本文選題：Synaptotagminl + 小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：Synaptotagmin1(Syt1)作為鈣離子感受器,與SNAP-25,syntaxin和synaptobrevin一起構(gòu)成7S或者所謂的SNARE蛋白復(fù)合體,用于調(diào)節(jié)神經(jīng)末梢胞膜與神經(jīng)突觸囊泡的錨定和融合,引起胞內(nèi)鈣離子濃度升高誘導(dǎo)神經(jīng)囊泡內(nèi)神經(jīng)顆粒的胞吐發(fā)生。Syts是由一組結(jié)構(gòu)相關(guān)的家族蛋白組成,從脊椎動(dòng)物到人類高度保守于各類組織中。Syt1和Syt2在神經(jīng)組織豐富表達(dá),尤其Syt1在神經(jīng)和分泌囊泡膜富集,在外源刺激作用下,結(jié)合胞內(nèi)鈣離子誘導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)和分泌顆粒的胞吐。但是到目前為止,關(guān)于Syt1在生殖細(xì)胞中的功能研究很少,尤其與卵母細(xì)胞骨架相關(guān)。本課題中,我們深入地研究了Syt1在小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中的亞細(xì)胞定位及可能發(fā)揮的作用。免疫熒光標(biāo)記證明Syt1定位主要集中分布在MⅠ和MⅡ期紡錘體的兩極,這些可能與Syt1在小鼠卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中所行使的功能有關(guān),并且證實(shí)了Syt1在MⅠ和MⅡ期與中心體相關(guān)蛋白y-tubulin共定位。另外在卵母細(xì)胞各時(shí)期集中于皮質(zhì)區(qū)、部分分散于胞漿,在MⅠ和MⅡ期皮質(zhì)區(qū)有1/3靠近染色體的無(wú)定位區(qū)域(類似于卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒的分布特征),此亞細(xì)胞定位可能與Sytl對(duì)小鼠卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒的胞吐和受精功能有關(guān)(數(shù)據(jù)未列出)。紫杉醇處理卵母細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)上述Sytl的定位與紡綞體的組裝相關(guān)。紫杉醇試驗(yàn)后微管高度集中,在胞內(nèi)產(chǎn)生很多星體,免疫熒光觀察發(fā)現(xiàn)Syt1集中定位于星體和高度集中的微管兩極。在小鼠卵母細(xì)胞內(nèi)注射Syt1特定寡聚核苷酸(morpholino),它能與Syt1的mRNA或(和)DNA結(jié)合,特異性抑制其轉(zhuǎn)錄或(和)翻譯,降調(diào)其表達(dá)水平,注射前后免疫印跡試驗(yàn)證實(shí)了這一點(diǎn)。降調(diào)Syt1表達(dá)后,我們發(fā)現(xiàn)紡綞體組裝異常比例升高,且多數(shù)為無(wú)極、單極或者多極紡綞體,其次有拉長(zhǎng)紡錘體和形態(tài)各異紡錘體；染色體排列異常；第一極體排出率下降,并影響微管組織中心相關(guān)蛋白γ-tubulin的正確定位。另外小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程受到阻礙,染色體鋪片和紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)蛋白試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Syt1降調(diào)后后期染色體相對(duì)于對(duì)照組染色體未能完成正確分離并激活了后期紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)蛋白的活性,說(shuō)明Sytl對(duì)小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂中后期轉(zhuǎn)換進(jìn)程起著重要的作用。為了進(jìn)一步深入研究降調(diào)Sytl后引起的卵母細(xì)胞及其對(duì)分裂成熟進(jìn)程影響的缺陷,‘我們向卵母細(xì)胞內(nèi)注射了β5-tubulin-GFP mRNA, H2B-RFP mRNA和Syt1-MO的混合物,并應(yīng)用活細(xì)胞工作站延時(shí)拍攝系統(tǒng)去捕捉紡綞體、染色體和卵母細(xì)胞分裂進(jìn)程在降調(diào)了Syt1后的的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果證實(shí)了降調(diào)Sytl會(huì)影響卵母細(xì)胞紡綞體的遷移,紡綞體極的形成和穩(wěn)定；染色體阻滯在第一次分裂前中期或者中期(Pro-MI/MI);形態(tài)異常的紡錘體不能發(fā)揮正常功能,使染色體不能沿微管正常排列,導(dǎo)致卵母細(xì)胞不能完成中后期轉(zhuǎn)換且反復(fù)分離失敗和第一極體不能釋放。