發(fā)布時間：2018-04-15 02:18

  本文選題：胸主動脈縮窄 + Junctophilin-2�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的 應(yīng)用胸主動脈縮窄(TAB)手術(shù)建立小鼠心肌肥厚或心肌衰竭(簡稱:心衰)模型,以此模型為基礎(chǔ),我們致力于研究心肌疾病中橫管的結(jié)構(gòu)是否改變,以及探索橫管結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白junctophilin-2(JP-2)和caveolin-3(Cav-3)水平的變化。 方法 1小鼠分組及模型建立雄性約8周的C57BL/6小鼠,體重20-25 g,清潔級。手術(shù)前隨機(jī)將動物分假手術(shù)對照組(n = 6)和手術(shù)組(n = 12),將做手術(shù)的小鼠氯胺酮/甲苯噻嗪(劑量分別是40 mg/kg和5 mg/kg)腹腔注射麻醉,用鑷子將一段3/0的手術(shù)線放置于主動脈下。在頭臂動脈和左頸動脈分支之間的主動脈上放入27號針頭,絲線繞過主動脈和針頭打結(jié),然后移走針頭,這樣就把主動脈內(nèi)徑固定為針頭的直徑大小。假手術(shù)對照組僅觀察主動脈,但不結(jié)扎。 2心臟超聲手術(shù)后5周利用Sonos 5500給小鼠做心臟超聲,氯胺酮鹽酸(25 mg/kg)皮下注射使所有存活小鼠處于鎮(zhèn)靜狀態(tài),通過8 MHz的扇形探頭在左心室的長軸和短軸得到高分辨率的二維圖像,每秒可產(chǎn)生1000張圖。根據(jù)心臟超聲資料將手術(shù)組分為心肌肥厚組和心衰組。 3體外整體心臟外膜心肌細(xì)胞橫管的共聚焦成像完整的小鼠心臟室溫下langendorf灌流含有2.5μM的脂溶性的膜結(jié)構(gòu)熒光指示劑FM4-64的無鈣臺式液20-30分鐘,之后將心臟置于激光共聚焦顯微鏡的灌流腔內(nèi),同時灌流無FM4-64的無鈣臺式液。分別在左右心室的自由壁的不同部位采集10-15張圖片,圖片的平均冪頻譜代表每個心室的橫管結(jié)構(gòu)。 4 Western blot冰上收集小鼠左心室,?80°C保存。利用心臟裂解液提取左心室全蛋白,利用BCA法測蛋白濃度。取樣本于10%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳后,蛋白恒流濕轉(zhuǎn)入PVDF膜上,5%新鮮脫脂牛奶室溫封閉1 h,孵一抗4°C過夜,0.1% PBS-T洗膜3×15 min,室溫共同孵育二抗和HRP-GAPDH抗體1.5 h,0.1% PBST洗膜3×15 min,暗室中ECL顯色后曝光。利用image J軟件分析蛋白條帶。 5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用實(shí)驗(yàn)結(jié)果以(X|-)±s表示,兩組均數(shù)之間比較用非配對t檢驗(yàn),三組均數(shù)的比較采用Origin軟件做方差分析。P 0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。 結(jié)果 1心臟超聲結(jié)果小鼠大約在TAB手術(shù)后5周形成心肌肥厚或心衰,心肌肥厚的小鼠與假手術(shù)對照組相比在心臟重量、心重與體重的比值和左室重量均有顯著性的增加,但是肺重,舒張末期容積和射血分?jǐn)?shù)沒有明顯的改變。心衰組的小鼠不僅心臟重量、心重與體重的比值和左室重量變化更顯著,而且肺的重量和舒張末期容積明顯增加,射血分?jǐn)?shù)顯著性的下降。 2整體心臟的離體橫管成像在左心室,橫管結(jié)構(gòu)的紊亂開始于心肌肥厚階段,心衰小鼠的橫管遭到更嚴(yán)重的破壞。同樣橫管的冪頻譜的左移趨勢也起于心肌肥厚階段。然而,右心室和左心室不同,只是在心衰的小鼠發(fā)現(xiàn)橫管結(jié)構(gòu)的改變和橫管的冪頻譜左移。 3 Western blot與假手術(shù)對照組比較,心肌肥厚組、心衰組的JP-2和Cav-3表達(dá)呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢,心衰時JP-2和Cav-3表達(dá)的下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 1心臟形態(tài)和功能的變化和心肌橫管的改變有著密切的相關(guān)性。 2心肌橫管的重塑可能與興奮-收縮耦聯(lián)相關(guān)蛋白JP-2和Cav-3表達(dá)下降相關(guān)。
[Abstract]:Purpose

To establish a model of myocardial hypertrophy or myocardial failure ( heart failure ) in mice by thoracic aortic constriction ( TAB ) operation , we are focused on the study of whether the structure of transverse tube in myocardial diseases has changed , and to explore the change of the level of related protein junctionilin - 2 ( JP - 2 ) and Cav - 3 ( Cav - 3 ) .

method

The rats were randomly divided into two groups : control group ( n = 6 ) and operation group ( n = 12 ) . The rats were randomly divided into sham operation control group ( n = 6 ) and operation group ( n = 12 ) .

Two - dimensional images with high resolution were obtained by subcutaneous injection of ketamine hydrochloride ( 25 mg / kg ) at 5 weeks after 2 - cardiac ultrasound , and a high - resolution two - dimensional image was obtained in the long axis and the short axis of the left ventricle through a 8 MHz fan - shaped probe .

3 . A total of 2 . 5 . m u.M fat - soluble film - structured fluorescent indicator FM4 - 64 was injected into the perfusion cavity of a laser confocal microscope for 20 - 30 minutes , and then the heart was placed in the perfusion cavity of the laser confocal microscope , and the free calcium - free desktop solution without FM4 - 64 was injected .

The left ventricle of mice was collected by Western blot . The left ventricle was collected by Western blot . Left ventricular whole protein was extracted with cardiac lysates . The protein concentration was measured by BCA method . After the sampling was performed on 10 % sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis , the protein constant flow was transferred to PVDF membrane . After incubation for 1 h at room temperature , incubated for 1 h at room temperature , incubated for 1 h at room temperature , incubated at room temperature for 3 脳 15 min , and exposed in dark room ECL color . The protein bands were analyzed by image J software .

The results of statistical analysis were as follows : ( X 鹵 - ) 鹵 s , the comparison between the two groups was performed by non - paired t - test , and the comparison of the mean numbers of the three groups was performed by Origin software . P 0.05 represents a statistically significant difference .

Results

Heart weight , heart weight , weight ratio and left ventricular weight were significantly increased in mice with heart failure group , but the weight of heart weight , heart weight , weight and left ventricular weight were significantly increased , and the weight and end diastolic volume of lung increased significantly , and the ejection fraction decreased significantly .

However , the right ventricle and the left ventricle are different , but only in the heart failure mice find the change of the transverse tube structure and the left shift of the power spectrum of the horizontal tube .

The expressions of JP - 2 and Cav - 3 in the myocardial hypertrophy group and heart failure group were gradually decreased compared with the sham - operated control group , and the decrease of JP - 2 and Cav - 3 expression in heart failure group was statistically significant .

Conclusion

Changes in morphology and function of heart and changes of myocardial transverse tube were closely related .

remodeling of the myocardium transverse tube may be associated with a decrease in the expression of the excitation - shrink - coupled - associated protein jp - 2 and cav - 3 .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R542.2;R-332

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本文編號：1752083