本文選題：獼猴　切入點(diǎn)：內(nèi)阿米巴　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的在圈養(yǎng)和野生的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的糞便中經(jīng)常可以檢測(cè)到多種內(nèi)阿米巴原蟲。這些內(nèi)阿米巴原蟲大都屬于非致病性的,但是也有具有致病力的溶組織內(nèi)阿米巴或者可能有潛在致病力的諾氏內(nèi)阿米巴。非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物感染溶組織內(nèi)阿米巴或者諾氏內(nèi)阿米巴后,不僅其健康受到影響,更重要的是這些感染的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物有可能成為潛在的阿米巴病的傳染源,影響人類的健康。因此,有必要對(duì)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物進(jìn)行內(nèi)阿米巴原蟲感染的流行病學(xué)調(diào)查,同時(shí)對(duì)其感染的進(jìn)行溶組織內(nèi)阿米巴、諾氏內(nèi)阿米巴與其他非致病性的內(nèi)阿米巴的鑒別診斷。一般病原學(xué)檢查主要是通過顯微鏡鏡檢檢測(cè)糞便中的阿米巴原蟲的包囊或者滋養(yǎng)體。然而,對(duì)于溶組織內(nèi)阿米巴、諾氏內(nèi)阿米巴與其他內(nèi)阿米巴種屬難以通過形態(tài)進(jìn)行鑒別。近年來高敏感性和特異性的分子生物學(xué)診斷方法(如PCR、分子雜交等方法)被廣泛應(yīng)用于內(nèi)阿米巴原蟲的診斷和鑒別診斷。本研究采用PCR方法對(duì)中國(guó)西南地區(qū)獼猴內(nèi)阿米巴的感染情況進(jìn)行調(diào)查,從而了解非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物體內(nèi)阿米巴與人類阿米巴感染之間的關(guān)系。 方法共收集955份糞便樣品,其中152份和88份分別來自于桂林和南寧的兩個(gè)食蟹猴養(yǎng)殖場(chǎng)；120份和595份分別來自于廣西和貴州的野生恒河猴群。糞便經(jīng)包囊富集后鏡檢。提取糞便中的基因組DNA后,分別以特異性引物擴(kuò)增溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴、諾氏內(nèi)阿米巴、夏氏內(nèi)阿米巴和結(jié)腸內(nèi)阿米巴的18S核糖體核苷酸RNA基因。2%的瓊脂糖凝膠鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。Qiagen膠回收試劑盒割膠回收PCR產(chǎn)物,連入pMD-19T測(cè)序載體并測(cè)序。測(cè)序結(jié)果用ClustalX Ver1.83分析。 結(jié)果PCR結(jié)果顯示,916份樣本中至少對(duì)一種內(nèi)阿米巴顯示陽性,39份樣本PCR擴(kuò)增為陰性。在廣西、貴州、桂林和南寧的樣品中,夏氏內(nèi)阿米巴的陽性率分別是100%、98.0%、93.4%和61.3%,結(jié)腸內(nèi)阿米巴的陽性率分別是70.3%、81.2%、94.1%和73.9%。在桂林、南寧和廣西的糞便樣品里,迪斯帕內(nèi)阿米巴的陽性率分別是82.9%、51.1%和13.3%,而貴州野生恒河猴體內(nèi)未檢出迪斯帕內(nèi)阿米巴。廣西和貴州野生恒河猴體內(nèi)的諾氏內(nèi)阿米巴檢出率較高,陽性率分別為62.5%和61.3%,桂林和南寧的圈養(yǎng)食蟹猴的糞便樣品未檢出諾氏內(nèi)阿米巴。所有的糞便樣品均為溶組織內(nèi)阿米巴陰性。測(cè)序結(jié)果顯示,所有標(biāo)本的諾氏內(nèi)阿米巴18SrRNA基因的擴(kuò)增產(chǎn)物序列沒有差異,與已報(bào)道的諾氏內(nèi)阿米巴NASA6株的18SrRNA基因序列的重疊部分(452個(gè)核苷酸)僅有一個(gè)核苷酸位點(diǎn)的差別,同源性為99.8%。夏氏內(nèi)阿米巴18S rRNA基因的特異性擴(kuò)增產(chǎn)物序列與AF149912一致。迪斯帕內(nèi)阿米巴的測(cè)序結(jié)果顯示與AB282661一致。結(jié)腸內(nèi)阿米巴18SrRNA基因特異性擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果顯示該原蟲有3種不同的基因序列,其中兩類分別與結(jié)腸內(nèi)阿米巴亞型1和亞型2一致,而另一個(gè)序列與目前報(bào)道的序列有比較顯著的差異。 結(jié)論本研究以種特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增方法對(duì)中國(guó)西南地區(qū)的圈養(yǎng)食蟹猴和野生恒河猴進(jìn)行大樣本的內(nèi)阿米巴流行病學(xué)調(diào)查。研究顯示中國(guó)西南地區(qū)野生恒河猴感染有諾氏內(nèi)阿米巴,未感染致病性溶組織內(nèi)阿米巴。諾氏內(nèi)阿米巴、夏氏內(nèi)阿米巴、結(jié)腸內(nèi)阿米巴和迪斯帕內(nèi)阿米巴的高感染率,提示了內(nèi)阿米巴在每個(gè)地區(qū)獼猴個(gè)體間的廣泛傳播。另外,我們發(fā)現(xiàn)了一種僅在我國(guó)存在的結(jié)腸內(nèi)阿米巴分離株基因型,而國(guó)外未見報(bào)道�？傊�,由于這些圈養(yǎng)的食蟹猴和野生恒河猴與人類接觸頻繁,鑒于其感染的內(nèi)阿米巴的人獸共患潛力,因而對(duì)其內(nèi)阿米巴感染情況進(jìn)行調(diào)查和監(jiān)控具有及其重要的社會(huì)意義。
[Abstract]:Objective To investigate the relationship between amoebic and human amebic infection in non - human primates by means of PCR , which is widely used in the diagnosis and differential diagnosis of amoebas in human primates .

Methods A total of 955 stool samples were collected , of which 152 and 88 were from two cynomolgus monkey farms in Guilin and Nanning , respectively ;
Two hundred and five hundred and five hundred and nine wild rhesus monkeys from Guangxi and Guizhou , respectively , were collected from Guangxi and Guizhou province .

Results The results showed that there was no difference in the positive rates of amoebas in the samples of wild rhesus monkeys in Guangxi , Guizhou , Guilin and Nanning . The positive rates were 82.9 % , 81.2 % , 94.1 % and 73.9 % respectively .

Conclusion This study shows that the high infection rates of amoebic , amoebic , amoebic , amoebic , amoebas and amoeba in the wild rhesus monkeys in Southwest China have been investigated by PCR amplification method . The results suggest that the high infection rates of amoebic , amoebic , amoebic and diesparin in the wild rhesus monkeys in southwest China have been widely disseminated . In conclusion , we have found a kind of the human animal co - infection with the amoebas in the colon only in China . In conclusion , the investigation and monitoring of the infection of amoeba in China have the important social significance .

【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R382.1

【共引文獻(xiàn)】

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1 黃道超;楊光友;王強(qiáng);牛李麗;;人和動(dòng)物阿米巴原蟲病研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年05期

2 葉s，

本文編號(hào)：1699862