總之,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Syt1在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟的不同階段有不同的特異性定位,其定位主要集中分布在MⅠ和MⅡ期紡錘體的兩極,這些可能與Syt1在紡錘體的組裝和穩(wěn)定、染色體的排列、減數(shù)分裂中后期轉(zhuǎn)換和第一極體釋放的作用有關(guān),它可能作為一種微管組織中心蛋白監(jiān)控紡錘體狀態(tài)或者調(diào)控與紡錘體組裝和穩(wěn)定相關(guān)的蛋白；Syt1參與調(diào)控卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂中第一次分裂中后期轉(zhuǎn)換和第一極體的釋放。另外在卵母細(xì)胞各時(shí)期集中于皮質(zhì)區(qū)、部分分散于胞漿,而且在MⅠ和MⅡ期皮質(zhì)區(qū)有1/3靠近染色體的無(wú)定位區(qū)域。這些亞細(xì)胞定位可能與Syt1對(duì)小鼠卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒的胞吐和受精功能有關(guān)(數(shù)據(jù)未列出)。本研究分兩部分進(jìn)行： [目的] 確定Syt1對(duì)小鼠卵母細(xì)胞紡綞體組裝和穩(wěn)定的影響。 [研究方法] 卵子的收集和培養(yǎng) 本實(shí)驗(yàn)采用4-6周齡ICR品系雌性小鼠,斷頸法快速處死小鼠后取出卵巢,盛于一次性培養(yǎng)皿中,用刀片將卵巢剁碎,釋放出來(lái)停留在第一次減數(shù)分裂間期的未成熟卵母細(xì)胞。只將處于GV期的未成熟卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)移至M2培養(yǎng)滴中,清洗5-6次后,移至覆蓋有礦物油的M16培養(yǎng)滴或者含有2.5gMmilrinone的M16培養(yǎng)滴,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(37℃,5%C02,95%濕度)。培養(yǎng)到不同時(shí)期后取出用于免疫印跡、免疫熒光及藥物處理。 Taxol處理卵子 用M16培養(yǎng)液稀釋Taxol至10μmol/ml,待卵子發(fā)育至特定時(shí)期后,移至含Taxol的M16培養(yǎng)滴,于培養(yǎng)箱中孵育45分鐘,之后,將卵母細(xì)胞徹底洗凈用于免疫熒光實(shí)驗(yàn)。對(duì)照組中卵母細(xì)胞用相同濃度的DMSO進(jìn)行處理。 免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡檢測(cè) 卵母細(xì)胞放入含4%多聚甲醛的PBS中室溫30分鐘。在室溫下0.5%TritonX-100透膜20分鐘,卵母細(xì)胞采用添加1%BSA的PBS室溫封閉1小時(shí),然后加入1：200的兔抗Syt1抗體,1：200的兔抗y-tubulin抗體,1：200兔抗a-tubulin抗體或1：100anti-a-tubulin-FITC抗體放入4℃冰箱過(guò)夜。第二天采用含0.1%Tween20和0.01%Triton X-100的PBS中洗三次,每次5分鐘。卵母細(xì)胞在室溫下標(biāo)記上1：100的FITC/TRICT/CY5羊抗兔IgG,或1：100的FITC/TRICT/CY5羊抗鼠IgG1小時(shí)。之后采用Hochest或PI標(biāo)記8-15分鐘,再洗滌三次。最后卵母細(xì)胞移到載玻片上采用激光共聚焦掃描顯微鏡(Zeiss LSM510或者Zeiss LSM710META)檢測(cè)。每組實(shí)驗(yàn)最少重復(fù)三次,每組至少檢測(cè)50個(gè)卵母細(xì)胞。 免疫印跡 收集待檢測(cè)的卵子約200個(gè),加入等體積2×SDS loading buffer置于沸水中5分鐘,冰上冷卻后瞬時(shí)離心,存于冰上或-20℃。微量加樣器上樣,恒壓90V電泳至樣品位于濃縮膠邊緣,改為恒壓120V電泳2.5小時(shí)；4℃條件下轉(zhuǎn)膜,恒流200mA2.5小時(shí),蛋白轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜；TBS(20mM Tris,137mM NaCl,pH7.4)清洗膜三次,每次10分鐘；膜轉(zhuǎn)至封閉液中(5%脫脂奶粉/TBST)室溫放置1.5小時(shí)；TBST (l0mM Tris,150mMNaCl,0.05%Tween20, pH7.5)清洗三次,每次10分鐘；膜移至封閉液稀釋的一抗中4℃放置過(guò)夜；TBST清洗三次,每次10分鐘；膜移至封閉液稀釋的二抗中37℃放置1小時(shí)；TBST清洗三次,每次10分鐘；SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate kit (Thermo)檢測(cè)信號(hào)。