本文選題：原位肝移植 + F蛋白��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：尋找肝臟F蛋白誘導(dǎo)免疫耐受的新靶標(biāo),探討肝移植免疫耐受的可能機(jī)制,為人類肝移植特異性免疫耐受的成功誘導(dǎo)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。 方法：留取空白對(duì)照組(未經(jīng)原位肝移植的Wistar大鼠,立即處死,n=6)、免疫排斥組(移植術(shù)后7d,Wistar→SD,n=6)和免疫耐受組(術(shù)前1周胸腺內(nèi)注射供體源性F蛋白0.4mg,移植后100d,Wistar→SD,n=6)受體大鼠的肝臟組織,Trizol法提取肝組織總RNA,逆轉(zhuǎn)錄PCR合成cDNA,采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)移植肝臟內(nèi)FLJ11565、MGC45806、DKFZp434K1210、F蛋白基因等免疫耐受相關(guān)基因的表達(dá)水平；采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法檢測(cè)移植大鼠肝組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的凋亡情況；利用氨基酸分析技術(shù)和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析肝臟勻漿液的氨基酸、中小分子代謝物等代謝組學(xué)的變化。 結(jié)果：1、排斥組的免疫耐受相關(guān)基因表達(dá)水平較空白組低,耐受組的目的基因表達(dá)水平遠(yuǎn)高于排斥組,且較空白組有所升高(P0.05)。2、空白組、排斥組和耐受組浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為(8.83±0.43)%、(11.32±1.29)%和(19.00±1.96)%,任意兩組的凋亡指數(shù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3、與排斥組相比,耐受組的�；撬帷⒐劝彼�、纈氨酸、甲硫氨酸、賴氨酸和色氨酸含量明顯降低(P0.05),甘氨酸含量明顯升高(P0.05)；移植肝臟代謝輪廓分析篩選出有意義的特征離子47個(gè),其中排斥組和耐受組均升高的離子5個(gè),耐受組較正常組和排斥組升高的離子2個(gè),降低的離子2個(gè)。經(jīng)HMDB數(shù)據(jù)庫(kù)搜索和結(jié)構(gòu)推導(dǎo)初步鑒定出不同代謝物18種,包括D-塔格糖、尿刊酸、本膽烷醇酮等。 結(jié)論：FLJ11565、MGC45806、DKFZp434K1210和F蛋白基因在調(diào)節(jié)特異性免疫耐受的過(guò)程中可能起著重要作用；移植物中浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的細(xì)胞凋亡分析有助于直觀判斷移植物處于排斥或耐受狀態(tài),移植物中浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的凋亡有助于誘導(dǎo)移植物免疫耐受；谷氨酰胺、甘氨酸和甲硫氨酸等免疫營(yíng)養(yǎng)氨基酸在肝臟移植免疫反應(yīng)中起重要的調(diào)節(jié)作用,各種免疫營(yíng)養(yǎng)氨基酸的綜合作用對(duì)于誘導(dǎo)原位肝移植術(shù)后大鼠免疫耐受非常重要,D-塔格糖、尿刊酸和本膽烷醇酮等代謝物可能影響免疫耐受的誘導(dǎo)。
[Abstract]:Objective: to search for a new target of liver F protein to induce immune tolerance, and to explore the possible mechanism of liver transplantation immune tolerance, and to provide experimental basis and theoretical support for successful induction of human liver transplantation specific immune tolerance.Methods: blank control group (Wistar rats without orthotopic liver transplantation) was used.Immediately put to death the liver tissue of the recipient rats, the immunological rejection group (7 days after transplantation) and the immune tolerance group (intrathymic injection of donor-derived F protein 0.4 mg, 100 d after transplantation). The liver tissue of the recipient rats was extracted by Trizol method. Reverse transcriptional PCR was obtained from the liver tissue.The expression of protein genes related to immune tolerance, such as the protein gene DKFZp434K1210F, was detected by fluorescence quantitative PCR technique in the transplanted liver of FLJ11565MGC45806 and DKFZp434K1210F.Deoxyribonucleotide terminal transferase mediated Nick end labeling method was used to detect apoptosis of infiltrating lymphocytes in liver tissue of transplanted rats, and amino acids in liver homogenate were analyzed by amino acid analysis and liquid-mass spectrometry.Changes in metabolites such as metabolites of small and medium molecules.Results the expression level of immune tolerance related genes in the rejection group was lower than that in the blank group, the expression level of the target gene in the tolerance group was much higher than that in the rejection group, and it was higher than that in the blank group.The apoptotic index of infiltrating lymphocytes in the rejection group and the tolerance group were 11.32 鹵1.29% and 19.00 鹵1.96%, respectively. The apoptotic index of any two groups was significantly different (P0.05 路3). Compared with the rejection group, taurine, glutamate, valine, methionine, taurine, glutamate, valine, methionine in the tolerance group were higher than those in the control group.The contents of lysine and tryptophan decreased significantly (P 0.05), the content of glycine increased significantly (P 0.05), and the metabolic profile analysis of transplanted liver screened out 47 significant characteristic ions, among which 5 were increased in both rejection group and tolerance group.Compared with the normal group and the rejection group, the tolerance group had 2 elevated ions and 2 decreased ions.By HMDB database search and structure derivation, 18 different metabolites were identified, including D- tag sugar, uranic acid, procholanolone and so on.Conclusion the MGC45806 DKFZp434K1210 and F protein genes may play an important role in the regulation of specific immune tolerance, and the analysis of apoptosis of infiltrating lymphocytes in grafts may be helpful in judging the rejection or tolerance of the grafts.Apoptosis of infiltrating lymphocytes in grafts contributes to the induction of graft immune tolerance. Immune nutritious amino acids such as glutamine, glycine and methionine play an important role in the immune response to liver transplantation.The comprehensive effects of various immuno-nutritive amino acids on the induction of immune tolerance after orthotopic liver transplantation in rats are very important. The metabolites such as D-tagose, urachinic acid and native cholanolone may affect the induction of immune tolerance.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392.4

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本文編號(hào)：1756859