本文選題：H5N1A型流感病毒　切入點(diǎn)：腸道病毒71型(EV71)　出處：《武漢大學(xué)》2012年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：流行性傳染病會(huì)規(guī)律性或者非規(guī)律性地在全世界范圍內(nèi)引起大范圍的感染疫情,從而威脅到人類的健康甚至生命。其中A型流感病毒和腸道病毒71型(EV71)是近年來亞太地區(qū)爆發(fā)頻率較高,并且疫情影響范圍較廣的兩種急性流行病病毒。本研究在藥用植物提取的天然化合物庫中,體外篩選獲得分別對(duì)這兩種病毒具有較強(qiáng)抗病毒活性的化合物,并且對(duì)這些有效化合物的抗病毒分子機(jī)制做了進(jìn)一步的研究。 眾所周知,A型流感病毒每年都會(huì)引起大范圍的傳染病疫情,并且造成全球數(shù)百萬人的健康和財(cái)產(chǎn)受到損害。但是由于流感病毒的高度變異性和耐藥性的不斷出現(xiàn),新型抗病毒的藥物的研發(fā)顯得尤為重要。本研究中,我們選用了高致病性禽流感病毒H5N1亞型(HPAI H5N1)毒株,以MDCK為篩選用細(xì)胞模型,在三百多種藥用植物提取的純化合物中,用MTT篩選法篩選出Berberine(BR)和Usnic Acid (UA)有明顯的抗HPAI H5N1的抗病毒活性,并且具有很低的細(xì)胞毒性。進(jìn)一步的研究中,我們運(yùn)用了血凝抑制實(shí)驗(yàn)(HI實(shí)驗(yàn))和HA免疫熒光驗(yàn)證了這兩種化合物抑制病毒復(fù)制的能力。并且,利用熒光定量PCR驗(yàn)證了這兩種化合物可以抑制病毒cRNA和mRNA的復(fù)制。另外,通過哺乳動(dòng)物雙雜交實(shí)驗(yàn)證明了BR可以干擾NP和PB2兩種病毒蛋白之間的相互作用,這個(gè)相互作用可能會(huì)影響病毒RNP復(fù)合體的功能�？偨Y(jié)以上發(fā)現(xiàn),BR和UA具有良好的A型抗流感病毒活性,可能成為未來流感治療中重要的新藥候選。 而對(duì)于腸道病毒71型(EV71),近年來,由于多次的疫情爆發(fā),影響的地理范圍越來越廣,受感人群數(shù)量也逐漸增多,使得它已成為亞太地區(qū)甚至更廣范圍的主要公共健康問題。嚴(yán)重的EV71感染會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)性疾病、休克并伴有很高的死亡率。但是到目前為止EV71的治病機(jī)理尚不明確,也沒有非常有效的特異性藥物可以預(yù)防和治療。這也更增加了新藥開發(fā)的必要性和緊迫感。在本研究中,我們選用了實(shí)驗(yàn)室自己分離的EV71毒株,以RD細(xì)胞作為篩選用細(xì)胞模型,在兩百多種藥用植物提取的純化合物庫中,體外篩選獲得Matrine(Mat),靈芝酸L13A和靈芝酸L13B具有明顯的抗EV71病毒活性。另外,細(xì)胞毒性試驗(yàn)證明了在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi),這三種藥用化合物還具有促進(jìn)宿主細(xì)胞存活和生長的作用。進(jìn)一步的研究中,我們利用藥物作用模型實(shí)驗(yàn)初步判斷了三種藥用化合物的作用時(shí)期,并且利用生物信息學(xué)模擬分子對(duì)接實(shí)驗(yàn),從結(jié)構(gòu)和能量變化的角度證實(shí)了三種化合物可以直接與病毒粒子相互作用,通過阻礙病毒脫殼作用起到明顯的看病毒效果。 綜上所述,我們的研究證實(shí)了體外篩選出的天然化合物對(duì)HPAI H5N1和EV71有著良好的抗病毒活性,極低的細(xì)胞毒性,并且揭示了它們的抗病毒分子機(jī)制；為兩種流行性傳染疾病的預(yù)防及治療提供了新的候選藥物、理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),同時(shí)也為兩種病毒的感染病人的臨床治療提供了更多的理論支持。
[Abstract]:The epidemic of infectious diseases will be regular or non regular in the worldwide epidemic caused by infection in large scale, and thus a threat to human health and even life. The influenza A virus and enterovirus 71 (EV71) is the Asia Pacific region in recent years the outbreak of the epidemic situation of high frequency, and the effect of two kinds of acute virus epidemic a wide range of this study. In the extraction of medicinal plants of natural compounds, compounds were screened in vitro with strong antiviral activity against the two viruses, and the antiviral molecular mechanism of these compounds effectively do a further study.
As everyone knows, A type A influenza virus every year will cause the epidemic situation of infectious diseases in large scale, and caused millions of global health and property damage. But due to high variability of influenza virus and drug resistance appear constantly, the new antiviral drug development is particularly important. In this study, we selected a high pathogenicity avian influenza virus subtype H5N1 (HPAI H5N1) strains, screening cell model with MDCK as pure compounds extracted in more than 300 species of medicinal plants in Berberine were screened with MTT screening method (BR) and Usnic Acid (UA) has obvious anti HPAI antiviral activity of H5N1, and has a very low cytotoxicity. The further research, we use the hemagglutination inhibition test (HI test) and HA immunofluorescence to verify the ability to inhibit the replication of these two compounds. Moreover, the two compounds tested by fluorescent quantitative PCR CRNA and mRNA can inhibit virus replication. In addition, the mammalian two hybrid experiments proved that the BR interaction between two viral proteins NP and PB2 interference, this interaction may affect viral RNP complex functions. Summarize the above findings, BR and UA A with good anti influenza virus activity, may be the future of new drug candidates in the treatment of influenza.
As for enterovirus 71 (EV71), in recent years, due to the outbreak of many epidemic, the effects of the geographical range more widely, infected population is gradually increased, so that it has become a major public health problem for the Asia Pacific region and the wider range. Severe EV71 infection will lead to neurological diseases, and shock with a high mortality rate. But so far the cure mechanism of EV71 is still not clear, there is no specific drug can be very effective in prevention and treatment. It also increased the necessity and urgency of developing new drugs. In this study, we selected the EV71 strains isolated in our laboratory, using cell screening using RD cells as model, two hundred kinds of medicinal plants in the extraction of pure compounds in the library, in vitro screening Matrine (Mat), ganoderic acid L13A and ganoderic acid L13B has obvious anti EV71 virus activity. In addition, test cell toxicity In the experimental concentration range, the three kinds of medicinal compounds also have a role in promoting the survival and growth of host cells. Further research, we use the drug model experiment preliminary judgment function during the period of three kinds of medicinal compounds, and the use of bioinformatics and molecular docking simulation experiment, the structure and the change of energy confirms three compounds can be directly with the virus particle interaction, by blocking virus uncoating played the role of evident virus effect.
In summary, our study confirms that natural compounds in vitro screened with good antiviral activity against HPAI H5N1 and EV71, extremely low cytotoxicity, antiviral and reveal their molecular mechanisms; providing new drug candidates for the prevention and treatment of two kinds of epidemic infectious diseases, the theoretical and experimental basis, at the same time clinical treatment for infected patients of two viruses provide more theoretical support.

【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R373

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本文編號(hào)：1640961