本文關(guān)鍵詞： 乙型肝炎病毒 慢性乙型肝炎 程序性死亡受體-1 程序性死亡配體-1 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞 免疫耐受　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:根據(jù)免疫學(xué)特點(diǎn),慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染在臨床上可以分為三個(gè)時(shí)期,即免疫耐受期,免疫清除期,免疫控制期或非活動(dòng)攜帶狀態(tài)。目前HBV感染慢性化的確切機(jī)制尚不明確。HBV特異性T細(xì)胞功能低下可能是HBV感染慢性化的主要原因之一,而負(fù)性共刺激信號(hào)可導(dǎo)致T細(xì)胞功能低下。程序性死亡受體-1(programmed death-1,PD-1)及其配體PD-L1是重要的負(fù)性共刺激信號(hào),與CD8~+T細(xì)胞失活及病毒持續(xù)感染有關(guān)。最近的研究表明,在慢性HBV感染者中,病毒特異性CD8~+T細(xì)胞表面的PD-1表達(dá)水平增加,阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路后T細(xì)胞功能可得到一定程度恢復(fù)。雖然關(guān)于HBV感染患者PD-1表達(dá)水平和T細(xì)胞反應(yīng)變化的報(bào)道很多,慢性HBV感染的自然過程中免疫耐受期與免疫清除期患者PD-1的表達(dá)變化規(guī)律研究目前少見報(bào)道。本研究旨在探討PD-1在HBV感染者免疫耐受期與免疫清除期的表達(dá)變化及意義。 方法:選取慢性HBV感染者105例,其中免疫清除期患者55例,免疫耐受期患者50例,所有患者均行肝組織活檢,炎癥分級為G0~G4,纖維化程度分為S0~S4。健康對照15例。 1所有受試者留取新鮮外周靜脈血,密度梯度離心法分離PBMC,用PD-1-FITC抗體進(jìn)行染色,并以流式細(xì)胞儀檢測PBMC上PD-1表達(dá)水平,同時(shí)用HLA-A2抗體進(jìn)行染色,流式細(xì)胞儀行HLA-A2型別鑒定。 2選取HLA-A2陽性的受試者(免疫清除期患者30例,免疫耐受期患者30例,正常人10例),密度梯度離心法分離PBMC,用pentamer-PE、CD3-ECD、CD8-PE-Cy5、PD-1-FITC抗體進(jìn)行染色,并以流式細(xì)胞儀檢測HLA-A2陽性的HBV特異性CD8~+T細(xì)胞占總的CD8~+T細(xì)胞比例及其PD-1表達(dá)。 結(jié)果: 1不同臨床分期慢性HBV感染者PBMC及HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1的表達(dá)變化:免疫耐受組PBMC及HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)明顯高于免疫清除組與正常對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。2不同臨床分期慢性HBV感染者HBV特異性CD8~+T細(xì)胞表達(dá)變化:免疫清除組HBV特異性CD8~+T細(xì)胞表達(dá)明顯高于免疫耐受組與正常對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。 3 HBV特異性CD8~+T細(xì)胞數(shù)量與其PD-1表達(dá)的相關(guān)性:HBV特異性CD8~+T細(xì)胞數(shù)量與其PD-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.463, P0.01)。 4 HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與HBV DNA的關(guān)系:按HBV DNA水平將研究對象分為3 log10、3-6 log10和6 log10三組。6 log10組HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)較3 log10組和3-6 log10組明顯增高(F=82.94,P0.01)。相關(guān)性分析顯示HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與HBV DNA呈正相關(guān)(r=0.882, P0.01)。 5免疫清除組HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與血清ALT水平的相關(guān)性:按ALT水平將研究對象分為3倍、3-10倍和10倍正常值三組。結(jié)果:三組之間PD-1表達(dá)無明顯差異(P0.05)。相關(guān)性分析顯示HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與ALT無相關(guān)(r=0.085, P0.05)。 結(jié)論: 1慢性HBV感染者中免疫耐受期患者HBV特異性CD8~+T細(xì)胞表達(dá)較免疫清除期患者明顯減少,提示HBV特異性CD8~+T細(xì)胞在清除HBV中發(fā)揮重要作用。 2慢性HBV感染者中免疫耐受期患者HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1的表達(dá)明顯高于免疫清除期,提示PD-1的高表達(dá)可能影響HBV特異性CD8~+T細(xì)胞的活化。 3在慢性HBV感染者中,HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與HBV特異性CD8~+T細(xì)胞表達(dá)呈負(fù)相關(guān),說明PD-1通過抑制HBV特異性CD8~+T細(xì)胞的活化來影響疾病的進(jìn)展,PD-1的高表達(dá)導(dǎo)致T細(xì)胞活化障礙可能是乙型肝炎免疫耐受機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective: according to the immunological characteristics of chronic hepatitis B virus (hepatitis B, virus, HBV) infection in clinic can be divided into three periods, namely, immunotolerance, immune clearance phase, immune control or inactive carrier state. The exact mechanism of the chronicity of HBV infection is not clear the function of.HBV specific T cells may be low is one of the main reasons for the chronicity of HBV infection, while negative costimulatory signals can lead to T cell dysfunction. Programmed death receptor -1 (programmed death-1 PD-1) and its ligand PD-L1 is an important negative costimulatory signal, CD8 and ~+T cell inactivation and virus infection. Recent studies show that in chronic HBV infection, virus specific CD8~+T cell surface expression level of PD-1 increased to a certain extent, blocking the recovery function of T cells in PD-1/PD-L1 signaling pathway. Although the PD-1 expression level of HBV infection patients And T cell response changes to many reports, the natural process of chronic HBV infection in immune tolerance and immune clearance of PD-1 patients the expression of research is rarely reported. This study aimed to investigate PD-1 in HBV infection of immune tolerance and the immune clearance phase expression and significance.
