本文關(guān)鍵詞： 人胚胎干細(xì)胞 樹(shù)突細(xì)胞 microRNA- 誘導(dǎo)分化 TGFBR　出處：《中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:建立人胚胎干細(xì)胞(ESC)向樹(shù)突細(xì)胞誘導(dǎo)分化的新策略,探討microRNA-223(miR-223)在人胚胎干細(xì)胞源樹(shù)突細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)程中的調(diào)控作用及其分子機(jī)制。方法:采用人胚胎干細(xì)胞在胞外基質(zhì)Ⅳ型膠原蛋白上直接貼壁培養(yǎng),加入造血生長(zhǎng)因子分步向造血干/祖細(xì)胞、共同髓系祖細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞誘導(dǎo)的方案,通過(guò)形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)和造血集落形成實(shí)驗(yàn)鑒定分化細(xì)胞;人胚胎干細(xì)胞經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)miR-223或抑制其表達(dá)后啟動(dòng)向樹(shù)突細(xì)胞分化,比較不同miR-223表達(dá)水平下分化細(xì)胞中造血集落形成的數(shù)目和表面標(biāo)記物的表達(dá)量;應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)驗(yàn)證TGFBR3是miR-223發(fā)揮作用的直接靶標(biāo)。結(jié)果:人ES細(xì)胞成功誘導(dǎo)為樹(shù)突細(xì)胞,分化細(xì)胞中表達(dá)CD83比例可達(dá)82%,在整個(gè)分化過(guò)程中miR-223表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì);添加miR-223模擬物組分化細(xì)胞表達(dá)CD34~+CD45~+、CD34~+CD45~+以及CD83~+的比例均顯著高于添加miR-223抑制劑組和陰性對(duì)照組(P0.05);添加miR-223抑制劑組分化細(xì)胞表達(dá)各階段細(xì)胞標(biāo)記物顯著低于陰性對(duì)照組(P0.05);添加miR-223模擬物組分化細(xì)胞出現(xiàn)大約759個(gè)CFU/105細(xì)胞數(shù),顯著高于其它各組(P0.05);雙熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果顯示,miR-223顯著抑制TGFBR3-3'UTR結(jié)構(gòu)的熒光素酶活性(下降了37%)(P0.05),而且TGFBR3-3'UTR突變型的熒光素酶活性顯著高于野生型(P0.01);隨著向樹(shù)突細(xì)胞分化成熟,添加miR-223模擬物組分化細(xì)胞表達(dá)TGFBR3水平逐漸下降,而添加miR-223抑制劑組由于內(nèi)源性miR-223受到抑制而明顯上調(diào)TGFBR3的表達(dá)。結(jié)論:miR-223調(diào)控人胚胎干細(xì)胞向樹(shù)突細(xì)胞分化,可能通過(guò)直接作用于靶標(biāo)TGFBR3而促進(jìn)胚胎干細(xì)胞源樹(shù)突細(xì)胞的產(chǎn)生。
[Abstract]:Objective: to establish a new strategy for differentiation of human embryonic stem cells (ESCs) into dendritic cells. MicroRNA-223 miR-223). Regulation and molecular mechanism of dendritic cells derived from human embryonic stem cells methods: human embryonic stem cells were cultured on extracellular matrix type 鈪，

本文編號(hào)：1464392