發(fā)布時(shí)間：2018-02-16 13:11

  本文關(guān)鍵詞： 低氧 A549細(xì)胞 SDF1 HIF IPF　出處：《華中科技大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:研究趨化因子SDF1(CXCL12)在常氧及低氧時(shí)人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(A549細(xì)胞)中的表達(dá)情況,及其表達(dá)與HIF1及HIF2關(guān)系。 方法:將A549細(xì)胞置于低氧(1.5%氧濃度)培養(yǎng)箱和常氧(21%氧濃度)培養(yǎng)箱中進(jìn)行干預(yù)放置48h后,用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)常氧組和低氧組, SDF1,HIF-1α及HIF-2α的mRNA水平。而后通過(guò)轉(zhuǎn)染化學(xué)合成的siHIF-1α,siHIF-2α下調(diào)HIF-1α及HIF-2α的mRNA水平。實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)各組HIF-1α及HIF-2α及SDF1mRNA的變化情況。用western blot檢測(cè)HIF-1α及HIF-2α蛋白水平的變化,ELISA檢測(cè)SDF1在各組蛋白水平的變化。 結(jié)果:實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)的結(jié)果,常氧組HIF-1α和HIF-2α的mRNA有一定水平的表達(dá),但是SDF1mRNA水平幾乎檢測(cè)不到。相對(duì)于正常組,缺氧48h組的A549細(xì)胞中的HIF-1α,HIF-2α及SDF1mRNA水平均明顯增高(p㩳0.05)。隨后進(jìn)行的RNA干擾,通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR發(fā)現(xiàn)相對(duì)于陰性對(duì)照組,siHIF-1α組的HIF-1α和SDF1mRNA,siHIF-2α組的HIF-2α、SDF1mRNA水平均能夠顯著下降,差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明siRNA干擾序列效果明顯,而且HIF1和HIF2能夠下調(diào)SDF1mRNA水平。Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)相對(duì)于陰性對(duì)照組siHIF-1α組的HIF-1α和siHIF-2α組HIF-2α均有一定程度的下降(p㩳0.05),但是較mRNA下降的水平為低。ELISA結(jié)果顯示,缺氧的A549細(xì)胞培養(yǎng)上清中能夠檢測(cè)到低含量的SDF1蛋白表達(dá)。siHIF-1α和siHIF-2α組的SDF1蛋白含量相對(duì)于陰性對(duì)照組更低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是siHIF-1α組和siHIF-2α組SDF1蛋白水平無(wú)明顯差異,與mRNA水平的結(jié)果是一致的。 結(jié)論:人肺泡Ⅱ型上皮來(lái)源的A549細(xì)胞在低氧誘導(dǎo)情況下能夠上調(diào)趨化因子SDF1表達(dá),而這一過(guò)程可能受HIF1和HIF2調(diào)控的。HIF1和HIF2在調(diào)控Ⅱ型上皮細(xì)胞的SDF1時(shí)可能起著協(xié)同作用。這一發(fā)現(xiàn)為將來(lái)闡明在IPF發(fā)病過(guò)程中肥大的ATⅡAECs高表達(dá)SDF1相關(guān)機(jī)制及如何募集血液循環(huán)中的fibrocytes運(yùn)動(dòng)至受損部位參與肺纖維化的發(fā)生發(fā)展提供研究基礎(chǔ)。這些也為HIFs/SDF1在IPF發(fā)病過(guò)程中的重要地位及其作為治療靶點(diǎn)的提供一個(gè)新的依據(jù)。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of chemokine SDF1CXCL12 in human alveolar type 鈪，

本文編號(hào)：1515595