發(fā)布時(shí)間：2018-04-12 00:27

  本文選題：人副流感病毒型(hPIV) + 血凝素神經(jīng)氨酸酶(HN)　； 參考：《病毒學(xué)報(bào)》2017年05期

【摘要】：為確定人副流感病毒3型(Human parainfluenza virus type 3,hPIV3)病毒包膜表面血凝素神經(jīng)氨酸酶(Hemagglutinin-neuraminidase,HN)糖蛋白莖部區(qū)十一肽重復(fù)序列中保守氨基酸中具有關(guān)鍵性作用的位點(diǎn),進(jìn)一步探討HN蛋白莖部區(qū)在融合機(jī)制中的重要作用。結(jié)合定點(diǎn)突變和同源重組技術(shù)將HN蛋白莖部區(qū)十一肽重復(fù)序列中5個(gè)保守氨基酸位點(diǎn)(I102、P111、L114、S119、I125)突變?yōu)楸彼?Alanine,A),通過痘苗病毒-T7聚合酶系統(tǒng)在BHK-21細(xì)胞中表達(dá)突變蛋白,定性定量檢測各突變體蛋白的促細(xì)胞融合活性、受體結(jié)合活性、神經(jīng)氨酸酶活性和半融合活性。突變體蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的促細(xì)胞融合活性均有不同程度下降,依次為野生型的6%、16%、14%、87%和4%,除S119A外其余4個(gè)突變型與野生型相比差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);突變體蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的受體結(jié)合活性也出現(xiàn)不同程度下降,依次分別為野生型的32.2%、77.4%、74.2%、83.9%和38.7%,其中I102A和I125A的受體結(jié)合活性與野生型相比差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);突變體蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的神經(jīng)氨酸酶活性分別為野生型的66.5%、73.1%、69.1%、76.1%和72.8%,與野生型相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果表明:莖部區(qū)十一肽重復(fù)序列對hPIV3HN蛋白的促細(xì)胞融合活性和受體結(jié)合活性具有重要意義。該區(qū)域氨基酸I102、P111、L114、I125具有關(guān)鍵作用,推測其能通過影響頭部區(qū)受體結(jié)合活性或是與融合蛋白的相互作用等不同方式導(dǎo)致HN蛋白結(jié)構(gòu)功能發(fā)生改變。
[Abstract]:In order to identify the key amino acid sites in the stem region of human parainfluenza virus human parainfluenza virus type 3 hPIV3, hemagglutinin-neuraminidase (Hemagglutinin-neuraminidase) hemagglutininin-neuraminidase (HNase) on the envelope of human parainfluenza virus (HPIV3),To further explore the important role of HN protein stem region in fusion mechanism.In combination with site-directed mutagenesis and homologous recombination technique, five conserved amino acid loci of HN protein were transformed into Alanine Alanine Agnin (Alanine Agna), and the mutant protein was expressed by vaccinia virus T7 polymerase system in BHK-21 cells.The cellular fusion activity, receptor binding activity, neuraminidase activity and semi-fusion activity of the mutants were determined qualitatively and quantitatively.The cell fusion activity of mutant protein I102A, P111A, L114Am, S119Afen, I125A, was decreased in varying degrees.The difference was not statistically significant (P 0.05).The results showed that the repeat sequence of undecapeptide in stem region was important to the cellular fusion activity and receptor-binding activity of hPIV3HN protein.The amino acid I102P111P111L114P125 plays a key role in HN protein structure and function changes by affecting the receptor binding activity of the head region or interacting with the fusion protein.
【作者單位】： 山東大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院病毒學(xué)研究室;山東大學(xué)國家糖工程技術(shù)研究中心微生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號:81672011),題目:副粘病毒HN蛋白頸部與自身頭部、F蛋白的相互作用及機(jī)制;國家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號:81271806),題目:副粘病毒融合蛋白連接區(qū)介導(dǎo)膜融合的分子機(jī)制 山東大學(xué)交叉培育項(xiàng)目(項(xiàng)目號:2015JC044),題目:病毒感染性疾病相關(guān)糖鏈的結(jié)構(gòu)與功能研究~~
【分類號】：R373.13

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本文編號：1738369