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常壓低溫等離子體對小鼠傷口定植綠膿桿菌的作用研究

發(fā)布時間:2018-01-22 00:53

  本文關(guān)鍵詞: 常壓低溫等離子體 傷口愈合 BalB/c小鼠 細菌定植 常壓低溫等離子體 銅綠假單胞菌 細菌定植 毒力因子 常壓低溫等離子體 銅綠假單胞菌 生物膜 藻酸鹽 出處:《華中科技大學(xué)》2011年博士論文 論文類型:學(xué)位論文


【摘要】:第一部分常壓低溫等離子體抑制小鼠傷口細菌定植并促進傷口愈合目的本實驗用于評估常壓低溫等離子體在BalB/c小鼠傷口愈合中的作用。方法在每只小鼠(n=80)的后背鉆取兩個直徑為6mm的皮膚傷口,并將小鼠隨機平分為兩組:第1組作為治療組應(yīng)用常壓低溫等離子體進行治療,第2組作為對照組。在術(shù)后(POD)第4、7、10和14天從每組取5只小鼠,以傷口愈合百分數(shù)作為指標進行評估。在術(shù)后(POD)第1、4、7、10、14、21、28和35天從每組再取1只小鼠進行安樂死,取每只小鼠兩個傷口的周圍組織,石蠟包埋,蘇木精伊紅染色,應(yīng)用改良評分系統(tǒng)評估傷口愈合情況。 結(jié)果組織學(xué)檢測結(jié)果證實,兩組小鼠的傷口愈合情況有明顯差異,在術(shù)后第7天急性炎癥反應(yīng)、術(shù)后第4天和第7天肉芽組織數(shù)量、術(shù)后第10天肉芽組織纖維母細胞形成、術(shù)后第7天和第10天表皮細胞再生以及術(shù)后第7天和第10天新生血管形成這些指標中,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論常壓低溫等離子體能夠促進小鼠傷口愈合。進一步的體外試驗發(fā)現(xiàn),常壓低溫等離子體能抑制細菌增殖,提示其促進傷口愈合的作用可能與抑制細菌定植有關(guān)。 第二部分常壓低溫等離子體對銅綠假單胞菌毒力因子表達的影響 目的探討常壓低溫等離子體對銅綠假單胞菌毒力因子表達的影響。 方法分別將銅綠假單胞菌PAO1株和經(jīng)常壓低溫等離子體照射后的銅綠假單胞菌PA0911、PA0912、PA0913加入到銅綠假單胞菌的液體培養(yǎng)基(OD600=0.05)中,應(yīng)用剛果紅彈性蛋白檢測其彈性蛋白酶活性;通過氯仿、鹽酸萃取法對綠膿菌素進行定量檢測。 結(jié)果與PAO1株相比,經(jīng)常壓低溫等離子體照射后的銅綠假單胞菌PA0911、PA0912、PA0913株的生存能力明顯減弱,彈性蛋白酶活性降低,綠膿菌素含量減少。 結(jié)論低壓等離子體能夠抑制小鼠傷口定植銅綠假單胞菌毒力因子的表達,降低其生存能力。 第三部分常壓低溫等離子體對銅綠假單胞菌生物膜形成的影響及機制 目的探討常壓低溫等離子體對銅綠假單胞菌生物膜形成的影響及其可能的機制。 方法應(yīng)用改良平板法分別建立銅綠假單胞菌PAO1株和經(jīng)常壓低溫等離子體照射后的銅綠假單胞菌PA0912的生物膜模型,結(jié)晶紫染色后作生物膜定量分析;RT-PCR法測定兩種菌株在生物膜形成階段不同時間點藻酸鹽合成基因algD的表達情況。 結(jié)果銅綠假單胞菌PAO1株在第3天形成成熟生物膜,而銅綠假單胞菌PA0912株則喪失了形成生物膜的能力;在本實驗的整個觀察期中,銅綠假單胞菌PA0912株的algD基因表達水平都要明顯低于PAO1株。 結(jié)論常壓低溫等離子體能夠阻止銅綠假單胞菌形成生物膜,其機制可能與抑制藻酸鹽合成基因algD的表達有關(guān)。
[Abstract]:The purpose of this study was to evaluate the effect of atmospheric low temperature plasma on wound healing in BalB/c mice. Rats (. Two skin wounds with a diameter of 6 mm were drilled from the back of the nong 80). The mice were randomly divided into two groups: group 1 was treated with low temperature plasma under normal pressure and group 2 as control group. Five mice were taken from each group on 10 and 14 days to evaluate the wound healing percentage. On the 28th and 35th day, another mouse was taken from each group for euthanasia. The tissue around the wound was embedded in paraffin, stained with hematoxylin eosin, and the wound healing was evaluated by the improved scoring system. Results the results of histological examination confirmed that there was a significant difference in wound healing between the two groups. The acute inflammatory reaction was observed on the 7th day after operation and the number of granulation tissue on the 4th and 7th day after operation. On the 10th day after operation, fibroblast formation in granulation tissue, epidermal cell regeneration on the 7th and 10th day after operation, and angiogenesis on the 7th and 10th day after operation. The difference was statistically significant (P 0.05). Conclusion Atmospheric low temperature plasma can promote wound healing in mice. Further experiments in vitro showed that atmospheric low temperature plasma could inhibit the proliferation of bacteria. The results suggest that its effect on wound healing may be related to the inhibition of bacterial colonization. The second part: effect of low temperature plasma on virulence factor expression of Pseudomonas aeruginosa Objective to investigate the effect of low temperature plasma on virulence factor expression of Pseudomonas aeruginosa. Methods Pseudomonas aeruginosa PAO1 strain and P. aeruginosa PA0911 / PA0912 were irradiated by plasma under normal pressure and low temperature, respectively. PA0913 was added to the liquid culture medium of Pseudomonas aeruginosa OD600. 05) and the activity of elastase was detected by Congo erythroelastin. Pseudomonas aeruginosa was determined quantitatively by chloroform and hydrochloric acid extraction. Results compared with PAO1 strain, the survival ability of Pseudomonas aeruginosa strain PA0911 / PA0912 / PA0913 was significantly decreased after plasma irradiation under constant pressure and low temperature. The activity of elastase decreased and the content of pyocyanin decreased. Conclusion low pressure plasma can inhibit the expression of virulence factor of Pseudomonas aeruginosa and decrease its viability. The effect of low temperature plasma at atmospheric pressure on the biofilm formation of Pseudomonas aeruginosa and its mechanism Objective to investigate the effect of atmospheric low temperature plasma on the biofilm formation of Pseudomonas aeruginosa and its possible mechanism. Methods the biofilm models of Pseudomonas aeruginosa PAO1 strain and PA0912 were established by modified plate method. Quantitative analysis of biofilm was made after staining with crystal violet. The expression of alginate biosynthesis gene algD at different time points in biofilm formation of two strains was determined by RT-PCR method. Results Pseudomonas aeruginosa PAO1 strain formed mature biofilm on the 3rd day, while PA0912 strain lost the ability to form biofilm. During the whole observation period, the algD gene expression level of Pseudomonas aeruginosa PA0912 strain was significantly lower than that of PAO1 strain. Conclusion low temperature plasma can prevent Pseudomonas aeruginosa from forming biofilm, and its mechanism may be related to the inhibition of the expression of alginate synthesis gene algD.
【學(xué)位授予單位】:華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2011
【分類號】:R378

【共引文獻】

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本文編號:1453096

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