本文選題：雌二醇　切入點：樹突狀細(xì)胞　出處：《南京大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：樹突狀細(xì)胞是目前已知的機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞,它能有效地刺激T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的活化,同時也對維持機(jī)體的免疫耐受和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答起到關(guān)鍵性的作用。雌激素在自身免疫性疾病的性別偏好中發(fā)揮重要作用,樹突狀細(xì)胞也參與自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。已有研究報道,雌激素可調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞的成熟、功能和細(xì)胞因子的分泌水平,但其作用機(jī)制不清。因此,闡明雌激素調(diào)控樹突狀細(xì)胞的分子機(jī)制對于深入理解自身免疫性疾病的性別偏好至關(guān)重要。 基于我們前期研究發(fā)現(xiàn)MCM分子參與免疫細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)。本研究主要探討雌激素調(diào)控樹突狀細(xì)胞的具體信號機(jī)制,并結(jié)合臨床樣本考察MCM6分子在典型的自身免疫病-系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中的變化,試圖揭示自身免疫病性別傾向的機(jī)制。為此,首先我們通過RT-PCR、免疫印跡以及流式細(xì)胞技術(shù)等方法證明了雌二醇可以影響樹突狀細(xì)胞表面標(biāo)志CD40、CD80、CD86以及MHCⅡ的表達(dá)上調(diào),并且雌二醇對MCM家族分子中MCM6調(diào)節(jié)作用中最為明顯。緊接著,我們通過信號通路研究相關(guān)手段探討了雌二醇在這些調(diào)節(jié)作用中的具體信號通路,發(fā)現(xiàn)雌二醇通過p38以及JNK通路而影響CD40以及MCM6的表達(dá)水平。那么,CD40和MCM6之間是否存在一定聯(lián)系呢?為此,我們建立了MCM6的干擾系統(tǒng),并且發(fā)現(xiàn)干擾MCM6的表達(dá)之后,雌二醇引起的CD40的表達(dá)上調(diào)也被抑制了。那么,MCM6在雌二醇調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞的功能中,除了影響CD40的表達(dá)之外,還起到什么作用呢?我們在干擾了MCM6的表達(dá)之后,利用cck-8檢測了樹突狀細(xì)胞的活力,利用PI Annexin V檢測了細(xì)胞的凋亡水平,利用FITC-dextran檢測了細(xì)胞的吞噬能力,利用3H摻入法檢測了細(xì)胞的增殖能力,利用MLR檢測了樹突狀細(xì)胞活化T細(xì)胞的能力,利用ELSIA檢測了細(xì)胞因子的分泌水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)MCM的低表達(dá)只影響樹突狀細(xì)胞對T細(xì)胞的活化能力。然后,我們又收集了一系列臨床樣本,通過Q-PCR驗證了在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個核細(xì)胞以及樹突狀細(xì)胞中MCM6的表達(dá)水平要明顯高于正常人,且MCM6的表達(dá)水平與雌二醇水平呈正相關(guān)。最后,我們通過化學(xué)基因策略構(gòu)建了MCM6上游激酶JNK的突變型質(zhì)粒,并通過免疫印跡、激酶實驗等方法驗證了其功能,證明該質(zhì)粒在正常情況下具有野生型JNK的活性,但是在ATP類似物存在下可以特異性地抑制其活性,并且起效時間短,作用時間長,因此,該質(zhì)粒可以作為進(jìn)一步深化研究MCM6在免疫細(xì)胞細(xì)胞周期中功能的有力工具。 綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)：①雌激素通過激活p38和JNK信號通路而上調(diào)樹突狀細(xì)胞表面共刺激分子CD40的表達(dá),從而增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞的免疫功能,而這一過程是依賴于MCM6分子的表達(dá)的。②通過臨床樣本的分析,證明了在SLE患者中外周血單個核細(xì)胞以及樹突狀細(xì)胞中,MCM6的表達(dá)水平均高于正常人,并且SLE患者M(jìn)CM6表達(dá)水平與其血清中雌激素水平呈正相關(guān)。③通過化學(xué)基因策略構(gòu)建了MCM6上游激酶JNK的突變型質(zhì)粒,這種質(zhì)粒具有完全可控性。 本研究首次發(fā)現(xiàn)了MCM6在雌激素調(diào)控樹突狀細(xì)胞中的功能并探討了其具體機(jī)制,并且結(jié)合臨床揭示了MCM6在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的重要作用,為解釋自身免疫病的性別傾向提供了重要的理論依據(jù)。已構(gòu)建的MCM6上游激酶JNK突變型質(zhì)�？赏鳛橐环N良好工具用于深化研究MCM6在免疫細(xì)胞細(xì)胞周期中的特殊作用。
[Abstract]:Dendritic cells play an important role in the development of immune tolerance and immune response , but the mechanism of estrogen plays an important role in the development of autoimmune diseases . Therefore , it is important to clarify the molecular mechanism of estrogen - regulated dendritic cells in the deep understanding of the gender preference of autoimmune diseases .


In this paper , we have studied the specific signaling pathways of MCM6 in patients with systemic lupus erythematosus by using the method of RT - PCR , Western blot and flow cytometry .


In conclusion , the expression level of MCM6 in peripheral blood mononuclear cells and dendritic cells in SLE patients was higher than that in normal controls , and the expression level of MCM6 in SLE patients was higher than that in normal controls .


In this study , the function of MCM6 in the regulation of estrogen - regulated dendritic cells was first discovered and its specific mechanism was discussed , and the important role of MCM6 in systemic lupus erythematosus was revealed , which provided an important theoretical basis for explaining the sex tendency of autoimmune diseases . The constructed MCM6 upstream kinase and mutant plasmid could be used as a good tool to study the special role of MCM6 in the cell cycle of immune cells .

【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1702010