發(fā)布時間：2018-04-02 09:57

  本文選題：獼猴　切入點：內(nèi)阿米巴　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的在圈養(yǎng)和野生的非人靈長類動物的糞便中經(jīng)�？梢詸z測到多種內(nèi)阿米巴原蟲。這些內(nèi)阿米巴原蟲大都屬于非致病性的,但是也有具有致病力的溶組織內(nèi)阿米巴或者可能有潛在致病力的諾氏內(nèi)阿米巴。非人靈長類動物感染溶組織內(nèi)阿米巴或者諾氏內(nèi)阿米巴后,不僅其健康受到影響,更重要的是這些感染的非人靈長類動物有可能成為潛在的阿米巴病的傳染源,影響人類的健康。因此,有必要對非人靈長類動物進行內(nèi)阿米巴原蟲感染的流行病學(xué)調(diào)查,同時對其感染的進行溶組織內(nèi)阿米巴、諾氏內(nèi)阿米巴與其他非致病性的內(nèi)阿米巴的鑒別診斷。一般病原學(xué)檢查主要是通過顯微鏡鏡檢檢測糞便中的阿米巴原蟲的包囊或者滋養(yǎng)體。然而,對于溶組織內(nèi)阿米巴、諾氏內(nèi)阿米巴與其他內(nèi)阿米巴種屬難以通過形態(tài)進行鑒別。近年來高敏感性和特異性的分子生物學(xué)診斷方法(如PCR、分子雜交等方法)被廣泛應(yīng)用于內(nèi)阿米巴原蟲的診斷和鑒別診斷。本研究采用PCR方法對中國西南地區(qū)獼猴內(nèi)阿米巴的感染情況進行調(diào)查,從而了解非人靈長類動物體內(nèi)阿米巴與人類阿米巴感染之間的關(guān)系。 方法共收集955份糞便樣品,其中152份和88份分別來自于桂林和南寧的兩個食蟹猴養(yǎng)殖場；120份和595份分別來自于廣西和貴州的野生恒河猴群。糞便經(jīng)包囊富集后鏡檢。提取糞便中的基因組DNA后,分別以特異性引物擴增溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴、諾氏內(nèi)阿米巴、夏氏內(nèi)阿米巴和結(jié)腸內(nèi)阿米巴的18S核糖體核苷酸RNA基因。2%的瓊脂糖凝膠鑒定PCR擴增產(chǎn)物的大小。Qiagen膠回收試劑盒割膠回收PCR產(chǎn)物,連入pMD-19T測序載體并測序。測序結(jié)果用ClustalX Ver1.83分析。 結(jié)果PCR結(jié)果顯示,916份樣本中至少對一種內(nèi)阿米巴顯示陽性,39份樣本PCR擴增為陰性。在廣西、貴州、桂林和南寧的樣品中,夏氏內(nèi)阿米巴的陽性率分別是100%、98.0%、93.4%和61.3%,結(jié)腸內(nèi)阿米巴的陽性率分別是70.3%、81.2%、94.1%和73.9%。在桂林、南寧和廣西的糞便樣品里,迪斯帕內(nèi)阿米巴的陽性率分別是82.9%、51.1%和13.3%,而貴州野生恒河猴體內(nèi)未檢出迪斯帕內(nèi)阿米巴。廣西和貴州野生恒河猴體內(nèi)的諾氏內(nèi)阿米巴檢出率較高,陽性率分別為62.5%和61.3%,桂林和南寧的圈養(yǎng)食蟹猴的糞便樣品未檢出諾氏內(nèi)阿米巴。所有的糞便樣品均為溶組織內(nèi)阿米巴陰性。測序結(jié)果顯示,所有標本的諾氏內(nèi)阿米巴18SrRNA基因的擴增產(chǎn)物序列沒有差異,與已報道的諾氏內(nèi)阿米巴NASA6株的18SrRNA基因序列的重疊部分(452個核苷酸)僅有一個核苷酸位點的差別,同源性為99.8%。夏氏內(nèi)阿米巴18S rRNA基因的特異性擴增產(chǎn)物序列與AF149912一致。迪斯帕內(nèi)阿米巴的測序結(jié)果顯示與AB282661一致。結(jié)腸內(nèi)阿米巴18SrRNA基因特異性擴增產(chǎn)物測序結(jié)果顯示該原蟲有3種不同的基因序列,其中兩類分別與結(jié)腸內(nèi)阿米巴亞型1和亞型2一致,而另一個序列與目前報道的序列有比較顯著的差異。 結(jié)論本研究以種特異性引物進行PCR擴增方法對中國西南地區(qū)的圈養(yǎng)食蟹猴和野生恒河猴進行大樣本的內(nèi)阿米巴流行病學(xué)調(diào)查。研究顯示中國西南地區(qū)野生恒河猴感染有諾氏內(nèi)阿米巴,未感染致病性溶組織內(nèi)阿米巴。諾氏內(nèi)阿米巴、夏氏內(nèi)阿米巴、結(jié)腸內(nèi)阿米巴和迪斯帕內(nèi)阿米巴的高感染率,提示了內(nèi)阿米巴在每個地區(qū)獼猴個體間的廣泛傳播。另外,我們發(fā)現(xiàn)了一種僅在我國存在的結(jié)腸內(nèi)阿米巴分離株基因型,而國外未見報道�？傊�,由于這些圈養(yǎng)的食蟹猴和野生恒河猴與人類接觸頻繁,鑒于其感染的內(nèi)阿米巴的人獸共患潛力,因而對其內(nèi)阿米巴感染情況進行調(diào)查和監(jiān)控具有及其重要的社會意義。
[Abstract]:Objective To investigate the relationship between amoebic and human amebic infection in non - human primates by means of PCR , which is widely used in the diagnosis and differential diagnosis of amoebas in human primates .

Methods A total of 955 stool samples were collected , of which 152 and 88 were from two cynomolgus monkey farms in Guilin and Nanning , respectively ;
Two hundred and five hundred and five hundred and nine wild rhesus monkeys from Guangxi and Guizhou , respectively , were collected from Guangxi and Guizhou province .

Results The results showed that there was no difference in the positive rates of amoebas in the samples of wild rhesus monkeys in Guangxi , Guizhou , Guilin and Nanning . The positive rates were 82.9 % , 81.2 % , 94.1 % and 73.9 % respectively .

Conclusion This study shows that the high infection rates of amoebic , amoebic , amoebic , amoebic , amoebas and amoeba in the wild rhesus monkeys in Southwest China have been investigated by PCR amplification method . The results suggest that the high infection rates of amoebic , amoebic , amoebic and diesparin in the wild rhesus monkeys in southwest China have been widely disseminated . In conclusion , we have found a kind of the human animal co - infection with the amoebas in the colon only in China . In conclusion , the investigation and monitoring of the infection of amoeba in China have the important social significance .

【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R382.1

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 黃道超;楊光友;王強;牛李麗;;人和動物阿米巴原蟲病研究進展[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2006年05期

2 葉s，

本文編號：1699862