qū)域內(nèi)存在著c-Ets-2, bHLH2,AP-2, NF-E2/AP2四個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。鑒于轉(zhuǎn)錄因子c-Ets-2在維持hTERT轉(zhuǎn)錄活性中的關(guān)鍵作用,我們構(gòu)建了轉(zhuǎn)錄因子c-Ets-2結(jié)合位點(diǎn)突變的hTERT核心啟動(dòng)子報(bào)告質(zhì)粒pGL3B-c-EtsMUT。將pGL3B-c-EtsMUT或野生型pGL3B-hTERT371啟動(dòng)子報(bào)告基因載體與pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3表達(dá)載體分別共轉(zhuǎn)染BEL7402細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24h后提取蛋白,雙熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,HBc的過表達(dá)明顯上調(diào)野生型pGL3B-hTERT371啟動(dòng)子報(bào)告基因的活性(P0.05),而對(duì)pGL3B-c-EtsMUT啟動(dòng)子報(bào)告基因的活性無明顯影響。另一方面,在HepG2.2.15細(xì)胞中,將pshRNA-HBc或pshRNA-NC與pGL3B-c-EtsMUT或野生型pGL3B-hTERT371啟動(dòng)子報(bào)告基因載體共轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后裂解細(xì)胞,雙熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,小干擾RNA封閉HBc的表達(dá)明顯抑制野生型pGL3B-hTERT371啟動(dòng)子報(bào)告基因的活性(P0.05),而不影響c-Ets-2結(jié)合位點(diǎn)突變的pGL3B-c-EtsMUT啟動(dòng)子的活性。以上結(jié)果提示,轉(zhuǎn)錄因子c-Ets-2結(jié)合位點(diǎn)為HBc調(diào)控hTERT啟動(dòng)子活性的關(guān)鍵位點(diǎn)。 5. c-Ets-2蛋白及相關(guān)信號(hào)通路分子在HBc調(diào)控hTERT表達(dá)中發(fā)揮重要作用 5.1HBc可促進(jìn)肝癌細(xì)胞中c-Ets-2蛋白的核轉(zhuǎn)位 Western Blot結(jié)果顯示,HepG2細(xì)胞中HBc的過表達(dá)可以使c-Ets-2蛋白的胞核表達(dá)水平顯著升高,而胞漿表達(dá)降低。該結(jié)果提示HBc可促進(jìn)細(xì)胞中c-Ets-2蛋白的核轉(zhuǎn)位。 5.2HBc陽性HCC組織中胞核c-Ets-2蛋白的表達(dá)略有升高 Western Blot檢測(cè)HCC組織中c-Ets-2蛋白的胞核表達(dá),條帶進(jìn)行光密度掃描,計(jì)算相對(duì)表達(dá)量c-Ets-2/LaminA/C,結(jié)果顯示,HBc陽性HCC組織胞核c-Ets-2蛋白的表達(dá)水平略高于HBc陰性HCC組織,但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析未見顯著性差異(P0.05)。 5.3c-Ets-2蛋白在HBc調(diào)控hTERT基因表達(dá)中發(fā)揮關(guān)鍵作用 在HepG2細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染pcDNA3-HBc-HA或pcDNA3與c-Ets-2-si, RT-PCR結(jié)果顯示,與NC-si轉(zhuǎn)染組相比,c-Ets-2-si可顯著下調(diào)hTERT mRNA的表達(dá)水平,且可消除pcDNA-HBc-HA對(duì)hTERT表達(dá)的上調(diào)作用。 5.4HBc蛋白可促進(jìn)ERK通路的活化 Western Blot結(jié)果顯示,在Hela細(xì)胞中,與對(duì)照組相比,pcDNA3-HBc轉(zhuǎn)染后36h、48h即可促進(jìn)p-ERK1/2的表達(dá),同時(shí)hTERT蛋白的表達(dá)亦被明顯上調(diào)；在HepG2細(xì)胞中,HBc蛋白亦可以促進(jìn)p-ERK1/2的表達(dá)。結(jié)合文獻(xiàn),以上結(jié)果提示ERK通路的活化可能參與了HBc對(duì)hTERT蛋白表達(dá)和c-Ets-2蛋白核轉(zhuǎn)位的調(diào)控作用。 結(jié)論： 1.HBc蛋白可促進(jìn)肝癌細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)。 2.HBc可劑量依賴性地上調(diào)hTERT蛋白的表達(dá),且hTERT在HBc促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用。 3.HBc蛋白可上調(diào)hTERT啟動(dòng)子的活性,且轉(zhuǎn)錄因子c-Ets-2結(jié)合位點(diǎn)是HBc發(fā)揮調(diào)控作用的的關(guān)鍵位點(diǎn)。 4. c-Ets-2蛋白及相關(guān)信號(hào)通路分子在HBc調(diào)控hTERT表達(dá)中發(fā)揮著重要的作用。 意義： 1.該課題第一次提出了HBc對(duì)hTERT表達(dá)的調(diào)控作用,驗(yàn)證了hTERT在HBc調(diào)控肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖中的關(guān)鍵作用,為揭示HBc參與肝癌發(fā)生的分子機(jī)制提供了直接的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2.首次對(duì)HBc調(diào)控hTERT表達(dá)的分子機(jī)制進(jìn)行了深入研究,確定c-Ets-2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)為HBc調(diào)控hTERT啟動(dòng)子活性的關(guān)鍵位點(diǎn),并明確了c-Ets-2蛋白核轉(zhuǎn)位在HBc上調(diào)hTERT表達(dá)中的關(guān)鍵作用,為HBc蛋白調(diào)控基因表達(dá)的通路研究提供了新的數(shù)據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392.1