重復(fù)標(biāo)記時(shí),膜移至洗脫液(p-mercaptoethanol14.3M,2%SDS,62.5mM Tris, pH6.7)中50。C放置30分鐘,依照上述方法重新與相應(yīng)的一抗、二抗孵育。本實(shí)驗(yàn)涉及到的抗體采用效價(jià)如下：兔抗Syt1：1000,鼠抗(3-actin1：1000,抗鼠IgG1：1000。 Morpholino注射 Morpholino是經(jīng)過(guò)修飾的人工合成反義寡核苷酸鏈小分子,與目的基因的mRNA或／和DNA結(jié)合,特異性抑制基因的轉(zhuǎn)錄或／和翻譯,可作為研究基因功能的小分子工具。本實(shí)驗(yàn)所用morpholino購(gòu)自GENE TOOLS公司Sytl-morpholino序列信息如下：5'-GACTGGCACTCACCATTTTTGGTTC-31; Control-morpholino序列信息如下：5'-CCTCTTACCTCAgTTACAATTT ATA-3。用Sigma水稀釋成儲(chǔ)存濃度為2mmM和4mM。注射5-10pl的1mM MO后卵母細(xì)胞在含2.5μM的Milrinone中培養(yǎng)24小時(shí)。新鮮M2培養(yǎng)液中洗5遍,移到新鮮M16培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)8小時(shí)和12小時(shí),收集這兩個(gè)時(shí)段的卵母細(xì)胞固定后做熒光免疫共聚焦試驗(yàn)。 [結(jié)果] 小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程中Syt1的表達(dá)和亞細(xì)胞定位 體外培養(yǎng)小鼠卵母細(xì)胞0小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、10小時(shí)和12小時(shí)分別對(duì)應(yīng)其發(fā)育階段的GV、GVBD、Pro-MI、MⅠ、AⅠ和MⅡ期,用免疫印跡法半定量檢測(cè)GV、MⅠ和MⅡ期的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示在小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育各時(shí)期均有Syt1的表達(dá)。為了檢測(cè)Sytl在小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育不同時(shí)期的亞細(xì)胞定位我們采用了免疫熒光法。Syt1主要集中分布在皮質(zhì)區(qū),部分散在分布于胞質(zhì),尤其從Pro-MI到MⅡ期的卵母細(xì)胞,染色體靠近的1/3皮質(zhì)區(qū)域沒(méi)有Syt1的熒光信號(hào)。上述分布特點(diǎn)類似卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒的分布。到了減數(shù)分裂中期(MⅠ)和(MⅡ),可以明顯地看到Syt1主要聚集在紡綞體的兩極。Syt1定位于小鼠卵母細(xì)胞紡綞體兩極現(xiàn)象使得我們思考：是否Syt1與其它的中心體相關(guān)蛋白如γ-tubulin有共定位?我們的研究表明在MⅠ和MⅡ期,Syt`的信號(hào)與γ-tubulin相重疊,進(jìn)一步證實(shí)了Sytl在兩極定位的現(xiàn)象。 紫杉醇處理后Sytl的定位 我們用了微管聚集藥物紫杉醇處理小鼠MⅠ期卵母細(xì)胞,以明確Syt1與微管動(dòng)力的關(guān)系。當(dāng)把10μmol/ml的紫杉醇加入培養(yǎng)液處理45分鐘,可以發(fā)現(xiàn)紡綞體微管高度聚集并在胞內(nèi)形成大量星體,Syt1的定位也發(fā)生了變化,集中定位于聚集的微管兩極和星體上,說(shuō)明Syt1參與微管紡錘體的組裝。 降調(diào)Sytl對(duì)MⅠ期和MⅡ期紡綞體組裝和染色體排列的影響 為了進(jìn)一步明確Syt1在小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中的作用,我們采用Syt的特異性反義寡核苷酸MO注射。免疫印跡圖顯示MO注射后,Syt1表達(dá)水平明顯下降。GV期的卵母細(xì)胞注射MO后在含有2.5mM的米力儂的M2培養(yǎng)液中抑制24小時(shí),然后釋放,轉(zhuǎn)移到M16培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),8小時(shí)和12小時(shí)后收集MⅠ和MⅡ期卵子。在Syt1-MO注射組,卵母細(xì)胞出現(xiàn)了各種形態(tài)異常的紡綞體和排列紊亂的染色體。異常紡錘體主要是極體異常的紡綞體,包括無(wú)極、單極、多極；其他異常的類型有拉長(zhǎng)和未組裝好的紡綞體。染色體異常主要表現(xiàn)為延遲分離和完全排列紊亂。