本文選題：髓樣分化蛋白-模擬肽　切入點(diǎn)：革蘭陰性菌　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2016年08期

【摘要】：目的探討髓樣分化蛋白-2模擬肽(MD-2 mimetic peptide,MDMP)對巨噬細(xì)胞吞噬革蘭陰性菌的影響及所致炎癥因子分泌的抑制效應(yīng)。方法采用PCR從p EGFP-C3質(zhì)粒中擴(kuò)增出表達(dá)EGFP的基因片段,通過基因重組構(gòu)建原核表達(dá)載體p ET-32a(+)-EGFP,經(jīng)測序鑒定后,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)PLys S中篩選出穩(wěn)定表達(dá)的重組菌p ET-32a(+)-EGFP-BL21(DE3)PLys S(簡稱為EGFPBL21)。以IPTG誘導(dǎo)重組質(zhì)粒表達(dá)后,通過免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測RAW264.7細(xì)胞對EGFP-BL21的吞噬能力以驗(yàn)證EGFP-BL21的構(gòu)建情況。進(jìn)一步檢測RAW264.7細(xì)胞對經(jīng)不同濃度MDMP(1.0、10、100μg/m L)預(yù)處理后的EGFP-BL21的吞噬效應(yīng);采用ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6的分泌水平。結(jié)果篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)EGFP的重組大腸桿菌BL21(DE3)PLys S,重組菌經(jīng)巨噬細(xì)胞RAW264.7吞噬后流式和激光共聚焦檢測結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)明顯的綠色熒光。MDMP預(yù)處理后,流式檢測結(jié)果顯示RAW264.7細(xì)胞對EGFP-BL21的吞噬能力受到明顯抑制,預(yù)處理組(10、100μg/m L)的吞噬系數(shù)(PI)顯著低于經(jīng)血清調(diào)理的陽性對照組(P0.01),且細(xì)胞培養(yǎng)上清TNF-α和IL-6的分泌水平顯著降低(P0.01)。結(jié)論 MDMP預(yù)處理可明顯抑制RAW264.7細(xì)胞對革蘭陰性菌的吞噬作用,并降低該過程中炎癥因子TNF-α和IL-6的分泌。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of myeloid differentiation protein 2 mimic peptide MD-2 mimetic peptidem on phagocytosis of gram-negative bacteria by macrophages and its inhibitory effect on the secretion of inflammatory factors.Methods the gene fragment expressing EGFP was amplified by PCR from p EGFP-C3 plasmid. The prokaryotic expression vector pET-32a (pET-32a) was constructed by gene recombination. After sequencing, the recombinant strain pET-32a (-EGFP-BL21DE3DE3PLys), which was stably expressed in Escherichia coli BL21(DE3)PLys S, was screened out.After the expression of recombinant plasmid was induced by IPTG, the phagocytic ability of RAW264.7 cells to EGFP-BL21 was detected by immunofluorescence and flow cytometry to verify the construction of EGFP-BL21.The phagocytic effect of RAW264.7 cells on EGFP-BL21 pretreated with different concentrations of MDMP1. 0 渭 g / mL and the levels of TNF- 偽 and IL-6 in the supernatant of cell culture were detected by ELISA.Results Recombinant Escherichia coli BL21(DE3)PLys Ss with stable expression of EGFP was obtained. After phagocytosis of recombinant Escherichia coli BL21(DE3)PLys Sby macrophage RAW264.7 and laser confocal detection, obvious green fluorescence was observed in the cells.The results of flow cytometry showed that the phagocytic ability of RAW264.7 cells to EGFP-BL21 was significantly inhibited, and the phagocytic coefficient of 10 100 渭 g / mL in pretreatment group was significantly lower than that of positive control group treated with serum (P 0.01), and the levels of TNF- 偽 and IL-6 in the supernatant of cell culture decreased significantly (P 0.01).Conclusion MDMP pretreatment can significantly inhibit the phagocytosis of RAW264.7 cells against Gram-negative bacteria and decrease the secretion of inflammatory cytokines TNF- 偽 and IL-6 during this process.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室重慶市生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍臨床病理學(xué)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81171848) 第三軍醫(yī)大學(xué)青年人才創(chuàng)新基金(SWH2011023)~~
【分類號】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳紅冰;劉志玲;;革蘭陰性菌分布及耐藥性分析[J];實(shí)用醫(yī)技雜志;2006年20期

2 高明;欒琳;陳玉浩;薛玉緯;楊玲;;革蘭陰性菌耐藥266例分析[J];中國誤診學(xué)雜志;2007年18期

3 余學(xué)清;陽曉;;革蘭陰性菌性腹膜炎的臨床防治策略[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2008年06期

