本文選題：樹(shù)突膜片鉗記錄　切入點(diǎn)：樹(shù)突特性　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：膜片鉗技術(shù)是上個(gè)世紀(jì)90年代初興起的一種記錄細(xì)胞膜離子通道電生理特性的技術(shù),它為了解生物膜離子通道的門控動(dòng)力學(xué)特征以及通透性等提供了最直接的手段。在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域,膜片鉗技術(shù)多用于探索神經(jīng)元上離子通道的分布特點(diǎn)和功能特性。大多數(shù)的膜片鉗記錄是在胞體上進(jìn)行的。神經(jīng)元的另一重要結(jié)構(gòu)——樹(shù)突,因其直徑較小,一直以來(lái)限制樹(shù)突膜片鉗技術(shù)的操作。然而,樹(shù)突接受大多數(shù)投射到神經(jīng)元的突觸傳入,其上分布著大量不同類型的離子通道,是突觸整合、突觸可塑性調(diào)節(jié)的重要位點(diǎn),具有重要的生理功能。因此在樹(shù)突上進(jìn)行直接的膜片鉗記錄,將為進(jìn)一步了解樹(shù)突的興奮性特點(diǎn)提供新的機(jī)會(huì)。 我們?cè)诔晒M(jìn)行胞體膜片鉗記錄的基礎(chǔ)上對(duì)樹(shù)突膜片鉗記錄進(jìn)行了摸索。我們的實(shí)驗(yàn)以海馬腦片為標(biāo)本,在微分干涉相襯(Differential interference contrast, DIC)顯微鏡下觀察到健康的CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的樹(shù)突后操作的。雖然樹(shù)突記錄的基本操作技術(shù)類似于胞體記錄,但與后者相比,樹(shù)突記錄需要更高的精確度。經(jīng)過(guò)多次嘗試,我們發(fā)現(xiàn),要提高樹(shù)突記錄的成功率,需要注意的主要有以下幾個(gè)方面：使用最優(yōu)化的膜片鉗設(shè)備；提高腦片質(zhì)量,以看到更多適合封接的健康樹(shù)突；電極尖端直徑的大小要合適,過(guò)大過(guò)小都會(huì)影響樹(shù)突的封接；電極接觸樹(shù)突的方式要正確,不可過(guò)度；破膜時(shí)所用負(fù)壓要適度,也可采用電擊破或強(qiáng)超極化的方式破膜。 我們?cè)贑A1區(qū)錐體神經(jīng)元的胞體和頂樹(shù)突同時(shí)記錄,研究樹(shù)突的被動(dòng)特性和主動(dòng)特性。實(shí)驗(yàn)中,我們分別在頂樹(shù)突的不同位點(diǎn),給予相同大小的興奮性突觸后電流(Excitatory postsynaptic current, EPSC)樣注電流,在胞體和頂樹(shù)突同時(shí)記錄。結(jié)果發(fā)現(xiàn),樹(shù)突注電流位點(diǎn)距離胞體越遠(yuǎn),產(chǎn)生的樹(shù)突局部興奮性突觸后電位(Excitatory postsynaptic potential, EPSP)幅度越大,而同時(shí)在胞體記錄的EPSP(?)的幅度則更小,Half-width與Rise time則更長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明由于樹(shù)突本身的特性,同樣大小的注電流在樹(shù)突較遠(yuǎn)端產(chǎn)生的EPSPi幅度比在較近端產(chǎn)生的大,而且EPSP在向胞體傳遞的過(guò)程中幅度逐漸衰減,持續(xù)時(shí)間逐漸延長(zhǎng)。我們換用玻璃電極刺激海馬CA1區(qū)的輻射層(Stratum radiatum, SR),分別在不同的樹(shù)突位點(diǎn)和胞體同時(shí)記錄,得到一致的結(jié)果。因此我們得出結(jié)論：EPSP的傳遞效率依賴突觸傳入的位點(diǎn)。 為觀察EPSP由胞體向樹(shù)突方向的傳遞情況,我們?cè)诎w給予一定大小的EPSC-樣注電流,分別在樹(shù)突不同位點(diǎn)和胞體同時(shí)記錄。結(jié)果發(fā)現(xiàn),EPSP在向樹(shù)突傳遞的過(guò)程中,幅度逐漸衰減,Half-width與Rise time逐漸增加。 基底樹(shù)突直徑非常小,一方面要求封接基底樹(shù)突所用的電極尖端直徑更精細(xì),同時(shí)也需要更精確的封接方法,因此大大增加了封接的難度。我們?cè)诙啻问〗?jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上終于在基底樹(shù)突記錄到電流。 在獲得高質(zhì)量樹(shù)突記錄的基礎(chǔ)上,我們打算對(duì)不同樹(shù)突來(lái)源的兩個(gè)EPSP的整合機(jī)制進(jìn)行探討。我們用玻璃電極與金屬電極同時(shí)刺激海馬CA1區(qū)的SR和始層(Stratum oriens, SO),-10ms的時(shí)間窗(SO刺激在SR刺激之前10ms)以10Hz的頻率,將頂樹(shù)突EPSP與基底樹(shù)突EPSP配對(duì)誘導(dǎo)60次,結(jié)果發(fā)現(xiàn)EPSP的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(Long-term potentiation, LTP)現(xiàn)象。同樣的protocol下,+10ms時(shí)獲得EPSP的長(zhǎng)時(shí)程抑制現(xiàn)象(Long-term depression, LTD)。我們計(jì)劃借助頂樹(shù)突與胞體、胞體與基底樹(shù)突同時(shí)記錄的方法探索頂樹(shù)突EPSP與基底樹(shù)突EPSP整合的機(jī)制。
[Abstract]:The technique of patch clamp technique is a technique of recording the electrophysiological properties of ionic channel in the cell membrane . It provides the most direct means for understanding the characteristics of the channel and the permeability of the membrane . In the field of neurosciences , the membrane patch clamp technique is used to explore the distribution characteristics and functional characteristics of ion channels in neurons .

