本文關鍵詞： Rh表型 RHD基因 RHCE基因 SMP1基因 單核苷酸多態(tài)性 聚合酶鏈式反應-序列特異性引物 測序 漢族 藏族 維族　出處：《廣州中醫(yī)藥大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 1.比較研究中國漢族和西藏藏族人群Rh表型分布特征。 2.研究中國漢族和西藏藏族人群SMPI基因單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)。 3.研究中國漢族和西藏藏族人群SMP1基因SNPs與RhC/c抗原、RHC/c等位基因的相關性。 4.探索中國漢族、西藏藏族和新疆維族人群RHD基因啟動子區(qū)多態(tài)性與RhD陰性機制之間的相關性。 5.研究中國漢族和西藏藏族人群RHD和RHCE基因第4內含子序列特點及結構。 6.弄清中國人RHD基因和RHCE基因非編碼區(qū)多態(tài)性,探究中國人Rh血型系統(tǒng)的遺傳機制,比較研究不同民族間Rh血型系統(tǒng)遺傳學背景差異。 方法： 1.分別采用Anti-D、Anti-C、Anti-c、Anti-E、Anti-e單克隆抗體鑒定Rh表型。用IgM型單克隆抗體鑒定RhD抗原為陰性者用改良間接抗球蛋白試驗(Indirect antiglobulin test,IAT)進行確認。 2.在原有測序基礎上,針對RHD和RHCE基因之間的SMP1基因多態(tài)性位點設計特異性引物,應用聚合酶鏈反應-序列特異性引物技術(Polymerase Chain Reaction-Sequnence Specific Primer,PCR-SSP)對SMP1基因多態(tài)性位點進行檢測,并用測序方法進行驗證。 3.應用PCR-SSP方法對RHD基因的上游、下游和雜合的三個Rhesus盒(Rhesusbox),以及RHD基因啟動子區(qū)多態(tài)性位點進行檢測,對部分樣本檢測結果進行測序驗證。 4.應用雙向測序拼接技術對RHD基因和RHCE基因第4內含子序列進行研究。 5.采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析處理。 結果： 1.200例隨機非血緣關系中國漢族樣本共檢出DCCee(55.00%)、DCcEe (29.00%)、DCcee(7.00%)、DccEE(5.50%)、DccEe(3.00%)和dccee(0.50%)6種表型,其主要單體型頻率DCe(0.730)DcE(0.215)dce(0.055),基因頻率D(0.993)e(0.785)C(0.730)c(0.270)E(0.215)d(0.007)。 2.50例隨機非血緣關系西藏藏族樣本共檢出DCcEe(54.00%)、DCCee(28.00%)、 DccEE(8.00%)、DccEe4(8.00%)和DCcee(2.00%)5種表型,主要單體型頻率DCe(0.560)DcE(0.390)Dce(0.050),基因頻率D(1.000)e(0.610)C(0.560)c(0.440)E(0.390)d(0)。 3.中國漢族SMPI基因第7外顯子nt1351C和nt1351T的基因頻率分別為0.739刷0.261,nt1726A和nt1726G的基因頻率也分別為0.739和0.261；西藏藏族SMP1基因第7外顯子nt1351C和nt1351T的基因頻率分別為0.860和0.140,nt1726A和nt1726G的基因頻率也分別為0.860和0.140。西藏藏族人群nt1351C基因頻率高于漢族人群(x2=6.36,P0.05),nt1351T基因頻率低于漢漢族(x=6.36,P0.05)；西藏藏族人群nt1726A基因頻率高于漢族人群(x2=6.36,P0.05),nt1726G基因頻率低于漢族(x2=6.36,P0.05)。 4.中國漢族SMPl基因第7外顯子基因型為1351CC、1351TT和1351CT的頻率分別為0.550、0.071和0.379；中國漢族SMP1基因第7外顯子基因型為1726AA、1726GG和1726AG的頻率也分別為0.550、0.071和0.379；西藏藏族SMP1基因第7外顯子基因型為1351CC、1351TT和1351CT的頻率分別為0.263、0.140和0.600,1726AA、1726GG和1726AG的頻率也分別為0.263、0.140和0.600。中國漢族人群1351CC和1726AA兩個基因型頻率均高于西藏藏族人群(x2均為9.77,P均小于0.01),中國漢族人群1351CT和1726AG兩個基因型頻率均低于西藏藏族人群(x2均為9.28,P均小于0.01),中國漢族人群1351TT和1726GG兩個基因型頻率與西藏藏族人群相比均無統(tǒng)計學差異(x2均為0.01,P均大于0.05)。 5.182例隨機非血緣關系中國漢族樣本中表型為RhCC、Rhcc和RhCc者分別有101例、16例和65例。