發(fā)布時(shí)間：2018-03-27 21:31

  本文選題：人線粒體轉(zhuǎn)錄終止因子　切入點(diǎn)：原核表達(dá)　出處：《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)》2016年10期

【摘要】：目的人線粒體轉(zhuǎn)錄終止因子3(mitochondrial transcription termination factor 3,MTERF3)是線粒體基因表達(dá)及能量代謝的負(fù)調(diào)控因子。文中旨在研究大腸埃希菌中原核表達(dá)MTERF3蛋白及制備鼠抗人MTERF3多克隆抗體。方法RT-PCR擴(kuò)增人MTERF3基因c DNA的完整開放閱讀框,克隆至原核表達(dá)載體p ET28b,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)6×his融合蛋白質(zhì)表達(dá),Ni2+-NTA瓊脂糖凝膠柱親和層析純化重組人MTERF3蛋白,以純化的重組蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠制備其特異性多克隆抗體,用ELISA、Western blot和細(xì)胞免疫熒光檢測抗體的效價(jià)和特異性。結(jié)果成功在大腸埃希菌細(xì)胞中原核表達(dá)重組人MTERF3蛋白,并獲得高質(zhì)量的鼠抗人MTERF3多克隆抗體。ELISA結(jié)果顯示抗體的效價(jià)為1∶105,Western blot和免疫熒光結(jié)果顯示鼠抗人MTERF3能特異性識別天然的MTERF3抗原。結(jié)論原核表達(dá)的重組人MTERF3蛋白具有良好的免疫原性,其免疫小鼠后獲得的多克隆抗體具有高效價(jià)和高度的特異性。人MTERF3蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體制備為進(jìn)一步研究人MTERF3的功能奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective 3(mitochondrial transcription termination factor 3 MTERF3) is a negative regulator of mitochondrial gene expression and energy metabolism. The purpose of this paper is to study the prokaryotic expression of MTERF3 protein in Escherichia coli and the preparation of mouse polyclonal antibody against human MTERF3. The complete open reading frame of human MTERF3 gene c DNA was amplified by RT-PCR. The recombinant human MTERF3 protein was cloned into prokaryotic expression vector pET28b and transformed into Escherichia coli (BL21DE-DE3G) IPTG to induce 6 脳 his fusion protein to express Ni2-NTA agarose gel column affinity chromatography to purify recombinant human MTERF3 protein. The purified recombinant protein was used as immunogen to immunize BALB/c mice to prepare its specific polyclonal antibody. The titer and specificity of the antibody were detected by Elisa Western blot and cellular immunofluorescence. Results the recombinant human MTERF3 protein was successfully expressed in Escherichia coli cells. High quality mouse anti-human MTERF3 polyclonal antibody was obtained. Elisa results showed that the titer of the antibody was 1: 105 Western blot and immunofluorescence showed that mouse anti-human MTERF3 could specifically recognize the natural MTERF3 antigen. Conclusion the recombinant human MTERF3 protein expressed in prokaryotic has the ability to recognize natural MTERF3 antigen. Good immunogenicity, The prokaryotic expression of human MTERF3 protein and the preparation of polyclonal antibody laid a foundation for further study on the function of human MTERF3.
【作者單位】： 大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;大理市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81560458,31601155) 云南省教育廳科學(xué)研究基金(2014Z126) 大理大學(xué)博士科研啟動(dòng)基金(BSKY2012018);大理大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計(jì)劃項(xiàng)目(2016058)
【分類號】：R392

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本文編號：1673279