We have carried on the study of dendritic patch clamp recordings on the basis of successful cell patch clamp recording . Our experiments show that dendritic cells of healthy CA1 pyramidal neurons are operated under differential interference contrast ( DIC ) microscope . Although the basic operating techniques of dendritic records are similar to those of the latter , the dendritic records require higher accuracy . After many attempts , we have found that to improve the success rate of dendritic records , it is important to pay attention to the following aspects : the use of optimized patch clamp equipment ;
improve the quality of the brain slices so as to see more healthy dendrites suitable for sealing ;
The diameter of the tip of the electrode is suitable , too much too small to affect the sealing of the dendritic ;
the method of electrode contact dendritic is correct and not excessive ;
the negative pressure used in the membrane breaking is moderate , and the membrane can be broken by adopting a mode of electric shock or strong hyperpolarization .

At the same time , we found that the greater the EPSPi amplitude at the distal end of the dendritic cells , the greater the amplitude of the EPSP at the distal end of the dendritic cells , and longer in the EPSP ( ? ) in the cell body . The results show that the transmission efficiency of EPSP depends on the afferent locus of the synaptic transmission .

In order to observe the transmission of EPSP from the cytoplasm to the dendritic direction , we recorded EPSC - like injection currents with a certain size in the cytoplasm at the same time . The results showed that the amplitude of EPSP gradually decreased , half - width and rise time increased gradually in the process of transferring dendritic cells to dendritic cells .

The diameter of the base dendritic is very small , on the one hand , it is required that the diameter of the electrode tip used for sealing the base dendritic is finer , and more accurate sealing method is needed , thus greatly increasing the difficulty of sealing .

On the basis of obtaining high - quality dendritic records , we intend to explore the integration mechanism of two EPSPs from different dendritic sources . We use the glass electrode and the metal electrode to stimulate the SR and the initial layer ( SO ) in the CA1 region of the hippocampus at the same time . The time window of 10 Hz ( 10 ms before SR stimulation ) is used to pair the top dendritic EPSP and the base dendritic EPSP to induce 60 times . The results show that the long - term depression ( LTP ) phenomenon of EPSP is obtained . Under the same protocol , the long - term depression ( LTD ) of EPSP is obtained at + 10 ms . We plan to explore the mechanism of the integration of the top dendritic EPSP with the base dendritic EPSP by means of simultaneous recording of the top dendritic cell and the cell body , the cell body and the base dendritic cell .

