發(fā)布時間：2018-04-06 01:00

  本文選題：北京油雞　切入點：肺臟間充質(zhì)干細胞　出處：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2011年碩士論文

【摘要】：本實驗對北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞的分離、擴增、分化等特性進行了研究,建立了適合北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞體外分離、培養(yǎng)的體系及鑒定和誘導(dǎo)分化的方法,為今后進一步研究北京油雞肺間充質(zhì)干細胞提供技術(shù)平臺。本實驗是以9~14日齡北京油雞肺臟組織為材料,Ⅳ型膠原酶消化,percoll分離,獲得肺間充質(zhì)干細胞。進行免疫組化和RT-PCR鑒定,比較了3種培養(yǎng)體系對北京油雞肺間充質(zhì)干細胞增殖的影響,并對體外培養(yǎng)的北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞進行了誘導(dǎo)分化潛能的探索。實驗結(jié)果如下: 1.對9~14日齡北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞的細胞分離情況進行了對比,并且設(shè)計了三種培養(yǎng)體系摸索了適合北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞生長的最佳體系,建立了北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞體外分離培養(yǎng)的方法:以10日齡北京油雞雞胚肺臟組織為材料,Ⅳ型膠原酶消化,percoll分離,獲得肺間充質(zhì)干細胞。采用DMEM/F-12基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10% FBS+2mM L-谷氨酰胺+100IU/ml青霉素+ 100μg/ml鏈霉素+10 ng/ml bFGF的培養(yǎng)體系對北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞進行體外分離培養(yǎng)時,獲得的效果最佳。 2.體外培養(yǎng)的北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞呈長梭形。細胞的生長經(jīng)歷了第一階段潛伏期、第二階段對數(shù)生長期和第三階段平臺期,呈“S”形生長曲線。在體外北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞可以傳代至第25代細胞。各代次的細胞群體倍增時間分別為P3代37.3 h,P15代46.1 h,P21代54.1 h。說明了隨著培養(yǎng)代次的提高,細胞生長速度開始下降,到達20代以上,細胞生長緩慢。25代時,空泡化嚴(yán)重,細胞生長緩慢,形態(tài)不立體,傳代之后基本無貼壁細胞,無法繼續(xù)培養(yǎng)。 3.對體外培養(yǎng)的肺臟間充質(zhì)干細胞進行凍存與復(fù)蘇實驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn)P3、P15、P21代細胞復(fù)蘇后較凍存前的細胞活率明顯下降。所以在凍存液的配制以及人為操作方面還需進一步的研究。 4.對體外培養(yǎng)的北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞進行了免疫熒光及RT-PCR鑒定。結(jié)果表明,北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞對標(biāo)記物CD29、CD44、CD71、CD73以及Vimentin呈陽性表達,而對標(biāo)記物CD34呈陰性表達。符合肺臟間充質(zhì)干細胞的特性。 5.將北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞在適宜的誘導(dǎo)條件下向成骨細胞、脂肪細胞和心肌細胞三個方向進行了誘導(dǎo),通過免疫學(xué)和RT-PCR兩種方法鑒定所誘導(dǎo)的細胞為目的細胞,驗證了北京油雞肺臟間充質(zhì)干細胞的分化潛能。
[Abstract]:In this experiment, the characteristics of isolation, expansion and differentiation of lung mesenchymal stem cells of Beijing fowl were studied, and a suitable system for isolation, culture, identification and differentiation of Beijing chicken lung mesenchymal stem cells in vitro was established.To provide a technical platform for the further study of lung mesenchymal stem cells in Beijing fowl.In this experiment, pulmonary mesenchymal stem cells were isolated from the lung tissue of 9 ~ 14 days old Beijing oil chicken by digesting percoll with type 鈪，

本文編號：1717239