Syt1-MO注射組卵母細(xì)胞紡錘體和染色體異常率分別為79.23%和63.90%(n=130),顯著高于對(duì)照組,χ2值分別為70.594和34.507,P值均為0.000。 降調(diào)Syt`的表達(dá)導(dǎo)致γ-tubulin從紡綞體的兩極脫落 從上面結(jié)果我們可以推斷Sytl參與了紡綞體組裝和極的聚集。我們以前的研究表明,在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂中,中心體蛋白γ-tubulin,是微管組裝和紡綞體形成的重要調(diào)節(jié)因子。通過(guò)MO注射降調(diào)Syt1的表達(dá),我們發(fā)現(xiàn)γ-tubulin的定位也受到了影響,均從紡綞體的兩極脫落下來(lái),散落在綞綞體微管上或胞漿中。 [結(jié)論] 在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程中,Sytl參與了微管的組裝,進(jìn)而影響到染色體排列,并且可能是作為一種微管組織中心相關(guān)蛋白,與其它中心體相關(guān)蛋白相互作用共同調(diào)節(jié)紡綞體的組裝。 [目的] 確定Sytl對(duì)小鼠卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂中后期轉(zhuǎn)換及其第一極體釋放的影響。 [研究方法] 卵子的收集和培養(yǎng)、免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)與第一部分相同。染色體鋪片 室溫下,卵母細(xì)胞在1%檸檬酸鈉溶液中放置10分鐘后,固定在甲醇和冰醋酸3：1新配置的溶液中,之后10mg/ml PI用于染色體染色。封片后置于共聚焦顯微鏡下觀察。Morpholino和β5-tubulin-GFP mRNA、H2B-RFP mRNA聯(lián)合注射Morpholino是經(jīng)過(guò)修飾的人工合成反義寡核苷酸鏈小分子,Syt1-morpholino序列信息如下：5'-GACTGGCACTCACCATTTTTGGTTC-3';Control-morpholino序列信息如下：5'-CCTCTTACCTCAgTTACAATTT ATA-3'。用Sigma水稀釋。通過(guò)注射5-10pl的2mmM MO和同體積的β5-tubulin-GFP mRNA和H2B-RFP mRNA的混和物。然后卵母細(xì)胞在含2.5μM的Milrinone中孵育24小時(shí)。新鮮M2培養(yǎng)液中洗5遍,置于新鮮M16培養(yǎng)液培養(yǎng)約2-3小時(shí)移入至含有10nMHoechst33342的M16培養(yǎng)液中放到活細(xì)胞工作站繼續(xù)培養(yǎng)14-15小時(shí)左右,并實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察其變化。注射過(guò)程中GV期卵子均置于2.5μMmilrinone-M2培養(yǎng)基中,30分鐘內(nèi)完成操作 卵母細(xì)胞的活細(xì)胞動(dòng)態(tài)觀察試驗(yàn) 為了追蹤紡綞體、染色體和卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程在降調(diào)了Sytl的卵母細(xì)胞內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化,我們向卵母細(xì)胞中注射β5-tubulin-GFP mRNA、H2B-RFP mRNA和Syt1MO混合物,每個(gè)卵母細(xì)胞大約注射10pL。經(jīng)注射的卵母細(xì)胞培養(yǎng)至GVBD后放置Perkin Elmer precisely Ultra VIEW VOX活細(xì)胞共聚焦成像系統(tǒng),繼續(xù)培養(yǎng)14-15小時(shí)左右。我們使用了窄帶通濾波器和一個(gè)綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白30%的削減中性密度日色度過(guò)濾器。根據(jù)tubulin-GFP和H2B-RFP的熒光強(qiáng)度,曝光時(shí)間在300毫秒到800毫秒之間。用IP Lab(Scanalytics)或AQM6(Andor/Kinetic-imaging)的軟件系統(tǒng)支持?jǐn)?shù)字化的延時(shí)成像技術(shù)。 [結(jié)果] 降調(diào)Sytl導(dǎo)致小鼠卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂前中期/中期阻滯、極體排出率降低 GV期卵母細(xì)胞注射MO后在含有2.5mmM的米力儂的M2培養(yǎng)液中抑制24小時(shí),然后釋放,轉(zhuǎn)移到M16培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),10小時(shí)或者12小時(shí)后收集AI或者M(jìn)Ⅱ期卵子。