本文選題：抗呼吸道合胞病毒抗體 + CHO-S細(xì)胞　； 參考：《中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志》2017年02期

【摘要】：為了有效預(yù)防及治療呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染引起的疾病,在CHO-S細(xì)胞中表達(dá)了人源化抗RSV病毒抗體。以pCHO1.0為載體,分別通過Eco RⅤ(5')和PacⅠ(3')、AvrⅡ(5')和Bst Z17Ⅰ(3')雙酶切,將輕、重鏈克隆進(jìn)載體,采用電轉(zhuǎn)的方法,將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)CHO-S宿主細(xì)胞,通過嘌呤霉素和甲氨蝶呤壓力篩選以及有限稀釋法,獲得能穩(wěn)定表達(dá)抗體的單克隆細(xì)胞株。在搖瓶中進(jìn)行僅補(bǔ)加葡萄糖的流加培養(yǎng)試驗(yàn),CHO-S細(xì)胞在培養(yǎng)7 d時(shí)活細(xì)胞密度達(dá)到最大,為1.3×10~7 cells/ml,在培養(yǎng)12 d時(shí)細(xì)胞活性降低至80%以下,結(jié)束培養(yǎng),最終抗體表達(dá)水平達(dá)到130 mg/L,上清液中抗體總活性達(dá)到2.90×10~5 IU/ml。經(jīng)蛋白A親和色譜純化,抗體純度達(dá)到98%以上。
[Abstract]:In order to prevent and treat the disease caused by respiratory syncytial virus (RSV) infection, humanized anti RSV virus antibodies were expressed in CHO-S cells.Using pCHO1.0 as vector, the constructed plasmids were transfected into CHO-S host cells by double enzyme digestion with Eco R 鈪，

本文編號(hào)：1761302