本文關(guān)鍵詞： TGF β3 CTGF TIMP1 慢病毒 293細胞　出處：《青島大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：構(gòu)建人轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)、結(jié)締組織生長因子(CTGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP1)基因重組慢病毒多表達質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染293細胞后檢測活性、包裝病毒并探討其作用特點。 方法：應(yīng)用全基因合成技術(shù),以“自剪切多肽2A”串聯(lián)目的基因,并克隆到慢病毒表達質(zhì)粒構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒pLVX-TGF β3-P2A-CTGF-T2A-TIMP1。轉(zhuǎn)染293細胞后,應(yīng)用RT-PCR和Western-Blot技術(shù)分別檢測轉(zhuǎn)染后不同時間點目的基因的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平。 結(jié)果：RT-PCR和Western-blot技術(shù)檢測結(jié)果顯示重組質(zhì)粒成功表達了目的基因并于轉(zhuǎn)染后48小時左右達到峰值,“2A”結(jié)構(gòu)下游基因蛋白質(zhì)表達量約為上游基因的80%。經(jīng)慢病毒包裝后獲得5X108TU/ml滴度的活性病毒。 結(jié)論：成功構(gòu)建了攜帶人TGFβ3、CTGF和TIMP1基因的慢病毒多表達質(zhì)粒并收獲較高滴度的活性病毒,為轉(zhuǎn)染椎間盤髓核細胞和動物實驗打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to construct recombinant lentivirus multi expression plasmid of human transforming growth factor beta 3 (TGF beta 3), connective tissue growth factor (CTGF) and matrix metalloproteinase inhibitor (TIMP1). After transfection into 293 cells, we detected the activity, wrapped the virus and discussed its action characteristics.
Method: using the gene synthesis technology, with "self splicing polypeptide 2A" tandem gene, and cloned into the lentiviral expression plasmid to construct the recombinant lentiviral plasmid pLVX-TGF beta 3-P2A-CTGF-T2A-TIMP1. transfected 293 cells after transfection were detected after different time points of target gene and protein expression levels of mRNA using RT-PCR and Western-Blot technology.
Results: the RT-PCR and Western-blot results showed that the recombinant plasmid gene was expressed successfully in 48 hours after transfection and reached the peak, the "2A" structure of downstream gene protein expression about live viral upstream gene 80%. by lentiviral packaging after 5X108TU/ml titer.
Conclusion: the lentivirus multi expression plasmid carrying human TGF beta 3, CTGF and TIMP1 genes was successfully constructed, and the higher titer of the active virus was harvested, which laid the foundation for transfection of intervertebral disc nucleus pulposus cells and animal experiments.

【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R373

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本文編號：1471026