本文關(guān)鍵詞： 低氧 A549細胞 SDF1 HIF IPF　出處：《華中科技大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:研究趨化因子SDF1(CXCL12)在常氧及低氧時人肺泡Ⅱ型上皮細胞(A549細胞)中的表達情況,及其表達與HIF1及HIF2關(guān)系。 方法:將A549細胞置于低氧(1.5%氧濃度)培養(yǎng)箱和常氧(21%氧濃度)培養(yǎng)箱中進行干預(yù)放置48h后,用實時定量RT-PCR檢測常氧組和低氧組, SDF1,HIF-1α及HIF-2α的mRNA水平。而后通過轉(zhuǎn)染化學(xué)合成的siHIF-1α,siHIF-2α下調(diào)HIF-1α及HIF-2α的mRNA水平。實時定量RT-PCR檢測各組HIF-1α及HIF-2α及SDF1mRNA的變化情況。用western blot檢測HIF-1α及HIF-2α蛋白水平的變化,ELISA檢測SDF1在各組蛋白水平的變化。 結(jié)果:實時定量RT-PCR檢測的結(jié)果,常氧組HIF-1α和HIF-2α的mRNA有一定水平的表達,但是SDF1mRNA水平幾乎檢測不到。相對于正常組,缺氧48h組的A549細胞中的HIF-1α,HIF-2α及SDF1mRNA水平均明顯增高(p㩳0.05)。隨后進行的RNA干擾,通過熒光實時定量RT-PCR發(fā)現(xiàn)相對于陰性對照組,siHIF-1α組的HIF-1α和SDF1mRNA,siHIF-2α組的HIF-2α、SDF1mRNA水平均能夠顯著下降,差異具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。說明siRNA干擾序列效果明顯,而且HIF1和HIF2能夠下調(diào)SDF1mRNA水平。Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)相對于陰性對照組siHIF-1α組的HIF-1α和siHIF-2α組HIF-2α均有一定程度的下降(p㩳0.05),但是較mRNA下降的水平為低。ELISA結(jié)果顯示,缺氧的A549細胞培養(yǎng)上清中能夠檢測到低含量的SDF1蛋白表達。siHIF-1α和siHIF-2α組的SDF1蛋白含量相對于陰性對照組更低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。但是siHIF-1α組和siHIF-2α組SDF1蛋白水平無明顯差異,與mRNA水平的結(jié)果是一致的。 結(jié)論:人肺泡Ⅱ型上皮來源的A549細胞在低氧誘導(dǎo)情況下能夠上調(diào)趨化因子SDF1表達,而這一過程可能受HIF1和HIF2調(diào)控的。HIF1和HIF2在調(diào)控Ⅱ型上皮細胞的SDF1時可能起著協(xié)同作用。這一發(fā)現(xiàn)為將來闡明在IPF發(fā)病過程中肥大的ATⅡAECs高表達SDF1相關(guān)機制及如何募集血液循環(huán)中的fibrocytes運動至受損部位參與肺纖維化的發(fā)生發(fā)展提供研究基礎(chǔ)。這些也為HIFs/SDF1在IPF發(fā)病過程中的重要地位及其作為治療靶點的提供一個新的依據(jù)。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of chemokine SDF1CXCL12 in human alveolar type 鈪，

本文編號：1515595