本文選題：血管過氧化物酶　切入點：一氧化氮　出處：《中南大學》2012年博士論文

【摘要】：目的：從生化實驗和細胞實驗水平,運用分子生物學技術,探討VPO1對NO的氧化機制及VPO1在內(nèi)皮細胞NO代謝中的作用。 方法：實驗分為三部分：(1)體外實驗：用探針法實時監(jiān)測VPO1與NO的反應,以及Cl-或Br-對該反應的影響,并用Griess試劑檢測該反應的氧化產(chǎn)物。(2)用NO分析儀檢測GJ-4細胞(穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了VPO1的HEK293細胞)內(nèi)的NO水平,并通過APF熒光檢測法檢測細胞內(nèi)VPO1的活性。(3)通過Western Blot檢測各種血管活性物質(zhì)刺激后內(nèi)皮細胞VPO1, Nox-4, iNOS的蛋白表達情況,以及內(nèi)皮細胞中的NO含量。 結果：(1)體外實驗發(fā)現(xiàn)VPO1能與NO發(fā)生反應,氧化產(chǎn)物之一為硝酸鹽；Cl-和Br-能競爭性抑制MPO對NO的消耗,而Cl-對VPO1與NO反應無明顯影響。(2)GJ-4細胞中的NO含量明顯低于對照組,而VPO1的活性明顯高于對照組。(3)LPS(100ng/ml)和TNF-a(2ng/ml)刺激內(nèi)皮細胞(HUVEC)24小時后,VPO1蛋白表達水平有不同程度升高。在HMEC-1細胞中,BK(1μM)與Ach(10μM)可呈時間依賴性的降低Nox-4和升高iNOS的蛋白表達。TNF-a(2ng/ml)刺激內(nèi)皮細胞24小時后,細胞內(nèi)NO含量明顯低于對照組。 結論：VPO1是NO的氧化酶。細胞內(nèi)VPO1(?)消耗內(nèi)源性NO,參與NO代謝。TNF-a能通過上調(diào)VPO1的表達參與調(diào)控內(nèi)皮細胞的NO代謝。
[Abstract]:Aim: to investigate the oxidation mechanism of VPO1 on no and the role of VPO1 in the metabolism of no in endothelial cells by using molecular biology from the level of biochemical and cellular experiments. Methods: the experiment was divided into three parts: in vitro, the reaction of VPO1 with no and the effect of Cl- or Br- on the reaction were monitored in real time by probe method. The oxidation product of the reaction was detected by Griess reagent. The no level in GJ-4 cells (HEK293 cells stably transfected with VPO1) was detected by no analyzer. The expression of VPO1, Nox-4, iNOS protein and no content in endothelial cells were detected by Western Blot. Results (1) in vitro, VPO1 could react with no. One of the oxidation products was nitrate-Cl- and Br-can competitively inhibit the consumption of no by MPO, but Cl- had no effect on the reaction between VPO1 and no. The content of no in GJ-4 cells was significantly lower than that in control group. The activity of VPO1 was significantly higher than that of the control group (100 ng / ml) and TNF-a1 2ng / ml). The expression of VPO1 protein in endothelial cells was increased in varying degrees after 24 hours of stimulation. In HMEC-1 cells, BK1 渭 M) and Ach(10 渭 M) decreased the expression of Nox-4 and increased the expression of iNOS protein in a time-dependent manner. After 24 hours of stimulation of endothelial cells, The content of no in the cells was significantly lower than that in the control group. Conclusion VPO1 is the oxidase of no. ) consuming endogenous no and participating in no metabolism. TNF-a can regulate the no metabolism of endothelial cells by up-regulating the expression of VPO1.
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

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本文編號：1669472