10小時(shí)收集的卵母細(xì)胞中,激光共聚焦纖維鏡觀察發(fā)現(xiàn)Sytl MO組的卵母細(xì)胞大多阻滯在第一次減數(shù)分裂前中期或者中期,然而在對(duì)照組中卵母細(xì)胞已進(jìn)入第一次減數(shù)分裂后期。Syt1-MO注射組Pro-MI/MI阻滯率為(91.80%,n=49),較對(duì)照MO注射組(31.48%,n=54)顯著增加(χ2=39.055,P=0.000)。另外,12小時(shí)收集的卵母細(xì)胞中,Syt1-MO注射組極體排除率(45.33%,n=154)與對(duì)照組相比差異有顯著性(60.76%,n=161,χ2=7.515,P=0.007)。 降調(diào)Syt`阻礙了染色體分離,并激活紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)活性 降調(diào)Syt1后影響了小鼠卵母細(xì)胞同源染色體的分離及其紡錘體的異�，F(xiàn)象促使我們考慮,進(jìn)一步證實(shí)Syt1-MO降調(diào)影響到小鼠卵母細(xì)胞阻滯在Pro-MI/MI期。我們進(jìn)行了染色體鋪片實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證染色體是否成功分離。如前所述,卵母細(xì)胞經(jīng)Syt1-MO和control-MO注射后繼續(xù)培養(yǎng)10小時(shí),固定鋪片后激光共聚焦顯微鏡觀察,結(jié)果表明,Syt1-MO注射組,染色體仍處于未分離狀態(tài)(10/10),相比較而言,對(duì)照組中大部分染色體已分離,表明染色體已進(jìn)入后期完成階段(9/10)。降調(diào)Syt`阻礙染色體的分離現(xiàn)象,使得我們考慮,降調(diào)后是否激活了紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)(SAC)的活性而引起,Bub3是SAC的一個(gè)重要組成成分,所以我們熒光定位檢驗(yàn)點(diǎn)蛋白Bub3的表達(dá),結(jié)果表明,Syt1-MO組ProMI/MI阻滯卵母細(xì)胞檢測(cè)到Bub3的特異性信號(hào),而對(duì)照組并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種特異性信號(hào)。這些數(shù)據(jù)表明Syt1降調(diào)后紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)活性被激活。 降調(diào)Syt`干擾小鼠卵母細(xì)胞的第一次減數(shù)分裂中后期轉(zhuǎn)換 為了進(jìn)一步深入研究降調(diào)Syt1后引起的卵母細(xì)胞成熟障礙,我們向卵母細(xì)胞內(nèi)注射了(35-tubulin-GFP mRNA、H2B-RFP mRNA和Syt1-MO或control-MO的混合物,并應(yīng)用了活細(xì)胞工作站延時(shí)拍攝系統(tǒng)去捕捉紡綞體和染色體的動(dòng)態(tài)變化。其中p5-tubulin-GFP mRNA和H2B-RFP mRNA分別用于觀察紡錘體和染色體。注射卵母細(xì)胞釋放后在M16培養(yǎng)液內(nèi)培養(yǎng)約4-5小時(shí)移至活細(xì)胞工作系統(tǒng)觀察。 結(jié)果顯示,在對(duì)照組中可觀察到紡錘體約GVBD后2小時(shí)開(kāi)始形成,之后清晰標(biāo)準(zhǔn)的雙極紡錘體慢慢遷移到卵母細(xì)胞皮質(zhì)區(qū),然后發(fā)生中后期時(shí)期的轉(zhuǎn)換,約觀察7小時(shí)第一極體釋放。而且我們觀察了約40個(gè)對(duì)照組卵母細(xì)胞,幾乎所有細(xì)胞在不同的減數(shù)分裂時(shí)期均呈現(xiàn)出對(duì)應(yīng)各時(shí)期的正常形態(tài)紡錘體和排列正常的染色體,大部分均能完成第一極體釋放。然而,在Syt1-MO注射組卵母細(xì)胞出現(xiàn)各種形態(tài)異常的紡錘體,直至13小時(shí)染色體仍不能正確分離且阻滯在Pro-MI/MI時(shí)期,之后約14小時(shí)染色體和紡錘體均出現(xiàn)紊亂分散在胞內(nèi),且部分染色體脫離紡錘體,接著出現(xiàn)異常的紡錘體和染色體重新聚合又分離現(xiàn)象,直至最后仍無(wú)第一極體出現(xiàn)。我們觀察了約30個(gè)Syt1-MO注射卵母細(xì)胞,幾乎所有細(xì)胞均出現(xiàn)了類似上述現(xiàn)象,只有兩個(gè)卵母細(xì)胞出現(xiàn)第一極體釋放,另外在觀察過(guò)程中,幾個(gè)細(xì)胞死亡 [結(jié)論] Syt1參與調(diào)控卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂中第一次分裂中后期轉(zhuǎn)換和第一極體的釋放。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

