本文選題：早孕因子 + 免疫抑制位點(diǎn)　； 參考：《鄭州大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的：通過(guò)制備缺失免疫抑制位點(diǎn)的人早孕因子重組表達(dá)蛋白和合成多肽,生產(chǎn)鑒定抗人早孕因子單克隆抗體。方法：以pMD18T-HSPE1模板,PCR擴(kuò)增缺失免疫抑制位點(diǎn)的人早孕因子基因片段,經(jīng)限制性內(nèi)切酶BamH I和XhoⅠ雙酶切后,連接到原核表達(dá)載體pGEX-6P-1中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX6P-EPF11。將表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,以0.5 mmol/L IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)GST-EPF11融合蛋白,Western blot鑒定。分別以純化的GST-EPF11融合蛋白和MC29合成多肽為免疫原,免疫Balb/c小鼠,免疫四次,每次免疫間隔時(shí)間為三周,四免后測(cè)定抗體效價(jià)。將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合,經(jīng)ELISA篩選與克隆化,生產(chǎn)鑒定單克隆抗體。結(jié)果：構(gòu)建了缺失免疫抑制位點(diǎn)的人早孕因子重組表達(dá)載體pGEX6P-EPF11,用0.5 mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)GST-EPF11融合蛋白,破碎表達(dá)菌體,獲取上清,成功獲得純化的GST-EPF11融合蛋白,分子量為35000。GST-EPF11融合蛋白免疫Balb/c小鼠和多肽免疫Balb/c小鼠,四免后測(cè)定小鼠效價(jià)分別為1：12 800和1：6 400,融合小鼠成功制備并篩選出四株抗人早孕因子單克隆抗體,分別為1E11、2D7、3F8和5G12,效價(jià)均在1：3 200以上。結(jié)論：在大腸桿菌中成功表達(dá)出GST-EPF11融合蛋白,以重組蛋白和合成多肽免疫小鼠,成功制備了抗人早孕因子的單克隆抗體。
[Abstract]:Aim: to produce and identify monoclonal antibody against human early pregnancy factor by preparing recombinant expression protein and synthetic polypeptide of human early pregnancy factor with deletion of immunosuppressive site. Methods: the fragment of human early pregnancy factor gene with deletion of immunosuppressive site was amplified by pMD18T-HSPE1 template. The gene fragment was digested by restriction endonuclease BamH I and Xho 鈪，

本文編號(hào)：1801314