本文關(guān)鍵詞： NT 提取 純化 CaM GST pull-down實驗　出處：《中國醫(yī)科大學學報》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討心肌Cav1.2鈣通道NT蛋白片段提取與純化的方法,并研究其與CaM的相互作用。方法將NT的cDNA插入pGEX-6p-3質(zhì)粒載體后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21感受態(tài)細胞,大量培養(yǎng)并利用異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)NT的GST融合蛋白表達,GS-4B beads分離純化,Pre Scission蛋白酶切除GST標簽,進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳(SDSPAGE)檢測蛋白純度和相對分子質(zhì)量。采用GST pull-down實驗研究NT片段與Ca M的相互作用。結(jié)果 SDS-PAGE結(jié)果顯示成功純化獲得NT蛋白片段,且具有較高的純度。GST pull-down實驗結(jié)果顯示NT可與Ca M結(jié)合,且具有濃度依賴性。結(jié)論本研究成功制備與純化了心肌Cav1.2鈣通道NT蛋白片段,為深入研究蛋白相互作用及NT的生物學功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to investigate the extraction and purification of Cav1.2 calcium channel NT protein fragment and its interaction with CaM. Methods the NT cDNA was inserted into pGEX-6p-3 plasmid vector and transformed into Escherichia coli BL-21 receptive cells. GST fusion protein of NT was induced by isopropylthiothio- 尾 -D galactoside (IPTG) in a large amount. The expression of GS-4B beads was separated and purified. Pre Scission protease was used to remove the GST tag. The purity and relative molecular weight of the protein were determined by sodium 12 alkyl sulfate and polyacrylamide gel electrophoresis. The interaction between NT fragment and Cam was studied by GST pull-down. The results of SDS-PAGE showed that NT protein fragment was purified successfully. The results showed that NT could bind to Cam in a concentration-dependent manner. Conclusion the NT protein fragment of Cav1.2 calcium channel was successfully prepared and purified in this study. It lays a foundation for the further study of protein interaction and the biological function of NT.
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學藥學院藥物毒理學教研室;
【基金】：國家自然科學基金(31400981,31471091) 大學生創(chuàng)新計劃項目(2015069,201510159068,201510159047,201610159000064)
【分類號】：R3411

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本文編號：1548879