【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R338

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 姚志彬;運(yùn)動(dòng)促進(jìn)衰老腦神經(jīng)元樹(shù)突和突觸可塑性的研究[J];中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1998年04期

2 支曄,吳建中,周重人;雄性大鼠球海綿體肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體及樹(shù)突的分布[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;1999年04期

3 李麗麗;單路娟;張媛;高船舟;劉越堅(jiān);宋智琦;;谷氨酸信號(hào)通路對(duì)黑素細(xì)胞樹(shù)突形態(tài)的調(diào)節(jié)作用[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年06期

4 鄭則慧,吳建屏,毛金標(biāo);脊髓單個(gè)神經(jīng)元的辣根過(guò)氧化物酶細(xì)胞內(nèi)染色[J];生理學(xué)報(bào);1979年02期

5 ;神經(jīng)元樹(shù)突疫苗[J];藥學(xué)進(jìn)展;2002年06期

6 張?jiān)鹿?詹乃茹;成熟與非成熟樹(shù)突細(xì)胞生物學(xué)特征[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;2002年03期

7 竇寰宇,高培福,蔣吉英,王聚信;TNF對(duì)海馬神經(jīng)元發(fā)育的影響[J];濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年04期

8 劉寶瑞,吳敏慧,劉文超;樹(shù)突細(xì)胞瘤苗的研究現(xiàn)狀及前景[J];陜西腫瘤醫(yī)學(xué);2000年01期

9 陸澄秋;鐘樂(lè);顏崇淮;田英;沈曉明;;斷乳前豐富環(huán)境對(duì)大鼠空間參考記憶及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的影響[J];中國(guó)兒童保健雜志;2008年04期

10 陳國(guó)斌;董克家;董戰(zhàn)玲;樊守艷;符史干;沈行良;;復(fù)雜神經(jīng)元的間室模型[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊光;龔鍇;蔣伍玲;公衍道;張秀芳;趙南明;;海馬錐形細(xì)胞樹(shù)突發(fā)育的三維電鏡研究[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

2 朱東寧;簡(jiǎn)強(qiáng);薛柯;李承新;;UVB照射對(duì)黑素細(xì)胞樹(shù)突形態(tài)調(diào)控因子Rac和Rho表達(dá)的影響[A];2011全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 李炎烽;劉深泉;;單個(gè)錐體神經(jīng)元樹(shù)突軸突的房室模型分析[A];第十二屆全國(guó)非線性振動(dòng)暨第九屆全國(guó)非線性動(dòng)力學(xué)和運(yùn)動(dòng)穩(wěn)定性學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

4 傅展燕;羅建紅;魏爾清;;NMDA受體在培養(yǎng)海馬神經(jīng)元樹(shù)突樹(shù)上的表面表達(dá)及定位[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)神經(jīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省藥理學(xué)會(huì)2002年年會(huì)論文摘要集[C];2002年

5 劉深泉;王期千;;神經(jīng)元樹(shù)突3維電纜模型的建立和計(jì)算[A];中國(guó)力學(xué)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)大會(huì)'2009論文摘要集[C];2009年

6 陳國(guó)斌;沈行良;;神經(jīng)元的間室模型假設(shè)[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程進(jìn)展——2007中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程聯(lián)合學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2007年

7 劉婷;田心;;海馬區(qū)神經(jīng)元放電的樹(shù)突一胞體二房室的研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)2004年年會(huì)論文集[C];2005年

8 宋智琦;;谷氨酸受體通路對(duì)惡黑細(xì)胞樹(shù)突形態(tài)及其細(xì)胞骨架蛋白的作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

