本文關(guān)鍵詞： 妊娠 母-胎界面 γδT細胞 滋養(yǎng)細胞 IL-10 CXCL16 增殖 凋亡 侵襲　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：生理妊娠類似于同種異體移植。作為同種移植物的胚胎在母體內(nèi)存活直至分娩,反映母體對胚胎的免疫耐受；母體對胚胎產(chǎn)生免疫排斥則導(dǎo)致妊娠失敗。揭示母-胎免疫耐受的確切機制,將對人類自然流產(chǎn)等妊娠相關(guān)疾病的防治具有重要意義,并將對移植免疫學(xué)和腫瘤免疫學(xué)的研究產(chǎn)生推動作用。 母-胎界面主要包括滋養(yǎng)細胞、蛻膜基質(zhì)細胞、蛻膜腺上皮細胞以及免疫細胞。多年來人們從不同角度研究在母-胎界面發(fā)生的生物學(xué)事件,以闡述母-胎免疫調(diào)節(jié)機制。母-胎界面存在大量淋巴細胞,與滋養(yǎng)養(yǎng)細胞緊密接觸。由此可見,蛻膜淋巴細胞、蛻膜功能細胞與滋養(yǎng)細胞三者之間必然存在著密切的功能調(diào)控,共同參與母-胎免疫調(diào)節(jié)。蛻膜γδT細胞雖然數(shù)量有限,但其功能卻不容忽視。我們課題組前期工作以趨化因子和受體為切入點,已經(jīng)闡明母-胎界面的滋養(yǎng)細胞通過CXCL16/CXCR6這對特異的趨化因子募集γδT細胞到母-胎界面。本研究進一步解析γδT細胞在母-胎界面的調(diào)節(jié)作用,通過建立人早孕蛻膜γδT細胞和滋養(yǎng)細胞共培養(yǎng)體系,擬闡明蛻膜γδT細胞與滋養(yǎng)細胞之間的相互調(diào)節(jié)機制。 第一部分 人早孕期母-胎界面γδT細胞表型 目的：分析人早孕期母體內(nèi)γδT細胞比例變化及表型特征,以及胞內(nèi)細胞因子的表達。 方法：收集正常早孕婦女以及生育年齡正常非孕婦女外周血和蛻膜(內(nèi)膜)組織,采用流式細胞術(shù)分析外周血及蛻膜免疫細胞中γδT細胞的比例；應(yīng)用免疫磁珠細胞分選技術(shù)分離純化蛻膜γδT細胞,應(yīng)用流式細胞儀檢測蛻膜γδT細胞上CD4和CD8以及胞內(nèi)6個細胞因子的表達(IL-2, TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-10, TGF-β1)。 結(jié)果：正常早孕婦女外周血與蛻膜局部γδT細胞數(shù)量比正常未孕婦女均明顯增多,并且蛻膜γδT細胞比例明顯高于外周血。這些結(jié)果提示孕婦體內(nèi)γδT細胞數(shù)量增多與正常妊娠維持有關(guān)。分離純化蛻膜γδT細胞,可獲得純度在95%以上的γδT細胞。蛻膜γδT細胞是CD4-和CD8-雙陰性細胞。γδT細胞高水平表達TGF-β和IL-10,低水平表達TNF-α和INF-γ,幾乎不表達IL-2和IL-4。 結(jié)論：蛻膜γδT細胞產(chǎn)生大量調(diào)節(jié)性細胞因子,在蛻膜局部形成Th2型優(yōu)勢的免疫微環(huán)境,從而有利于母-胎耐受的形成。 第二部分 人早孕期蛻膜γδT細胞對滋養(yǎng)細胞生物學(xué)功能的調(diào)節(jié)作用 目的：探討人早孕期蛻膜γδT細胞對滋養(yǎng)細胞生物學(xué)功能的調(diào)控作用。 方法：收集早孕蛻膜組織,分離蛻膜免疫細胞,磁珠分選獲得蛻膜γδT細胞。收集早孕絨毛組織,原代分離培養(yǎng)早孕期滋養(yǎng)細胞。建立γδT細胞和滋養(yǎng)細胞的共培養(yǎng)體系,培養(yǎng)48h后,采用BrdU細胞增殖ELISA檢測試劑盒,檢測滋養(yǎng)細胞的增殖情況；采用AnnexinⅤ/PI雙染試劑盒,流式細胞術(shù)分析滋養(yǎng)細胞的凋亡情況；通過建立transwell體系,分析γδT細胞對滋養(yǎng)細胞的侵襲能力的影響。 結(jié)果：蛻膜γδT細胞誘導(dǎo)滋養(yǎng)細胞增殖和侵襲,而IL-10中和性抗體則明顯抑制這一誘導(dǎo)作用,但TGF-β的中和性抗體則無此作用；用重組人IL-10處理滋養(yǎng)細胞,則明顯促進滋養(yǎng)細胞增殖和侵襲,而重組人TGF-β則無此作用。蛻膜γδT細胞抑制滋養(yǎng)細胞凋亡,而IL-10中和性抗體則明顯拮抗這一抑制作用,但TGF-β中和性抗體則無此作用；用重組人IL-10處理滋養(yǎng)細胞,則明顯抑制滋養(yǎng)細胞凋亡,而重組人的TGF-β則無此作用。 結(jié)論：蛻膜γδT細胞主要通過分泌IL-10促進滋養(yǎng)細胞增殖和侵襲,以及抑制滋養(yǎng)細胞凋亡。因此,γδT細胞可改善滋養(yǎng)細胞的生物學(xué)行為,有利于胎盤的形成。 第三部分 人早孕期滋養(yǎng)細胞對蛻膜γδT細胞生物學(xué)功能的調(diào)節(jié)作用 目的：探討人早孕期滋養(yǎng)細胞對蛻膜γδT細胞的功能調(diào)節(jié)作用 方法：以滋養(yǎng)細胞和γδT細胞共培養(yǎng)體系為基礎(chǔ)平臺,添加或者不添加CXCL16中和性抗體和人重組CXCL16細胞因子,采用流式細胞術(shù)分析滋養(yǎng)細胞及CXCL16/CXCR6對γδT細胞增殖的調(diào)節(jié)作用,并分析滋養(yǎng)細胞對γδT細胞顆粒酶B表達的調(diào)節(jié)作用。采用ELISA分析培養(yǎng)上清液中細胞因子TGF-β及IL-10的變化。 結(jié)果：滋養(yǎng)細胞能夠促進γδT細胞的增殖,而CXCL16的中和性抗體則明顯抑制這一促進作用；重組人CXCL16單獨處理蛻膜γδT細胞也明顯促進蛻膜γδT細胞增殖。滋養(yǎng)細胞或人重組CXCL16均可降調(diào)節(jié)γδT細胞GrB的表達；抗人CXCL16中和性抗體可拮抗γδT細胞降調(diào)解GrB表達的作用。滋養(yǎng)細胞促進γδT細胞產(chǎn)生TGF-β和IL-10。 結(jié)論：人早孕期,滋養(yǎng)細胞通過分泌CXCL16促進蛻膜γδT細胞增殖,并產(chǎn)生TGF-β和IL-10增多,形成一個利于妊娠的良性循環(huán)；滋養(yǎng)細胞通過分泌CXCL16下調(diào)蛻膜γδT細胞顆粒酶B的水平,降調(diào)節(jié)γδT細胞對胚胎組織的損傷作用,從而維持正常妊娠。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R339.22

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本文編號：1451601