發(fā)布時間：2018-01-25 04:35

  本文關(guān)鍵詞： 人脂肪來源干細(xì)胞 成脂分化 成骨分化 成軟骨分化　出處：《吉林大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本實驗以人脂肪來源干細(xì)胞(human adipose-derived stem cells, hASCs)為研究對象,體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒定,并向成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化,對其體外自我更新能力和多向分化潛能進(jìn)行評價,為組織工程和臨床軟組織器官重建提供種子細(xì)胞。 本研究采用膠原酶消化法和貼壁篩選法相結(jié)合從人手術(shù)切除的脂肪組織中提取脂肪來源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells, ASCs),倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),MTS法繪制生長曲線,進(jìn)行凍存復(fù)蘇實驗,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志,對提取培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。體外誘導(dǎo)hASCs向成脂、成骨及成軟骨分化。 結(jié)果成功從人脂肪組織中分離、提取了hASCs并在體外擴(kuò)增。hASCs呈成纖維細(xì)胞樣生長,生長曲線顯示細(xì)胞增殖需經(jīng)歷生長滯緩期、對數(shù)增殖期和生長平臺期,其增生分裂能力很活躍。hASCs在凍存復(fù)蘇后,存活率較高,而且其增殖能力和多向分化能力未見明顯改變。流式細(xì)胞儀檢測hASCs表面標(biāo)志,表達(dá)CD29,CD44,CD73,CD90,CD105和CD166,不表達(dá)CD31,CD34,CD45和HLA-DR,符合hASCs表面標(biāo)志的特點。成脂誘導(dǎo)14d后,細(xì)胞體積增大,胞漿內(nèi)充滿圓形脂滴,呈葡萄串狀,有的脂滴互相融合呈現(xiàn)大的脂滴。油紅O染色顯示為亮紅色的顆粒,證明其確為脂肪滴。成骨誘導(dǎo)28d后,經(jīng)Alizarin Red S(硫酸茜紅素S)染色可見:細(xì)胞呈復(fù)層生長,細(xì)胞外富集細(xì)胞外基質(zhì),基質(zhì)經(jīng)染色呈現(xiàn)橘紅色,數(shù)量多,成結(jié)節(jié)狀或片狀存在,說明確有鈣鹽沉積,并出現(xiàn)鈣鹽結(jié)節(jié)。成軟骨誘導(dǎo)42d后,經(jīng)Alcian Blue/ Sirius Red(阿辛蘭/天狼猩紅)染色后hASCs出現(xiàn)重新排列,細(xì)胞排列規(guī)則,中央?yún)^(qū)似透明軟骨樣結(jié)構(gòu),出現(xiàn)豐富的藍(lán)染軟骨基質(zhì),細(xì)胞球中間出現(xiàn)似軟骨陷窩狀結(jié)構(gòu),陷窩中央似軟骨細(xì)胞,而周圍則為染成紅色的膠原成分。 綜上所述,成功了建立了一種簡單有效的體外分離和培養(yǎng)hASCs的方法。獲得的hASCs生長增殖旺盛、保存方便,具有多向分化能力。hASCs可以作為細(xì)胞移植治療和組織工程理想的種子細(xì)胞。
[Abstract]:Human adipose - derived stem cells ( hASCs ) were isolated , cultured , amplified and identified from human adipose - derived stem cells ( hASCs ) , and were evaluated in vitro self - renewal ability and multi - directional differentiation potential to provide seed cells for tissue engineering and clinical soft tissue organ reconstruction . Fat - derived stem cells ( ASCs ) were extracted from adipose tissue excised from human operation by collagenase digestion and adherent screening . The growth curve was observed by MTS method . The cell surface markers were detected by flow cytometry , and the cultured cells were identified . hASCs were isolated from human adipose tissue , hASCs were extracted and expanded in vitro . hASCs were cultured in vitro . In conclusion , a simple and effective method for isolating and culturing hASCs in vitro has been successfully established . The hASCs can be used as seed cells for cell transplantation and tissue engineering .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：1461998