9 李百勝;吳翠萍;安榆林;吳新華;廖太林;;國(guó)外櫟樹(shù)突死病菌的檢疫措施及我國(guó)應(yīng)對(duì)策略[A];外來(lái)有害生物檢疫及防除技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2005年

10 朱鏞連;;腦卒中的恢復(fù)與康復(fù)理論進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 黃蘇榕;中科院神經(jīng)科學(xué)研究所 樹(shù)突生長(zhǎng)研究獲新發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

2 無(wú)雨 編譯;“過(guò)目不忘”小處練功[N];大眾科技報(bào);2002年

3 記者姜巖;過(guò)目不忘有“絕招”[N];人民日?qǐng)?bào);2002年

4 錢錚;科學(xué)家初步探明腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)為何“短路”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

5 姜巖;過(guò)目不忘有“絕招”[N];安徽日?qǐng)?bào);2003年

6 北師大發(fā)展心理研究所 池麗萍;腦“饑餓”與健康[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

7 本報(bào)記者 年月;早期教育從零歲開(kāi)始[N];廈門日?qǐng)?bào);2005年

8 明秀;自認(rèn)老就會(huì)老而呆[N];中國(guó)石油報(bào);2000年

9 沈英甲;成人腦細(xì)胞仍會(huì)生長(zhǎng)[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

10 譚國(guó)珍;戰(zhàn)勝遺忘[N];保健時(shí)報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 徐曉輝;原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)MKLP1樹(shù)突靶向機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 刁凌;小鼠視網(wǎng)膜的發(fā)育：神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)多樣性的出現(xiàn)[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2004年

3 徐寧龍;神經(jīng)元電活動(dòng)誘發(fā)的樹(shù)突整合功能的可塑性及其時(shí)空特異性[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2006年

4 石葛明;趾長(zhǎng)伸肌和比目魚(yú)肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群遞/調(diào)質(zhì)的不同配布式樣及其樹(shù)突的發(fā)育可塑性研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1996年

5 秦要武;糖尿病大鼠早期不同類型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損害的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

6 周劍芳;人急性髓系白血病HL-60來(lái)源的樹(shù)突樣細(xì)胞誘導(dǎo)的CTL體內(nèi)外作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2001年

7 殷勤偉;對(duì)雞胚脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生長(zhǎng)與分化的規(guī)律和調(diào)控的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1988年

8 張汝芝;黑素瘤細(xì)胞凋亡、外毛根鞘無(wú)色素性黑素細(xì)胞分離培養(yǎng)以及黑素細(xì)胞樹(shù)突體系的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2004年

9 董慧;抗原靶向不同樹(shù)突細(xì)胞亞群誘導(dǎo)抗結(jié)核分枝桿菌免疫應(yīng)答的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2010年

10 王殿仕;大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元突觸后電流和樹(shù)突分支的生后發(fā)育[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張楠;樹(shù)突膜片鉗記錄方法的建立與應(yīng)用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

2 董燕;阿托伐他汀對(duì)體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元樹(shù)突發(fā)育的影響及其作用機(jī)制[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

3 葉銀萍;雙酚A對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元樹(shù)突發(fā)育的影響及其分子機(jī)制[D];浙江師范大學(xué);2010年

4 陳蕾;雙酚A慢性暴露對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元樹(shù)突結(jié)構(gòu)的影響及其分子機(jī)制[D];浙江師范大學(xué);2011年

5 蔡蕾;不同樹(shù)突來(lái)源的興奮性輸入在胞體的整合及其機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

6 柳浦青;選擇性激活星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元樹(shù)突絲運(yùn)動(dòng)的影響[D];浙江大學(xué);2011年

7 王蕾;雞胚視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞發(fā)育的形態(tài)學(xué)研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

8 桂韋;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-1及其作用后的星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)神經(jīng)元樹(shù)突生長(zhǎng)以及突觸素1表達(dá)的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

9 金海燕;慢性應(yīng)激對(duì)大鼠海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞樹(shù)突骨架的效應(yīng)[D];汕頭大學(xué);2003年

10 石少華;樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)重組HA-DC乳酸菌對(duì)H9N2型禽流感保護(hù)作用研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1690859