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6 馮少珍;李嬌;吳曉嬋;曹偉勝;廖明;;不同亞群禽白血病病毒5′LTR序列及啟動(dòng)子活性分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年08期

7 洪青;張忠輝;張曉舟;徐劍宏;李順鵬;;中度嗜鹽菌Halomonas sp. BYS-1啟動(dòng)子的克隆和測(cè)序[J];應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào);2005年06期

8 婁桂予;陳敏;陳彬;陳健;李渝萍;周度金;;HNF1α對(duì)人FXR啟動(dòng)子的調(diào)控作用[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2006年12期

9 李曉霞;王寶利;姚智;;用于研究CXCR4啟動(dòng)子活性的重組腺病毒的制備[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年01期

10 劉益民;左詠梅;周艷君;王曉鈞;童光志;相文華;沈榮顯;;Tat蛋白對(duì)馬傳染性貧血病毒長(zhǎng)末端重復(fù)序列啟動(dòng)子活性的影響[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2007年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 袁宏香;王躍國;倪紅兵;浦江;申嫻娟;鞠少卿;;IFN-γ和NF-κB抑制劑對(duì)BAFF-R基因啟動(dòng)子活性影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

2 孫文潔;廖正凱;周福祥;張紅艷;黃成虎;熊杰;周云峰;;放射線對(duì)肝癌細(xì)胞中端粒酶啟動(dòng)子活性的影響[A];2007第六屆全國放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

3 朱曉宇;桑建利;;G1期cyclin和CDK對(duì)pold1基因啟動(dòng)子活性的調(diào)控作用[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

4 欒好江;鄧潔英;史軼蘩;;干擾素-γ促進(jìn)IM-9細(xì)胞內(nèi)人生長(zhǎng)激素啟動(dòng)子活性機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

5 張菊;關(guān)恒云;張鵬舉;陳蔚文;劉帥;尚進(jìn);唐傳剛;姜安麗;;人β-catenin啟動(dòng)子的克隆及活性分析[A];山東生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

6 楊金波;段治軍;姚薇;Onel Lee;楊力;楊新穎;孫霞;Catherine C.Y.Chang;Ta-Yuan Chang;李伯良;;人ACAT-1基因P1啟動(dòng)子活性的調(diào)控及其分子機(jī)制[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

7 龔鳳英;鄧潔英;史軼蘩;;干擾素γ對(duì)垂體GH_3細(xì)胞中人生長(zhǎng)激素基因啟動(dòng)子活性的影響及其機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

