本文關(guān)鍵詞： 皮膚 成纖維細(xì)胞 膠原 無瘢痕愈合　出處：《瀘州醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：研究培養(yǎng)人胚胎、小兒皮膚成纖維細(xì)胞及TGF-β1干預(yù)后小兒皮膚成纖維細(xì)胞的盤狀結(jié)構(gòu)域受體1(discoidin domain receptor; DDR-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(matrix metalloproteinases; MMP-13)、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen; PCNA)、I型膠原(collagen I; Col-I)及III型膠原(collagen III; Col-III)的表達(dá)及相互關(guān)系,從而探討I、III型膠原的可能降解途徑并觀察培養(yǎng)胚胎與小兒皮膚成纖維細(xì)胞的形態(tài)特征。方法：①原代培養(yǎng)小兒包皮成纖維細(xì)胞(human postnatal dermal fibroblast; hPDF)和人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞(human fetal dermal fibroblast; hFDF)并傳代；②應(yīng)用HE染色法觀察hFDF與hPDF的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；③應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測hFDF與hPDF的DDR-1、 MMP-13、增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen; PCNA)、I型膠原(collagen I; Col-I)及Ⅲ型膠原(collagen III; Col-III)的表達(dá)；④利用外源性轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)(5ng/ml)干預(yù)hPDF,并設(shè)立TGF-β1未干預(yù)的對(duì)照組,分別于TGF-β1孵育8小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、96小時(shí)收獲細(xì)胞；⑤應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法觀察不同時(shí)間點(diǎn)TGF-β1干預(yù)組與對(duì)照組hPDF的PCNA和DDR-1、 MMP-13、I型膠原及Ⅲ型膠原的表達(dá)；⑥應(yīng)用IX-71(OLYMPUS)顯微成像系統(tǒng)在低倍(×100)視野下觀察分析及照相,用Image-pro6.0圖像分析系統(tǒng)測定各項(xiàng)指標(biāo)的平均光密度值；⑦所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。采用spss19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,應(yīng)用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)、重復(fù)測量方差分析、單因素方差分析、LSD檢驗(yàn)及多重線性回歸分析法,P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：①hFDF與hPDF形態(tài)都可表現(xiàn)為長梭形,核大,核仁明顯。(2) hFDF組DDR-1、MMP-13、I型膠原、III型膠原及PCNA的平均光密度值皆高于hPDF組(P0.05),hFDF組與hPDF組的III型膠原/I膠原無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。③hPDF組中DDR-1對(duì)I型膠原、III型膠原、 MMP-13,I型膠原對(duì)DDR-1、III型膠原、MMP-13,[II型膠原對(duì)Ⅰ型膠原、DDR-1、 MMP-13的線性回歸方程具有顯著性,而hFDF組中的各線性回歸方程不具備顯著性。④TGF-β1干預(yù)與對(duì)照組的兩組細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)上Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、DDR-1、 MMP-13、 PCNA的平均光密度值不同(P0.05),其中Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、MMP-13表達(dá)的基線上調(diào)(P0.05)。⑤TGF-β1干預(yù)后擬合出DDR-1對(duì)Ⅰ型膠原、MMP-13, I型膠原對(duì)DDR-1、 MMP-13及Ⅲ型膠原對(duì)Ⅰ型膠原、DDR-1、 MMP-13的線性回歸方程皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：①hFDF比hPDF功能活躍。②在hPDF中DDR-1與Ⅲ型膠原之間存在相互作用的正反饋環(huán)路。③MMP-13可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞合成Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原。④膠原—成纖維細(xì)胞信號(hào)系統(tǒng)中,hPDF βY解膠原的機(jī)制可能與膠原產(chǎn)生→激活膠原受體DDR-l→激活基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-13途徑有密切關(guān)系,但hFDF的膠原降解機(jī)制可能與此途徑無關(guān)。⑤在hPDF中,TGF-β1可以促進(jìn)I型和Ⅲ型膠原、MMP-13的合成。⑥TGF-β1干預(yù)后,hPDF的增殖能力降低。⑦TGF-β1干預(yù)后在hPDF中,I型膠原與DDR-1之間的相互作用存在正反饋環(huán)路。⑧TGF-β1干預(yù)后,膠原產(chǎn)生→激活膠原受體DDR-1→激活基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-13途徑在小兒膠原降解中發(fā)揮了作用,但TGF-β干預(yù)后小兒膠原的降解可能并非由其一條途徑完成,還存在其它途徑及細(xì)胞因子的協(xié)同作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R329.2

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