本文關(guān)鍵詞： 木犀草素 Fas/FasL 蛋白激酶B X-連鎖凋亡抑制蛋白　出處：《南京師范大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：Fas屬于腫瘤壞死因子(TNF)受體家族,是一種工型跨膜糖蛋白,其與天然配體FasL或拮抗性抗Fas抗體結(jié)合可以活化caspases級聯(lián)反應(yīng),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。但是現(xiàn)在存在的問題是：①并不是所有有Fas表達的細(xì)胞都對Fas/FasL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡敏感,細(xì)胞內(nèi)存在多種抗凋亡因子。②在體內(nèi)的實驗發(fā)現(xiàn)給小鼠靜脈注射FasL對肝臟有很大的毒性,會引起嚴(yán)重的肝損傷,臨床前試驗中只能用于局部的治療。因此尋找克服Fas-誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的抗性的機制并且降低FasL的用量是迫不及待的事情。 木犀草素是廣泛存在于蔬菜水果和藥用植物中的一種黃酮類物質(zhì)。木犀草素有兩個苯環(huán)和一個含有兩個氧原子的環(huán),含有不飽和的鍵,有兩個碳雙鍵,在第四位有個羧基。研究表明Luteolin有抗癌、抗氧化、抗炎及保護心臟等作用。Luteolin的抗癌作用是通過干擾腫瘤細(xì)胞代謝、抑制細(xì)胞生長、抑制激酶活化及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等多種方式實現(xiàn)的�，F(xiàn)在越來越多的研究開始關(guān)注Luteolin在腫瘤細(xì)胞凋亡中的敏化作用。 Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶。Akt的活化需要雙重調(diào)控：①Akt需要轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜上去；②Akt的Thr308和Ser473需要磷酸化。Akt通過磷酸化調(diào)節(jié)其下游靶蛋白參與調(diào)控如抑制細(xì)胞凋亡、促進細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖等。Akt磷酸化凋亡抑制蛋白XIAP的Ser87,抑制它的泛素化降解從而抑制細(xì)胞凋亡。 在這篇文章中我們發(fā)現(xiàn)在HepG2細(xì)胞中Luteolin增強FasL引起的細(xì)胞凋亡。這種敏化作用是通過抑制Akt的活化和促進凋亡抑制蛋白(XIAP)的降解實現(xiàn)的。XIAP作為Akt的下游靶點可以保護細(xì)胞免于細(xì)胞的凋亡。我們的實驗發(fā)現(xiàn)高劑量的Luteolin可以直接下調(diào)Akt的蛋白水平,更有趣的是低劑量的Luteolin位點特異性的抑制Akt的Ser473位點的磷酸化而對Akt的整體水平?jīng)]有影響。聯(lián)用Luteolin和FasL處理細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)Luteolin可以抑制FasL引起的Akt的磷酸化,我們過表達野生型Akt后Luteolin和FasL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡明顯減少。我們還發(fā)現(xiàn)Luteolin和FasL處理細(xì)胞后,Akt的下游的XIAP發(fā)生了明顯的下調(diào)。過表達野生型Akt質(zhì)粒后明顯逆轉(zhuǎn)了Luteolin和FasL誘導(dǎo)p-Akt和XAIP的下調(diào)。我們還用Akt的抑制劑LY294002作為一個陽性對照發(fā)現(xiàn)Luteolin與其有相同的抑制Akt磷酸化的作用。這些結(jié)果表明抑制Akt的活化和促進XIAP的降解在Luteolin敏化Fas-誘導(dǎo)的凋亡中發(fā)揮了重要的作用。
[Abstract]:Fas belongs to the TNF receptor family and is a transmembrane glycoprotein. It can activate the cascade reaction of caspases by binding with natural ligand FasL or antagonistic anti Fas antibody. But the problem now is that not all Fas-expressing cells are sensitive to Fas/FasL-induced apoptosis. A variety of anti-apoptotic factor-2 was found in vivo. It was found that intravenously injected FasL in mice was toxic to the liver and could cause severe liver injury. Preclinical trials can only be used for local treatment. Therefore, it is urgent to find mechanisms to overcome Fas-induced apoptosis resistance and reduce the dosage of FasL. Luteolin is a flavonoid found widely in vegetables, fruits and medicinal plants. Luteolin has two benzene rings and one ring containing two oxygen atoms, containing unsaturated bonds and two carbon double bonds. There is a carboxyl group in position 4th. Studies have shown that Luteolin has anti-cancer, anti-oxidative, anti-inflammatory and cardioprotective effects. Luteolin acts as an anticancer agent by interfering with the metabolism of tumor cells. Nowadays, more and more researches have focused on the sensitization of Luteolin in tumor cell apoptosis by inhibiting cell growth, inhibiting kinase activation and inducing apoptosis. The activation of Akt is a serine / threonine kinase. Akt needs to be transferred to the plasma membrane. 2 the Thr308 and Ser473 of Akt need phosphorylation. Akt regulates its downstream target proteins by phosphorylation, such as inhibition of apoptosis. Promote cell cycle and cell proliferation. Akt phosphorylated apoptosis inhibitor XIAP Ser87, inhibit its Ubiquitin degradation and inhibit cell apoptosis. In this paper, we found that Luteolin enhances apoptosis induced by FasL in HepG2 cells by inhibiting the activation of Akt and promoting apoptosis inhibitor proteins (. XIAP). As a downstream target of Akt, we found that high doses of Luteolin could directly down-regulate the protein level of Akt. What is more interesting is that low doses of Luteolin sites specifically inhibit the phosphorylation of Ser473 sites of Akt without affecting the overall level of Akt. L-treated cells showed that Luteolin could inhibit the phosphorylation of Akt induced by FasL. After overexpression of wild-type Akt, apoptosis induced by Luteolin and FasL was significantly reduced. We also found that Luteolin and FasL treated the cells. The down-regulation of XIAP downstream of Akt was observed. Overexpression of wild type Akt plasmid reversed the down-regulation of p-Akt and XAIP induced by Luteolin and FasL. LY294002, an inhibitor of Akt, as a positive control, found that Luteolin had the same inhibitory effect on Akt phosphorylation as Luteolin. These results suggest that Luteolin inhibits the activation of Akt and promotes XI. AP degradation plays an important role in Luteolin-sensitized Fas- induced apoptosis.
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【共引文獻】

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本文編號：1468370