本文選題：P19EC細(xì)胞　切入點(diǎn)：穩(wěn)定細(xì)胞株　出處：《湖南大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：干細(xì)胞是一類具有自我更新能力和多向分化增殖潛能的原始細(xì)胞。叉頭匡蛋白家族是細(xì)胞內(nèi)一類非常重要的轉(zhuǎn)錄因子,參與了細(xì)胞的新陳代謝,發(fā)育,分化,增殖,凋亡等幾乎所有的生理過程。本文以P19EC細(xì)胞作為研究體系,重點(diǎn)研究了Fox家族的兩個(gè)重要成員FoxA1和FoxM1。 為了研究FoxA1對(duì)干細(xì)胞多能性及分化潛能的影響,我們構(gòu)建了能在P19細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)GFP-rFoxA1融合蛋白的細(xì)胞株。通過分析發(fā)現(xiàn),P19 GFPFoxA1細(xì)胞株能正常表達(dá)多能性關(guān)鍵基因如Oct4, Nanog和Sox2,但是它也能表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志基因Nestin和神經(jīng)特異性基因TubulinβIII。同時(shí),我們檢測(cè)到細(xì)胞株的堿性磷酸酶的活性明顯下降,而階段特異性胚胎抗原SSEA-3和神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)膜蛋白Prominin-1出現(xiàn)了高表達(dá)。這些暗示了細(xì)胞株呈現(xiàn)部分神經(jīng)干細(xì)胞的特征。在RA誘導(dǎo)P19細(xì)胞分化的過程中,P19 GFPFoxA1細(xì)胞株在分化的早期就能看到多能性基因Nanog的迅速下調(diào),而TubulinβIII在分化的早期增加的更快些,暗示FoxA1的高表達(dá)可能可以促使細(xì)胞更早地啟動(dòng)分化。所以我們認(rèn)為在P19細(xì)胞中高表達(dá)FoxA1,可能會(huì)使P19細(xì)胞變成類似于神經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞。 本文還通過構(gòu)建P19 GFPFoxM1穩(wěn)定細(xì)胞株來探究FoxM1與細(xì)胞多能性維持的關(guān)系。通過分析發(fā)現(xiàn),在RA誘導(dǎo)的分化的過程中,FoxM1的穩(wěn)定高表達(dá)使細(xì)胞不易形成胚胎小體,多能性關(guān)鍵基因如Oct4、Sox2也能更持久的維持表達(dá),說明FoxM1可能對(duì)維持干細(xì)胞的多能性起重要作用。
[Abstract]:Stem cells are a kind of primitive cells with the ability of self-renewal and multidirectional differentiation and proliferation. The family of fork head proteins is a very important transcriptional factor in cells involved in cell metabolism, development, differentiation and proliferation. In this paper, P19EC cells were used as the research system to study two important members of the Fox family, FoxA1 and FoxM1. In order to study the effect of FoxA1 on pluripotency and differentiation potential of stem cells, We have constructed a cell line that can stably express GFP-rFoxA1 fusion protein in P19 cell line. We found that P19 GFPFoxA1 cell line can normally express multipotent key genes such as Oct4, Nanog and Sox2, but it can also express neural stem cell marker gene Nestin. And neuro-specific gene Tubulin 尾 III. at the same time, We detected a significant decrease in alkaline phosphatase activity in cell lines. However, the high expression of stage specific embryonic antigen (SSEA-3) and neural stem cell associated membrane protein (Prominin-1) suggested that the cell line showed the characteristics of some neural stem cells. During the differentiation of P19 cells induced by RA, the P19 GFPFoxA1 cell line was expressed in the P19 cell line. The rapid down-regulation of the pluripotent gene Nanog can be seen early in differentiation. However, Tubulin 尾 III increased more rapidly at the early stage of differentiation, suggesting that the high expression of FoxA1 might induce cells to start differentiation earlier, so we think that overexpression of FoxA1 in P19 cells may make P19 cells become neural stem cell like cells. The relationship between FoxM1 and the maintenance of cellular pluripotency was explored by constructing P19 GFPFoxM1 stable cell line. It was found that the stable and high expression of FoxM1 made it difficult for cells to form embryosomes during the differentiation induced by RA. Multipotent key genes such as Oct4nSox2 can also be maintained more persistently, suggesting that FoxM1 may play an important role in maintaining pluripotency of stem cells.
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

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