本文選題：肝再生　切入點(diǎn)：視黃醇結(jié)合蛋白7基因　出處：《河南師范大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：視黃醇結(jié)合蛋白7(rbp7)又被稱為胞內(nèi)視黃醇結(jié)合蛋白4(CRBPⅣ)，主要運(yùn)輸胞內(nèi)視黃醇類物質(zhì)。目前還沒(méi)有關(guān)于rbp7基因在肝再生中作用的研究。本實(shí)驗(yàn)室采用基因芯片Rat Genome2302.0檢測(cè)再生肝中rbp7基因的表達(dá)情況，結(jié)果顯示rbp7在肝再生進(jìn)展階段(6-72h)的30h和72h基因表達(dá)上調(diào)，72h時(shí)達(dá)到表達(dá)高峰，這說(shuō)明rbp7基因是大鼠肝再生相關(guān)基因，為了進(jìn)一步研究rbp7在肝再生中的作用，本文以大鼠再生肝為材料，參照NCBI中rbp7的mRNA序列設(shè)計(jì)引物，采用分子克隆的方法克隆出rbp7基因，并構(gòu)建出了它的表達(dá)載體干涉載體和檢驗(yàn)載體。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)將pEGFP-N1-rbp7pEGFP-N1pGenesil-1.0-rbp7(190)和pGenesil-1.0-HK等4種質(zhì)粒采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)入BEL-7402細(xì)胞內(nèi)，，用G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，并進(jìn)行以下檢測(cè)：采用活體觀察和HE染色進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察；通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT法進(jìn)行生長(zhǎng)曲線的測(cè)定；PCNA免疫組化檢測(cè)細(xì)胞增殖；Hochest33258染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡；甲基纖維素半固體培養(yǎng)基檢測(cè)細(xì)胞的惡性增殖程度；藥物MTT法檢測(cè)細(xì)胞的耐藥性，為進(jìn)一步研究rbp7在肝再生中的作用奠定了基礎(chǔ)，也為揭示肝再生分子機(jī)制提供信息。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用液壓轉(zhuǎn)基因技術(shù)將質(zhì)粒分別注入2/3肝切除大鼠體內(nèi)，并檢測(cè)轉(zhuǎn)染這些質(zhì)粒后大鼠的死亡率組織顯微結(jié)構(gòu)以及肝再生率，以判斷rbp7對(duì)肝再生的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pEGFP-N1-rbp7的細(xì)胞形態(tài)與BEL-7402細(xì)胞基本相同，但細(xì)胞核發(fā)生固縮，變�。患�(xì)胞的生長(zhǎng)曲線顯示在生長(zhǎng)后期轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-rbp7的細(xì)胞比轉(zhuǎn)染對(duì)照pEGFP-N1的細(xì)胞生長(zhǎng)要稍快些；PCNA和Hochest33258凋亡染色顯示rbp7不會(huì)引起細(xì)胞凋亡；甲基纖維素固體培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)顯示pEGFP-N1-rbp7可能增加了BEL-7402細(xì)胞的惡性增殖程度；藥物MTT檢測(cè)則發(fā)現(xiàn)，rbp7基因?qū)Π被嵫苌風(fēng)-4-氟苯丙胺酸無(wú)明顯的耐藥性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，pEGFP-N1-rbp7組比對(duì)照PH組的肝再生率高，120h后pGenesil-1.0-rbp7(190)組要比pEGFP-N1-rbp7組的肝再生率低。綜上所述，肝再生相關(guān)基因rbp7可能有促進(jìn)細(xì)胞增殖增加肝癌細(xì)胞惡性增殖程度和促進(jìn)肝再生的作用。
[Abstract]:Retinol binding protein 7rbp7), also known as intracellular retinol binding protein 4 (CRBP 鈪

本文編號(hào)：1603715