本文選題：乙型流感病毒　切入點：血凝素(HA)蛋白　出處：《病毒學(xué)報》2017年04期

【摘要】：獲得穩(wěn)定表達(dá)乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA細(xì)胞株。采用RT-PCR方法擴(kuò)增乙型流感病毒的HA基因,將其克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)上,構(gòu)建pcDNA3.1(+)-HA重組質(zhì)粒。將已鑒定正確的pcDNA3.1(+)-HA質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro通過脂質(zhì)體介導(dǎo)法共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選后得到重組細(xì)胞株HEK293-HA,通過流式細(xì)胞術(shù)法(FCM)來檢測細(xì)胞中HA的表達(dá)情況。所得到的重組細(xì)胞經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后再連續(xù)培養(yǎng)15代,采用間接免疫熒光法(IFA)和蛋白免疫印跡法(WB)來檢測HA蛋白表達(dá)的穩(wěn)定性。結(jié)果表明重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-HA經(jīng)雙酶切及測序鑒定正確;共獲得3株高表達(dá)陽性細(xì)胞株。細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)后連續(xù)傳代培養(yǎng)15代后進(jìn)行Western blot和IFA檢測結(jié)果表明,重組細(xì)胞的HA蛋白得到穩(wěn)定的表達(dá)。已成功獲得了能穩(wěn)定表達(dá)乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA細(xì)胞,可為乙型流感病毒HA蛋白的進(jìn)一步研究提供良好的基礎(chǔ)。
[Abstract]:A stable HEK-293-HA cell line expressing hemagglutinin protein of influenza B virus was obtained. The HA gene of influenza B virus was amplified by RT-PCR and cloned into eukaryotic expression vector pcDNA3.1 (). The recombinant plasmid pcDNA3.1 was constructed. The identified pcDNA3.1 was co-transfected into HEK293 cells by liposome mediated method. The recombinant cell line HEK293-HAwas screened by purine mycin, and the expression of HA was detected by flow cytometry (FCM). Indirect immunofluorescence assay (IFA) and Western blot (Western blot) were used to detect the stability of HA protein expression. The results showed that the recombinant plasmid pcDNA3.1was correctly identified by double enzyme digestion and sequencing. Three high expression positive cell lines were obtained. The results of Western blot and IFA analysis showed that the cells were cultured for 15 consecutive generations. HEK-293-HA cells expressing hemagglutinin protein of influenza B virus have been successfully obtained, which can provide a good basis for the further study of HA protein of influenza B virus.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)教研室;廣州呼吸疾病研究所呼吸疾病國家重點實驗室廣州醫(yī)科大學(xué);廣東和信健康科技有限公司;
【基金】：廣州市科技計劃-健康醫(yī)療協(xié)同創(chuàng)新重大專項(項目號:201508020252),題目:病毒感染重癥救治的特異性被動免疫應(yīng)用研究及腺病毒單克隆抗體藥物研發(fā);廣州市科技計劃-科學(xué)研究專項(項目號:201504010032),題目:人腺病毒和流感病毒動物模型的建立及應(yīng)用研究~~
【分類號】：R373.13

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