Methods: 105 cases of chronic HBV infection were selected, including 55 cases of immune clearance phase and 50 cases of immune tolerance stage. All patients underwent liver biopsy, and the grade of inflammation was G0~G4. The fibrosis degree was divided into 15 S0~S4. healthy controls.
1 all subjects received fresh peripheral venous blood. PBMC was isolated by density gradient centrifugation. PD-1-FITC antibody was used to stain. PD-1 expression level on PBMC was detected by flow cytometry. HLA-A2 antibody was used for staining, and HLA-A2 type identification was performed by flow cytometry.
The selection of 2 HLA-A2 positive subjects (30 cases, 30 cases of patients with immune clearance, immune tolerance in patients with 10 cases of normal persons), density gradient centrifugation of PBMC, pentamer-PE, CD3-ECD, CD8-PE-Cy5, PD-1-FITC antibody staining and flow cytometry was used to detect HLA-A2 positive HBV specific CD8~+T cells the proportion of the total CD8~+T cells and the expression of PD-1.
Result:
1 different clinical stages of chronic HBV infection, the expression changes of PBMC and HBV specific CD8~+T cells in PD-1: immune tolerance group PBMC and HBV specific CD8~+T cells on the expression of PD-1 was significantly higher than that in the immune clearance group and normal control group, the difference was statistically significant (P0.05 or P0.01).2 in different clinical stages of chronic HBV infection HBV specific CD8~+T cell expression: the expression was significantly higher than that of immune tolerance group and normal control group group HBV specific CD8~+T cell immune clearance, there was significant difference (P0.01).
The correlation between the number of 3 HBV specific CD8~+T cells and the expression of PD-1: the number of HBV specific CD8~+T cells was negatively correlated with the expression of PD-1 (r=-0.463, P0.01).
The expression of specific CD8~+T cells on PD-1 4 HBV HBV DNA and HBV DNA: according to the level of the research object will be divided into 3 log10,3-6 and 6 log10 log10 three.6 group log10 group HBV specific CD8~+T cells on the expression of PD-1 was 3 log10 and 3-6 log10 groups increased significantly (F=82.94, P0.01). Correlation analysis showed that HBV specific CD8~+T cells on the expression of PD-1 was positively correlated with HBV DNA (r=0.882, P0.01).
5 immune clearance group HBV specific CD8~+T cells on the expression of PD-1 correlated with serum ALT levels: ALT level according to the research object will be divided into 3 times, 3-10 times and 10 times the normal value of the three groups. Results: the three groups had no significant difference between the expression of PD-1 (P0.05). Correlation analysis showed that HBV specific CD8~+T cells in PD-1 no correlation with the expression of ALT (r=0.085, P0.05).
Conclusion:
1 the expression of HBV specific CD8~+T cells in patients with chronic HBV infection in immune tolerance phase is significantly reduced than that in immune clearance phase, suggesting that HBV specific CD8~+T cells play an important role in clearing HBV.
2 the expression of PD-1 on HBV specific CD8~+T cells in patients with chronic HBV infection is significantly higher than that in immune clearance phase, indicating that the high expression of PD-1 may affect the activation of HBV specific CD8~+T cells.
In 3 patients with chronic HBV infection, HBV specific CD8~+T cells on the expression of PD-1 was negatively correlated with HBV specific CD8~+T cells express PD-1 by inhibiting the activation of HBV specific CD8~+T cells to influence the progression of the disease, the high expression of PD-1 leads to activation of T cell disorder may be one of the mechanisms of immune tolerance of hepatitis B.

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1543511