8 于蘊(yùn)卿;劉棟;李鵬麗;王寧寧;;擬南芥cpSecA基因突變對(duì)GmSARK啟動(dòng)子活性的影響[A];中國植物學(xué)會(huì)七十五周年年會(huì)論文摘要匯編（1933-2008）[C];2008年

9 鄒黎;徐華國;任偉;金蕊;王怡;周國平;;轉(zhuǎn)錄因子Sp1及Sp3對(duì)人CD2AP啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

10 戚煒;宋保亮;楊金波;楊新穎;李伯良;;Cdx-2對(duì)人ACAT-2啟動(dòng)子活性的分化依賴性增強(qiáng)作用[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 馮世容;CD95基因轉(zhuǎn)染可提高胰腺癌對(duì)化療藥物敏感性[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

2 白毅;上海創(chuàng)建大規(guī)模細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)平臺(tái)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

3 記者 何德功;抗癌病毒可以破壞癌細(xì)胞[N];新華每日電訊;2002年

4 張中橋;NDRG2可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

5 張中橋;反義Cortactin基因能抑制肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

6 吳一福;PTFE血管材料可攜載VEGF基因轉(zhuǎn)染[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

7 高國起;膀胱癌基因治療新技術(shù)[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

8 吳軍　楊太成;主動(dòng)特異性免疫療法治療腫瘤[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

9 張中橋;第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院實(shí)現(xiàn)腫瘤特異性RNA干擾[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

10 吳一福;四醫(yī)大建成出血熱B淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王曉峰;基于CD133/Prominin 1基因啟動(dòng)子活性分選腫瘤干細(xì)胞的研究[D];吉林大學(xué);2012年

2 王芳;整合素連接激酶在胎盤血管性疾病中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2012年

3 楊明珍;乳腺癌中IBP的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制及其意義的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 柳永蕾;PI3K-Akt信號(hào)通路對(duì)鈣蛋白酶6表達(dá)及生物學(xué)功能的調(diào)控及其分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

5 冉擘力;p27基因轉(zhuǎn)染對(duì)血管平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和p27基因啟動(dòng)子活性的干預(yù)性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 謝偉;E2F1對(duì)細(xì)胞凋亡及β-catenin/TCF通路作用的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2007年

7 田緒;E2F1對(duì)MDM2-p53負(fù)反饋通路的影響[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2010年

8 許利軍;DC-SIGN在HIV感染者中變異情況及其啟動(dòng)子體外表達(dá)研究[D];浙江大學(xué);2007年

9 楊麗萍;JAK/STAT3通路與MAPK通路協(xié)同調(diào)節(jié)早期炎癥介質(zhì)TNF-α轉(zhuǎn)錄活性[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

10 紀(jì)敏;MCL1、AF1q和microRNA在白血病中的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王秀亮;人表皮細(xì)胞整合素β1啟動(dòng)子活性分析的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 王超;雙啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的LfcinB基因慢病毒載體的構(gòu)建及體外對(duì)SKOV3細(xì)胞作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

3 唐林;IL-6啟動(dòng)子活性檢測(cè)方法的建立及其在前列腺癌研究中的應(yīng)用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

4 齊永;前列腺癌細(xì)胞系DU145中阿司匹林對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶9啟動(dòng)子活性的影響[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

5 王煜;不同啟動(dòng)子在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的活性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

6 李煒;丙型肝炎病毒核心蛋白結(jié)合蛋白6（HCBP6）基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機(jī)制初步研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

7 高維哲;人PRL-3基因啟動(dòng)子的克隆及Snail調(diào)控元件的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

8 陳娟;外源蛋白在柔嫩艾美耳球蟲卵囊中的瞬時(shí)表達(dá)[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

9 張宏濤;NF-κB誘捕物寡聚核苷酸對(duì)大鼠移植腎早期炎性損傷的影響[D];鄭州大學(xué);2005年

10 何小寧;人溶菌酶基因乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建及其在小鼠乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2006年

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本文編號(hào)：1833636