本文選題：表皮生長(zhǎng)因子　切入點(diǎn)：間質(zhì)干細(xì)胞　出處：《中國(guó)組織工程研究》2017年29期

【摘要】：背景:表皮生長(zhǎng)因子作為一種輔助生長(zhǎng)因子,但是對(duì)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)是否必須尚無(wú)定論。目的:建立大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離提取以及鑒定的方法,同時(shí)探索表皮生長(zhǎng)因子對(duì)其增殖能力以及遷移能力的影響,同時(shí)探索其潛在機(jī)制。方法:①采用全骨髓貼壁法,分離純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,培養(yǎng)至第3代,使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原CD29,CD45,CD90表達(dá)情況。通過(guò)成骨和成脂分化誘導(dǎo),更進(jìn)一步鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;②同時(shí)通過(guò)CCK-8法和克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)量表皮生長(zhǎng)因子對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的第3代細(xì)胞的增殖能力的影響。同時(shí)通過(guò)Transwell小室驗(yàn)證表皮生長(zhǎng)因子對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的第3代細(xì)胞遷移能力的影響。通過(guò)蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PI3K/Akt和核因子κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平,探索表皮生長(zhǎng)因子的作用機(jī)制。結(jié)果與結(jié)論:①原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈多角形和梭形,隨著培養(yǎng)時(shí)間增加,逐漸呈梭形為主。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)第3代細(xì)胞表面CD29,CD90表達(dá)呈陽(yáng)性,CD45表達(dá)成陰性。并且對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的第3代細(xì)胞成功進(jìn)行了成骨和成脂分化誘導(dǎo);②表皮生長(zhǎng)因子能夠促進(jìn)第3代細(xì)胞的增殖,且細(xì)胞中PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子p-Akt表達(dá)水平的增加,同時(shí)其下游信號(hào)分子Bax表達(dá)水平降低而B(niǎo)cl-2表達(dá)升高。表皮生長(zhǎng)因子能夠通過(guò)調(diào)節(jié)核因子κB信號(hào)通路分子p 65以及IκB的磷酸化水平,同時(shí)也增加了基質(zhì)金屬蛋白酶9的表達(dá)水平,從而促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移;③結(jié)果表明表皮生長(zhǎng)因子促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖和遷移。
[Abstract]:Background: epidermal growth factor (EGF) is an auxiliary growth factor, but it is not clear whether the growth of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) must be done.Aim: to establish a method for isolation, extraction and identification of rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs), and to explore the effects of EGF on its proliferation and migration, as well as its potential mechanism.Methods the bone marrow mesenchymal stem cells of rats were isolated and purified by whole bone marrow adherent method, and cultured to the third passage. The expression of CD29, CD45, CD90 was detected by flow cytometry.The effects of epidermal growth factor on the proliferation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were measured by CCK-8 assay and clone formation assay.The effects of epidermal growth factor (EGF) on the migration ability of the third generation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were also tested by Transwell chamber.To investigate the mechanism of epidermal growth factor (EGF), PI3K/Akt and NF- 魏 B signaling pathway related proteins were detected by Western blotting.Results and conclusion the primary bone marrow mesenchymal stem cells were polygonal and fusiform.Flow cytometry was used to detect the positive expression of CD29 + CD90 and negative expression of CD45 on the surface of the third passage cells.Furthermore, osteogenic and adipogenic differentiation induced by EGF 2 in the third passage of bone marrow mesenchymal stem cells could promote the proliferation of the third passage cells, and the expression of p-Akt, a key molecule of the PI3K/Akt signaling pathway, was increased in the cells.At the same time, its downstream signal molecule Bax expression level decreased, but the Bcl-2 expression increased.Epidermal growth factor can promote the migration of rat bone marrow mesenchymal stem cells by regulating the phosphorylation level of nuclear factor- 魏 B signaling pathway p65 and I 魏 B and increasing the expression of matrix metalloproteinase-9.The results showed that epidermal growth factor promoted the proliferation and migration of bone marrow mesenchymal stem cells.
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胸外科;遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院耳鼻喉科;
【基金】：貴州省科學(xué)技術(shù)基金(黔科合J字[2012]2360號(hào))~~
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：1706398