101例表型為RhCC樣本中,100例樣本(99.01%)只檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A,1例樣本(0.99%)只檢測到SMP1基因nt1351T和nt1726G；16例表型為Rhcc的樣本均檢測到SMP1基因nt1351T和nt1726G,其中3例(18.75%)樣本還能檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A；65例表型為RhCc的樣本中,64例(98.46%)均檢測到SMP1基因nt1351C、nt1351T、nt1726A和nt1726G,其中1例(1.54%)只檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A。 6.182例隨機非血緣關系中國漢族樣本中基因型為RHCC、Rllcc和RHCc者分別有100例、16例和66例。100例基因型為RHCC樣本只檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A,未檢測到SMP1基因nt1351T和nt1726G；16例基因型為1Hcc的樣本均檢測到SMP1基因nt1351T和nt1726G,其中3例樣本(18.75%)同時還能檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A；66例基因型為RHCc的樣本中,65例(98.48%)均能檢測到SMPI基因nt1351C、nt1351T、nt1726A和nt1726G,1例(1.52%)只檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A。 7.50例隨機非血緣關系西藏藏族樣本中表型為RhCC.Rhcc和RhCc者分別有13例、8例和29例。13例表型為RhCC的樣本只檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A,未檢測到SMPl基因nt1351T和nt1726G；8例表型為Rhcc的樣本均檢測到SMP1其因nt1351T和nt1726G,其中4例(50%)樣本同時還能檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A；29例表型為RhCc樣本中,27例(93.10%)均能檢測到SMP1基因nt1351C、nt1351T、nt1726A和nt1726G,其中2例(6.90%)只測到SMP1基因nt1351C和nt1726A。 8.50例隨機非血緣關系西藏藏族樣本中基因型為RHCC, RHcc和RHCc者分別有13例、8例和29例。13例基因型為RHCC的樣本只檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A,未檢測到SMPl基因nt1351T和nt1726G；8例基因型為RHcc的樣本均能檢測到SMPl基因nt1351T和nt1726G,其中4例樣本(50%)同時還能檢測到SMPI基因nt1351C和nt1726A；29例基因型為RHCc樣本中,27例(93.10%)均能檢測到SMP1基因nt1351C、nt1351T、nt1726A和nt1726G,2例(6.90%)只檢測到SMPl基因nt1351C和nt1726A。 9.7例RhD陰性西藏藏族樣本中,3例表型為RhCc且基因型為RHCc的樣本同時能檢測到SMP1基因nt1351C、nt1351T、nt1726A和nt1726G,4例表型為Rhcc且基因型為RHcc的樣本只檢測到SMP1基因nt1351T和nt1726G,未檢測到SMP1基因nt1351C和nt1726A。 10.200例隨機非血緣關系RhD陽性中國漢族樣本中,189例樣本(94.50%)只檢測到RHD基因的upstream box和downstream box(即RHD基因型為RHD+/RHD*),11例樣本(5.50%)同時檢測到RHD基因的upstream box、downstream box和hybridbox(即RHD基因型為RHD+RHD-);50例隨機非血緣關系RhD陽性西藏藏族樣本中,47例樣本(94.00%)只檢測到RHD基因的upstream box和downstream box,3例樣本(6.00%)同時檢測到RHD基因的upstream box、downstream box和hybrid box;50例隨機非血緣關系RhD陽性維族樣本中,45例樣本(90.00%)只檢測到RHD基因的upstream box和downstream box,5例樣本(10.00%)同時檢測到RHD基因的upstream box、downstream box和hybrid box。RHD+/RHt+基因型頻率間比較,漢族與藏族、漢族與維族、藏族與維族之間均無統(tǒng)計學差異(x2=0.04,P0.05；x2=0.71,p0.05；x2=0.14,p0.05)；RHD+/RHD基因型頻率間比較,漢族與藏族、漢族與維族、藏族與維族之間也均無統(tǒng)計學差異(x2=0.04,P0.05；x2=0.71,P0.05；x2=0.14,P0.05)。 