發(fā)布時間：2018-04-24 17:48

  本文選題：金黃色葡萄球菌 + PV-殺白細胞素　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的： PV-殺白細胞素(Panton-Valentine Leukocidin，PVL)是由金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的細胞外毒素，是主要的致病因子。PVL對人和兔的多形核白細胞(PMNs)和巨噬細胞具有高度特異性，本課題目的：1、rPVL對THP-1巨噬細胞的細胞毒性研究；2、探討rPVL對THP-1巨噬細胞NF-κB信號通路及炎性細胞因子表達的影響。 方法：（1）用不同濃度rPVL(1nM/L，5nM/L，10nM/L，20nM/L，40nM/L和80nM/L)作用THP-1巨噬細胞1，3，6h，CCK-8實驗檢測rPVL對THP-1巨噬細胞活力的影響。（2）5nM/L，20nM/L和40nM/LrPVL作用THP-1巨噬細胞，流式細胞儀檢測細胞凋亡/壞死率。（3）分別用不同濃度的rPVL (5nM/L，20nM/L)刺激THP-1巨噬細胞，于1，3，6h收集細胞培養(yǎng)上清，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清IL-6、IL-8和TNF-α的濃度變化。（4）20nM/LrPVL刺激細胞1，3，6h后，收集細胞，提取總RNA，應(yīng)用RT-PCR法檢測細胞IL-6、IL-8、TNF-α、TLR2、TLR4和CD14mRNA表達。（5）應(yīng)用免疫細胞化學(xué)和Western blotting方法檢測rPVL刺激THP-1巨噬細胞NF-κB的蛋白表達。（6）NF-κB阻斷劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)阻斷NF-κB活化，RT-PCR法和ELISA法檢測其對細胞因子表達的影響。 結(jié)果：（1）隨著rPVL對THP-1巨噬細胞作用的濃度和時間的增加，細胞活性進行性下降。（2）rPVL作用THP-1巨噬細胞，流式細胞儀技術(shù)定量檢測凋亡/壞死，在低濃度（5nM/L rPVL）以凋亡為主，在高濃度(40nM/L rPVL)以壞死為主，且具有時間依賴性。（3）ELISA法檢測結(jié)果表明，rPVL能誘導(dǎo)THP-1巨噬細胞產(chǎn)生IL-8、IL-6和TNF-α，隨著rPVL刺激濃度的增加和時間的延長，IL-8和IL-6表達增加；TNF-α的表達高峰在rPVL刺激1h時，隨后逐漸降低。（4）免疫細胞化學(xué)方法檢測結(jié)果顯示：正常時，NF-κBp65蛋白在胞漿均勻分布，胞漿內(nèi)呈棕色均勻淡染，rPVL刺激后2h，NF-κBp65被激活轉(zhuǎn)入核內(nèi)，，染色以核明顯。Western blotting方法檢測結(jié)果表明，rPVL能直接誘導(dǎo)THP-1巨噬細胞迅速活化NF-κB蛋白，具有時間和濃度依賴性。（5）NF-κB阻斷劑PDTC能夠阻斷NF-κB信號通路，抑制IL-6和IL-8蛋白分泌和mRNA的表達。 結(jié)論：（1）rPVL對THP-1巨噬細胞具有毒性作用，使細胞活力減低，低濃度可誘導(dǎo)細胞凋亡，高濃度可引起壞死（。2）rPVL能誘導(dǎo)THP-1巨噬細胞因子IL-6、IL-8及TNF-α的表達，同時，可上調(diào)TLR4表達，活化NF-κB，提示rPVL可通過TLR4/NF-κB信號傳導(dǎo)通路，促進細胞因子的表達。（3）PDTC能抑制NF-κB通路，降低IL-6和IL-8等炎性因子的表達。
[Abstract]:Objective : To investigate the cytotoxicity of PVL on THP - 1 macrophages .
2 . To investigate the effects of rPVL on NF - 魏B signaling pathway and inflammatory cytokine expression in THP - 1 macrophages .

Methods : ( 1 ) The effects of rPVL ( 1 nM / L , 5 nM / L , 10 nM / L , 20 nM / L , 40 nM / L and 80 nM / L ) on the activity of THP - 1 macrophages were investigated .

Results : ( 1 ) With the increase of the concentration and time of rPVL on THP - 1 macrophages , the activity of cells decreased . ( 2 ) The apoptosis / necrosis of THP - 1 macrophages was detected by flow cytometry . The results showed that rPVL could induce IL - 8 , IL - 6 and TNF - 偽 in THP - 1 macrophages .
( 4 ) The results of Western blotting showed that rPVL can directly induce the activation of NF - 魏B protein in THP - 1 macrophages , which has time and concentration - dependent . ( 5 ) NF - 魏B inhibitor PDTC can block the NF - 魏B signal pathway , inhibit the secretion of IL - 6 and IL - 8 protein and the expression of mRNA .

Conclusion : ( 1 ) rPVL has a toxic effect on THP - 1 macrophages , which can induce apoptosis of THP - 1 macrophage factor IL - 6 , IL - 8 and TNF - 偽 .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R378

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本文編號：1797641