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8 張軼樂(lè);對(duì)非男性不孕IVF失敗后人MII期卵母細(xì)胞的多參數(shù)分析[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).計(jì)劃生育分冊(cè);2004年04期

9 陳雯;胡娟;魏玉蘭;劉群;朱桂金;;絲裂原活化蛋白激酶MAPK在不同年齡小鼠卵母細(xì)胞中的表達(dá)差異[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2009年09期

10 龍曉林;黃玉玲;孫筱放;杜紅姿;石宇;張文紅;李莉;;凍融液的溫度對(duì)人卵母細(xì)胞玻璃化凍融效果的影響[J];實(shí)用婦產(chǎn)科雜志;2009年10期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 孟凡力;;中間紡錘體組裝與胞質(zhì)分裂(英文)[A];第三屆細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的信號(hào)基礎(chǔ)研討會(huì)論文摘要[C];2010年

2 李媛;曹義娟;陳子江;鄭廣娟;楊勇;馬水英;姜晶晶;;人體外成熟卵子紡錘體及染色體的形態(tài)學(xué)分析[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 馬偉;周德山;翁靜;梁元晶;郭曉霞;;Pericentrin在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂紡錘體形成過(guò)程中的作用研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

4 江華;楊仲南;;Regulator of Spindle Formation in Meiosis1 (RSF1) is required for meiotic spindle formation in ArabidopsisThaliana[A];第二屆上海市植物生理學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2008年

5 王瓊;樓鐵柱;劉永學(xué);高沛永;;紡錘體毒物檢測(cè)新方法的建立和應(yīng)用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)毒理專業(yè)委員會(huì)第十次學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

6 史文清;朱士恩;楊中強(qiáng);侯云鵬;田樹(shù)軍;周光斌;;豬體外成熟卵母細(xì)胞玻璃化冷凍后紡錘體、染色體的形態(tài)變化以及孤雌發(fā)育的能力[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2004學(xué)術(shù)年會(huì)暨第五屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2004年

7 嚴(yán)興榮;雷安民;竇忠英;;小鼠不同卵齡卵母胞細(xì)紡錘體位置及對(duì)去核效率的影響[A];全國(guó)首屆動(dòng)物生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

8 程大也;梁彬;李豐;;Cdc42在小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育中影響紡錘體定位[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第九次會(huì)員代表大會(huì)暨青年學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2007年

9 楊振業(yè);國(guó)靜;沈義棟;丁，

本文編號(hào)：1773319