11.228例RhD陰性漢族樣本中,164例樣本(71.93%)只檢測到RHD基因的hybrid box(即RHD基因型為RHD/RHD);63例樣本(27.63%)同時檢測到RHD基因的upstream box、downstream box和hybrid box,1例樣本(0.44%)只檢測到RHD基因的upstream box和downstream box;70例RhD陰性維族樣中,59例樣本(84.29%)只檢測到RHD基因的hybrid box,11例樣本(15.71%)同時-檢測到RHD基因的upstream box、downstream box和hybrid box;7例RhD陰性西藏藏族樣本中,6例樣本(85.71%)只檢測到RHD基因的hybrid box,1例樣本(14.29%)同時檢測到RHD基因的upstream box、downstream box和hybrid box。RHD+/RHD-基因型頻率間比較,漢族和維族之間有統(tǒng)計學差異(x2=4.08,0.01P0.05),漢族和藏族、藏族和維族之間均無統(tǒng)計學差異(x2=0.12,,P0.05；x2=0.2,P0.05)；RHD/RHD基因型頻率間比較,漢族和維族之間有統(tǒng)計學差異(x2=4.34,0.01P0.05),漢族和藏族、藏族和維族之間均無統(tǒng)計學差異(x2=0.14,P0.05；x2=0.2,P0.05)。 12.6例漢族弱D型樣本均能檢測到RHD基因的upstream box、downstream box和hybrid box;42例Del型樣本中,41例樣本均能檢測到RHD基因的upstream box、 downstream box和hybrid box,1例樣本只檢測到RHD基因的upstream box和downstream box。 13.424例RHD基因型為RHD+/RHD+/RHD樣本(含200例RhD陽性漢族、50例RhD陽性藏族、50例RhD陽性維族、6例弱D、42例Del型、64例RhD陰性漢族、11例RhD陰性維族和1例RhD陰性藏族)均能檢測到RHD基因啟動子區(qū)/1個多態(tài)性位點,而所有229例基因型為RHD-/RHD-的RhD陰性樣本(包括164例RhD陰性漢族、59例RhD陰性維族和6例RhD陰性藏族)均未檢測到RHD基因啟動子區(qū)4個多態(tài)性位點。 1/1.中國漢族和西藏藏族人群RHCE基因第4內含子全長均為1078bp且序列相同,均包含一個Alu序列；RHD基因第4內含子全長426bp且序列也相同,RHD基因第4內含子與RHCE基因第4內含子相比缺失652bp。中國漢族和西藏藏族人群RHCE基因和RHD基因第4內含子序列與白種人的一致。中國漢族和西藏藏族人群RHCE基因第4內含子與日本人RHCE基因第4內含子相比,中國人有3個堿基插入和2個堿基替換的差異,堿基插入和替換均發(fā)生在RHD基因缺欠的652bp序列內。 結論： 1.西藏藏族人群Rh表型分布特征與漢族人群相比既有相似之處,又有其自身分布特點。 2.中國漢族和西藏藏族人群SMPl基因第7外顯子具有1351CT和1726AG多態(tài)性。漢族人群SMPI基因第7外顯子nt1351C和nt1726A基因頻率均低于西藏藏族人群,nt1351T和nt1726G的基因頻率均商于西藏藏族人群。漢族人群SMP1基因第7外顯子1726AA和1351CC基因型頻率均高于西藏藏族人群,1351TT、1726GG、1351CT和1726A6基因型頻率均低于西藏藏族人群。 3.中國漢族和西藏藏族人群SMP1基因第7外顯子nt1351C和nt1726A連鎖,nt1351T和nt1726G連鎖。 4.中國漢族和西藏藏族人群nt1351C和nt1726A與RhC抗原,以及與RHC等位基因關聯(lián),nt1351T和nt1726G與Rhc抗原,以及與R1tc等位基因關聯(lián)。 5.中國漢族、西藏藏族和維族人群RhD陽性樣本RHD基因型以RHD/RHD+純合子為主,RhD陰性樣本RHD基因型主要為RHD/RHD+純合子。 6.不管表型為RhD陽性、RhD陰性、弱D型,還足Del型個體,只要其RHD基因序列全在或部分存在,則均能檢測到RHD基因啟動子區(qū)4個多態(tài)性位點；表型為Rh1)陰性且RHD基因全缺失個體均檢測不到RHD基因啟動子區(qū)4個多態(tài)性位點。 7.在RHD基因和RHCE基因序列長度和結構方面,中國漢族和西藏藏族人群一致,且與白種人相同。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R394

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

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本文編號：1551919