本文選題：熒光素酶類 + 脂肪組織　； 參考：《北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2016年01期

【摘要】：目的:構(gòu)建一種可用于評價(jià)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(human adipose-derived stem cells,h ASCs)成骨向分化的熒光素酶報(bào)告系統(tǒng),以期能夠快捷、特異且定量的檢測出細(xì)胞在體外的成骨向分化情況,并且使將來活體監(jiān)測小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外源移植細(xì)胞的成骨分化成為可能。方法:將骨鈣素(osteocalsin,OC)基因的啟動(dòng)子克隆到熒光素酶luciferase報(bào)告基因的上游,構(gòu)建p LVX-OC_(pro)-Luc-Puro載體,進(jìn)行慢病毒包裝后感染人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,嘌呤霉素(puromycin)篩選陽性克隆,獲得穩(wěn)定整合OC_(pro)-Luc-Puro的細(xì)胞株,將該細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的第7和14天,觀察其在成骨誘導(dǎo)環(huán)境下分化的情況。在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的第7和14天檢測熒光素酶的活性,同時(shí)進(jìn)行茜素紅(Alizarin red S)染色定量及成骨相關(guān)基因表達(dá)水平的檢測,通過比較驗(yàn)證該熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)用于成骨評價(jià)的可行性。結(jié)果:成功構(gòu)建p LVX-OC_(pro)-Luc-Puro載體獲得穩(wěn)定整合報(bào)告基因的h ASCs細(xì)胞株。在OC_(pro)-Luc-Puroh ASCs成骨誘導(dǎo)的第7和14天,茜素紅鈣化結(jié)節(jié)染色結(jié)果均為陽性,且第14天的染色及定量結(jié)果明顯強(qiáng)于第7天。OC、Runx2及堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)基因的mRNA水平在成骨分化刺激下,其表達(dá)水平逐漸上升,同時(shí),熒光素酶被激活,且熒光素酶的活性在第14天明顯強(qiáng)于第7天,即熒光素酶表達(dá)的趨勢與茜素紅染色定量及成骨相關(guān)基因表達(dá)水平一致。結(jié)論:成功構(gòu)建了一種可用于評價(jià)成骨向分化的熒光素酶報(bào)告系統(tǒng),并通過與傳統(tǒng)的檢測成骨向分化方法(茜素紅染色定量、成骨相關(guān)基因表達(dá))對比,驗(yàn)證了該系統(tǒng)的有效性。
[Abstract]:Objective : To construct a luciferase reporter system which can be used to evaluate the osteogenic differentiation of human adipose - derived stem cells ( HASCs ) in vitro .

【作者單位】： 北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院·口腔醫(yī)院綜合二科;北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院·口腔醫(yī)院修復(fù)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81200763)資助~~
【分類號】：R329.28

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本文編號：1821201