本文關(guān)鍵詞： 螺內(nèi)酯 血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1 醛固酮 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：通過體外培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，給予藥物（螺內(nèi)酯）及LOX-1化學(xué)拮抗劑（聚肌苷酸）作用，并加以醛固酮誘導(dǎo)，觀察藥物組、化學(xué)拮抗劑組及陰性對照組、陽性對照組之間血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1（LOX-1）的mRNA表達(dá)的差異，從而證明醛固酮拮抗劑螺內(nèi)酯對臍靜脈內(nèi)皮LOX-1基因表達(dá)的影響，并進(jìn)一步探討這種作用對于某些心血管疾病可能的預(yù)防及延緩作用。 方法：實(shí)驗(yàn)于2011年5月至2011年10月在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室完成。①購買臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株，HUVECs(ECV304)購自南京凱基生物公司，在中心實(shí)驗(yàn)室常規(guī)傳代培養(yǎng)。用凱基-1640培養(yǎng)基+20%胎牛血清（南美HYCLON公司），37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。待細(xì)胞生長成單層達(dá)90%培養(yǎng)面積后，，用0.25%胰酶消化液消化、傳代、凍存。2～5代HUVECs用于實(shí)驗(yàn)。②將培養(yǎng)細(xì)胞分別按細(xì)胞處理方式不同分為6組陰性對照組：普通1640培養(yǎng)基(A組)；不同濃度ALD組：分別加入不同濃度ALD（10、100、1000nmol/L,分別為B、C、D組）；ALD+PolyI組（E組）：先用PolyI（250mg/L）預(yù)先處理2h后再以1000nmol/LALD共同培養(yǎng)24h；ALD+Spiro組（F組）用1000nmol/LALD+1μmol/LSpiro二者共培養(yǎng)24h，③用2～5代HUVECs以2×104接種于24孔板，培養(yǎng)約48h左右待細(xì)胞匯集成單層達(dá)80%培養(yǎng)面積，換無血清1640培養(yǎng)基饑餓培養(yǎng)12h后按不同分組及方法加藥，各組細(xì)胞與藥物共培養(yǎng)24h后收獲細(xì)胞④藥物作用24h后收集細(xì)胞，用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，采用RT-PCR檢測每組細(xì)胞LOX-1mRNA的含量。RT-PCR結(jié)果通過凝膠成像處理系統(tǒng)做積分吸光度測定和分析，以各組目的基因擴(kuò)增條帶的吸光度值與內(nèi)參β-actin條帶的吸光度值之比作為目標(biāo)mRNA的表達(dá)量。 結(jié)果：①實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，體外培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞存活良好，以0.4%的臺盼蘭染液染色后計(jì)數(shù)，細(xì)胞存活率約為96%-98%。②與陰性對照組比較一定濃度醛固酮可以明顯上調(diào)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表面LOX-1mRNA的表達(dá)P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③醛固酮在一定的濃度范圍內(nèi)呈劑量依耐性上調(diào)體外培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1mRNA表達(dá)，即LOX-1mRNA表達(dá)量BCD，三者相互比較P均0.05。④與不同濃度醛固酮組比較一定濃度的螺內(nèi)酯可以有效阻止醛固酮誘導(dǎo)的LOX-1mRNA表達(dá)上調(diào)，P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，⑤螺內(nèi)酯組及聚肌苷酸組與陰性對照組比較，P0.05無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑥螺內(nèi)酯組與多聚肌苷酸組相比P0.05差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（D組與A組相比較P值為0.001,D組與E、F組比較P值分別為0.001及0.002，A組與E、F組相比P值分別為0.584及0.951，E、F之間比較P值為0.544，） 結(jié)論：螺內(nèi)酯可以下調(diào)醛固酮誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)臍靜脈細(xì)胞LOX-1mRNA的表達(dá)，可能具有抗氧化應(yīng)激、抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
[Abstract]:Objective: to culture umbilical vein endothelial cells (HUVEC) in vitro, and to observe the effects of spironolactone and LOX-1 chemical antagonist (polyinosine), and aldosterone induction, to observe the drug group, the chemical antagonist group and the negative control group. The difference of mRNA expression of hemagglutinin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1 LOX-1 between the positive control group, thus proving the effect of aldosterone antagonist spironolactone on the expression of LOX-1 gene in umbilical vein endothelium. The possible preventive and delayed effects of this action on some cardiovascular diseases were also discussed. Methods: the experiment was completed from May 2011 to October 2011 in the Central Laboratory of the first affiliated Hospital of Anhui Medical University. Normal passage culture was carried out in the central laboratory. 20% fetal bovine serum was cultured in Kaiji 1640 medium (37 鈩

本文編號：1509930