4 朱曉娜;王邦松;李慶興;陳迎曉;張慧芳;張永虎;;159株致敗血癥革蘭陰性菌對β內(nèi)酰胺類抗生素的藥敏分析[J];中國臨床藥學(xué)雜志;2008年04期

5 許飛;康秀華;胡雪飛;張偉;;3年6707株革蘭陰性菌分布及藥敏動態(tài)變化[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2011年03期

6 鄧旭平;余路;程君;李家斌;;馬鞍山市某醫(yī)院2009～2010年隨機(jī)月份革蘭陰性菌耐藥性分析[J];安徽醫(yī)學(xué);2012年10期

7 宋逸萍;宛傳丹;;臨床主要革蘭陰性菌耐藥表型的檢測與分析[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2012年24期

8 周明行;;革蘭陰性菌敗血癥的病因?qū)W[J];人民軍醫(yī);1993年01期

9 張丁丁;革蘭陰性菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的研究進(jìn)展[J];寄生蟲病與感染性疾病;2003年02期

10 龐則娟;我院醫(yī)院感染革蘭陰性菌狀況及藥敏分析[J];華夏醫(yī)學(xué);2005年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 朱惠莉;周伊南;符禮剛;;華東醫(yī)院2003年第一季度臨床分離革蘭陰性菌耐藥情況監(jiān)測[A];第七屆全國老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨海內(nèi)外華人老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

2 周利;;2型糖尿病并發(fā)革蘭陰性菌敗血癥52例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

3 楊青;蘇美玲;陳曉;;我院近三年來革蘭陰性菌耐藥性分析[A];第五次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

4 蔡善民;;867株臨床感染革蘭陰性菌的耐藥性監(jiān)測[A];中國醫(yī)院協(xié)會第十六屆全國醫(yī)院感染管理學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2009年

5 陳軾;康云平;倪娜;佟敬敏;陸利佳;;尿內(nèi)毒素定量檢測快速診斷革蘭陰性菌導(dǎo)致泌尿道感染的研究[A];2011年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

6 李守勇;張婷蘭;;臨床常見革蘭陰性菌的分布調(diào)查及耐藥性觀察分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

7 陳楠;;尿液內(nèi)毒素定量測定對革蘭陰性菌泌尿系感染診斷價(jià)值的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

8 馮東霞;董方;徐樨巍;宋文琪;;兒童重癥監(jiān)護(hù)病房革蘭陰性茵的分布與耐藥性分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

9 張正;趙素蕊;王賀王;占偉;閆薇;彭秋生;劉文云;姜森;郭宇;;ICU病房革蘭陰性菌對抗菌素敏感性九年變化趨勢的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

10 孔清泉;屠重棋;裴福興;黃富國;劉浩;宋躍明;楊天府;付平;康焰;王光林;劉立根;方躍;張暉;李濤;龔全;冬石強(qiáng);陳日高;周春光;易敏;;地震期間與地震前ICU革蘭陰性菌院內(nèi)感染病原菌分布及耐藥性特點(diǎn)分析[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會論文選集[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 北京大學(xué)第三醫(yī)院 屠巴麗;頭孢菌素類抗生素的臨床合理應(yīng)用[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

2 劉晉平;注射用頭孢呋辛鈉[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 杜霄凌;2004-2013年華山醫(yī)院腦脊液分離革蘭陰性菌的耐藥性變遷及其感染的病例對照研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 倪朝輝;產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶革蘭陰性菌分子耐藥機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前9條

1 劉芳;依據(jù)美羅培南MIC評估革蘭陰性菌血流感染患者的轉(zhuǎn)歸[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 劉德玲;革蘭陰性菌與革蘭陽性菌致腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的臨床特征比較[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

3 林先耀;呼吸道感染中革蘭陰性菌的分離及耐藥性分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

4 劉芳;臨床常見革蘭陰性菌的耐藥性檢測及耐藥基因和耐消毒劑基因的分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 王靜;某綜合醫(yī)院2011年～2013年病原菌分布特征與耐藥性研究[D];山東大學(xué);2014年

6 郭育奇;革蘭陰性菌中金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的分子進(jìn)化和耐藥特征雙聚類分析[D];吉林大學(xué);2014年

7 費(fèi)君;2007-2009年安徽省痰標(biāo)本中分離的革蘭陰性菌耐藥性監(jiān)測[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

8 洪娜嬌;急性白血病化療后醫(yī)院感染的臨床分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

9 張釗冠;兒童下呼吸道感染病原體監(jiān)測及耐藥性分析[D];吉林大學(xué);2015年

，

本文編號：1723746